蒙醫溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響

王月洪,阿古拉,斯楞格,烏云格日樂,青林

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蒙醫溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響

王月洪,阿古拉,斯楞格,烏云格日樂,青林

(內蒙古醫科大學,呼和浩特 010110)

通過觀察蒙醫溫針對失眠模型大鼠自主活動的影響及對戊巴比妥鈉致睡眠時間的影響,探討蒙醫溫針的改善睡眠作用。①選用戊巴比妥鈉誘導睡眠的方法,取健康雄性SD大鼠30只,分為空白對照組和蒙醫溫針組,每組15只,以戊巴比妥鈉致眠時間為觀察指標。②采用對氯苯丙氨酸致失眠大鼠模型,取健康雄性SD大鼠60只,分為空白對照組、失眠模型組、蒙醫溫針組和地西泮注射液組,每組15只,觀察大鼠的自主活動和一般情況。蒙醫溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統計學意義(＞0.05)。蒙醫溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異有統計學意義(＜0.01)。失眠模型組、蒙醫溫針組和地西泮注射液組大鼠造模前體重較空白對照組減輕(均＜0.01)。失眠模型組大鼠治療后體重與空白對照組比較,差異具有統計學意義(＜0.01)。蒙醫溫針組和地西泮注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統計學意義(＜0.01)。失眠模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組(＜0.01)。蒙醫溫針組和地西泮注射液組大鼠活動時間明顯低于失眠模型組(均＜0.05)。失眠模型組大鼠站立次數明顯高于空白對照組(＜0.05),蒙醫溫針組和地西泮組大鼠站立次數明顯低于失眠模型組(＜0.05,＜0.01)。蒙醫溫針對大鼠有鎮靜作用和改善睡眠功能作用。

針灸療法;蒙醫;睡眠;自主活動;大鼠;失眠模型

失眠是睡眠的發生或維持障礙,影響日常生活的一類病癥,屬蒙醫“赫依”病范疇。西醫治療本病仍存在難以根治、不同程度地產生不良反應、耐藥性和依賴性等問題。通過文獻記載和近年來的臨床觀察發現,蒙醫溫針對失眠癥的療效顯著,同時具有無毒副反應、安全可靠等特點,其最大優勢在于可以避免口服藥物所致的副反應。因此,尋找適當有效的針刺干預措施是臨床與實驗研究的重要課題之一。本實驗采用戊巴比妥鈉誘導大鼠睡眠的方法,觀察蒙醫溫針對SD大鼠睡眠的影響,并選用對氯苯丙氨酸致失眠大鼠模型,采用曠場試驗(OFT試驗),觀察失眠大鼠的自主活動和一般情況,探討蒙醫溫針改善睡眠的作用,現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康雄性SPF級SD大鼠80只,體重(180±220)g,由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供[許可證號SCXK-(軍)2007-004]。

1.2 主要儀器與試劑

電子天平(BS124S,賽多利斯提供);MLY-Ⅰ型蒙醫療術溫針儀(內蒙古醫學院蒙醫藥學院研制,專利號ZL201120058078.0);特制蒙醫銀針(0.5 mm×30 mm,內蒙古元陽中蒙醫科技開發有限責任公司提供);OFT -100自發活動視頻分析系統(成都泰盟科技有限公司提供);戊巴比妥鈉、對氯苯丙氨酸由sigma提供;地西泮注射液(2 mL:10 mg)由西安利君沙制藥有限責任公司提供(國藥準字H61022214)。

2 方法

2.1 蒙醫溫針對戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間的影響

2.1.1 實驗分組及處理方法

取大鼠30只,隨機分為空白對照組和蒙醫溫針組,每組15只。隨機分組標號后,在室溫18℃～28℃、相對濕度40%～50%的條件下飼養。蒙醫溫針組根據蒙醫經典理論和臨床治療有效穴取頂會穴、赫依穴、心穴[1],每次取1個穴位。頂會穴位于兩眉正中線與兩耳葉上緣連線在頭頂上的交叉處;赫依穴位于第1胸椎上凹正中;心穴位于第7胸椎下凹正中。將大鼠固定后,用特制銀針斜刺,再接蒙醫療術溫針儀,電流強度為100 mA,溫度為40℃,留針15 min。每日上午8:00 -11:00進行治療,共治療7 d。

空白對照組每日同蒙醫溫針組相同方法固定1次,每次15 min,連續7 d。

2.1.2 觀察指標

兩組治療結束后給予腹腔注射戊巴比妥鈉(45 mg/kg),觀察兩組大鼠翻正反射消失和恢復時間,以翻正反射消失至恢復的時間為睡眠持續時間,開始記錄給藥時間、翻正反射消失時間和翻正反射恢復時間,睡眠以翻正反射消失為指標[2]。分別計算出睡眠潛伏期和睡眠持續時間。記錄大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉后至翻正反射消失時間為睡眠潛伏期,翻正反射消失至大鼠覺醒的時間為睡眠持續時間。

2.2 蒙醫溫針對失眠模型大鼠自主活動的影響

2.2.1 造模方法[3]

將PCPA(300 mg/kg)用弱堿性生理鹽水(pH值為7～8)配置成混懸液備用。失眠模型組、蒙醫溫針治療組和地西泮注射液組大鼠在實驗前2 d每日早晨8:00開始,按1 mL/100 g用量腹腔注射PCPA混懸液,每日1次,連續注射2 d。第1次腹腔注射PCPA混懸液28～30 h后,大鼠出現晝夜節律消失,活動明顯頻繁,白天也活動不停,興奮性增高,攻擊性增強,飲食及二便顯著增多,鼠毛蓬亂無光澤,大便色灰白,整體觀察與對照組明顯不同,表明失眠模型成功。

2.2.2 實驗分組及處理方法

取正常雄性SD大鼠60只,隨機分為空白對照組、失眠模型組、蒙醫溫針治療組和地西泮注射組,每組15只,正常飼養7 d后予以相應處理。①空白對照組不造模,于實驗前連續2 d腹腔注射同PCPA用量體積的弱堿性生理鹽水,第3天開始實驗,與蒙醫溫針組同樣方法固定15 min,連續7 d,其他處理同蒙醫溫針組。②失眠模型組造模2 d,第3天開始實驗,與蒙醫溫針組同樣方法固定15 min,連續7 d,其他處理同蒙醫溫針組。③蒙醫溫針組造模2 d,第3天開始蒙醫溫針治療,連續7 d,針刺方法同實驗1。④地西泮注射液組實驗前2 d造模,第3天開始大鼠腹腔注射地西泮注射液,0.92 mg/kg/d,每日1次,連續7 d。

2.2.3 曠場試驗

參照文獻方法采用曠場試驗方法[4],于失眠第7天(第1次腹腔注射PCPA后7 d),在安靜、暗光條件下檢測。實驗前先置大鼠1次單獨放入OFT-100自發活動實驗儀(箱子長寬均為80 cm,高為40 cm,為內空的立柱體,壁周為透明玻璃)中適應3 min后,操作者握住大鼠尾根部1/3處,輕輕將大鼠放入礦場箱中格內,開始同步錄像計時。觀察5 min內大鼠活動情況。取出大鼠后,用毛巾蘸清水及低濃度酒精徹底擦拭箱底,避免留有氣味而干擾下1只大鼠的觀察結果。

2.3 觀察指標

①中央格停留時間(s),即自大鼠被放入正中格至其有3爪跨離該格的時間;②站立次數,即兩前肢向上抬起離開箱底面或攀伏在側壁上,以后腿支撐使身體豎立的次數;③水平活動時間(s),即水平面上活動的時間。

2.4 統計學方法

所有數據采用SPSS16.0軟件統計處理,采用兩個獨立樣本的檢驗和卡方檢驗,計量資料以均數±標準差表示,以＜0.05表示差異統計學意義。

3 結果

3.1 蒙醫溫針對戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間的影響

由表1可見,蒙醫溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統計學意義(＞0.05)。蒙醫溫針組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異具有統計學意義(＜0.01),提示蒙醫溫針明顯延長戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間。

表 1 兩組戊巴比妥鈉致眠大鼠睡眠潛伏期及睡眠時間比較 (±s)

注:與空白對照組比較1)＜0.01

3.2 蒙醫溫針對失眠模型大鼠自主活動的影響

空白對照組大鼠睡眠、飲食等方面無明顯改變。失眠模型組、蒙醫溫針組及地西泮注射液組大鼠于第1次腹腔注射PCPA混懸液28～30 h后,晝夜節律消失,白天活動增多,飲水進食減少;隨失眠時間的延長,大鼠疲憊、煩躁、皮毛蓬亂無澤愈加明顯,對聲音、光等刺激的警覺性減弱,飲食及二便增多,攻擊性增強。整體觀察與對照組明顯不同,與文獻報道一致,表明模型復制成功。至造模第8天,即實驗當天失眠模型組大鼠仍存在上述行為改變。蒙醫溫針組和地西泮組大鼠在予以針刺刺激和地西泮注射后,表現為安靜、活動減少等現象,睡眠時間、飲水進食、精神狀態等均逐漸恢復。

3.2.1 4組大鼠不同時間點體重比較

入組時各組大鼠體重無明顯差異(=0.202,=1.595)。造模前,各組大鼠體重無明顯差異(=0.701,=0.474)。各組大鼠治療前體重間有顯著性差異(=0.000,=11.156),失眠模型組、蒙醫溫針組和地西泮注射液組較空白對照組減輕(均＜0.01)。治療后,失眠模型組大鼠體重與空白對照組比較,差異具有統計學意義(＜0.01)。蒙醫溫針組和地西泮注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統計學意義(＜0.01);蒙醫溫針組和地西泮注射液組大鼠體重與空白對照組比較,差異均無統計學意義(＞0.05)。

表2 4組大鼠不同時間點體重比較 (±s,g)

注:與空白對照組比較1)＜0.01;與失眠模型組比較2)＜0.01

3.2.2 4組大鼠曠場實驗水平活動和垂直活動參數比較

由表3可見,在水平活動上,失眠模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組大鼠(＜0.01),失眠模型組大鼠在中央格停留時間有增高的趨勢,但與空白對照組大鼠比較,差異無統計學意義(＞0.05)。蒙醫溫針組和地西泮注射液組大鼠活動時間明顯低于失眠模型組大鼠(均＜0.05)。在垂直活動上,失眠模型組大鼠站立次數明顯高于空白對照組大鼠(＜0.05),蒙醫溫針組和地西泮組大鼠站立次數明顯低于失眠模型組大鼠(＜0.05,＜0.01)。

表3 4組大鼠曠場實驗水平活動和垂直活動參數比較 (±s)

注:與空白對照組比較1)＜0.01,2)＜0.05;與失眠模型組比較3)＜0.01,4)＜0.05

4 討論

失眠癥屬蒙醫“身、心、語”功能紊亂而引起人體“三根”平衡失調而導致的“赫依”病。治療的關鍵在于調節“三根”平衡,疏通筋脈,促使機體歸于“三根七素”相對平衡狀態,恢復正常生理功能。蒙醫溫針是集針刺效應、溫熱效應以及穴位特異性刺激為一體,通過抑制“赫依”,平衡“三根”的作用達到治療失眠的目的。頂會穴、赫依穴、心穴是臨床用于治療失眠癥的主要穴位。頂會穴具有安神、調神之功效,對治療“赫依”性喑啞、神志不清、癲狂、視力減退、頭暈、頭痛等起主要作用;赫依穴對治療癲狂、心悸、激蕩、婭結、夜不能寐、舌苔灰白、頸項強直等赫依性疾病起主要作用;心穴位對治療心悸、心抖、癲狂、巴達干赫依性心病、失眠、譫妄、納呆、神志昏迷等起主要作用[5]。蒙醫溫針療法是一種行之有效的治療失眠的方法。本實驗中用到的蒙醫溫針儀是結合現代電子技術研制而成,可以達到傳統蒙醫溫針的作用,且具有操作簡便、溫度可調,安全等特點。

睡眠時間是評測睡眠質量的重要指標。戊巴比妥鈉為一種中樞神經抑制藥,低劑量時主要抑制腦干網狀上行激活系統,大劑量則對中樞神經系統起廣泛抑制,從而出現鎮靜、催眠、麻醉作用,故在一定閾劑量下可致大鼠睡眠。因此選用戊巴比妥鈉誘導大鼠睡眠是被廣泛采用的鎮靜催眠實驗基礎指標[6-7]。

本實驗選用戊巴比妥鈉誘導大鼠睡眠的模型意義在于觀察蒙醫溫針與戊巴比妥鈉的協同作用。以往文獻對戊巴比妥鈉劑量的報道不一,且大鼠自身對戊巴比妥鈉的敏感性也存在差異。因此,前期實驗先對戊巴比妥鈉的閾劑量進行了摸索,結果致大鼠全部睡眠的戊巴比妥鈉閾劑量值為45 mg/kg。本實驗結果顯示,蒙醫溫針與戊巴比妥鈉有協同作用,可延長戊巴比妥鈉誘導大鼠睡眠的時間(＜0.01),提示蒙醫溫針具有鎮靜催眠的作用。

行為是機體的重要功能表現之一,動物的行為是在神經、內分泌系統和運動器官的共同協調作用下形成的,其中以神經調節為主。對行為學進行評估時神經、內分泌等研究領域的重要組成部分。目前行為學評價方法有很多種,如觀測大鼠的一般情況、探究行為、情緒反應、體力情況等。本實驗采用曠場實驗來評價失眠大鼠模型的行為學變化。曠場實驗是評價實驗動物在新異環境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。本實驗在失眠模型大鼠造模過程中,從大鼠一般行為觀察發現,失眠后的大鼠飲食、能量消耗增加,體重下降。大鼠表現倦怠、體毛蓬亂、無光澤。在行為上,長時間失眠后的大鼠興奮性提高,探究行為和攻擊性增強,對環境刺激的警覺性和攻擊性行為增加。至實驗當天時(第一次腹腔注射PCPA后7 d),失眠模型組大鼠仍存在上述行為異常。蒙醫溫針組和地西泮注射液組大鼠在予以針刺刺激和地西泮注射后,睡眠時間、精神狀態、飲水進食、體重等均逐漸恢復。

曠場實驗的參數一般有水平運動參數、垂直運動參數和中央格停留時間。水平運動參數有跑動的距離、速度、時間等,這些參數反映動物的活動度;垂直活動指的是動物的站立、攀壁、修飾等行為,反映動物對新鮮環境的好奇程度。在曠場實驗中大鼠增加在中央格停留時間,減少外周格時間,顯示更少的焦慮樣行為[8]。本實驗結果顯示,失眠模型組大鼠在曠場中央格停留時間高于空白對照組,顯示出失眠模型組比空白對照組減少了焦慮樣行為;失眠模型組大鼠活動時間和站立次數明顯高于空白對照組(＜0.01,＜0.05),顯示模型組的探索性行為增強。蒙醫溫針組大鼠在曠場實驗中活動時間及站立次數均明顯低于失眠模型組(＜0.01,＜0.05),曠場中央格停留時間也比模型組低,表明蒙醫溫針能夠改善失眠所致大鼠焦慮樣行為減少和探索行為和探索行為增強的異常變化。通過實驗研究發現,蒙醫溫針改善失眠的時間、一般情況和行為學改變的作用和地西泮注射液的作用無差別,表明蒙醫溫針同地西泮注射液一樣,可以改善失眠大鼠的行為、情緒變化,緩解大鼠的緊張程度,有鎮靜催眠的效果。

失眠導致的煩躁、倦怠等異常行為和情緒變化不僅影響到人的生活質量,更會影響人的認知、記憶能力。蒙醫溫針能延長失眠時間的同時有效調節失眠模型大鼠精神情緒行為的異常,提示蒙醫溫針具有改善睡眠、安神、鎮靜的作用,而其治療機制還有待進一步研究。

[1] 陳英松.蒙醫實驗療術學[M].呼和浩特:內蒙古大學出版社, 2008:105.

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[4] 孔梅,邢長永,舒曉春.逍遙散干預抑郁癥睡眠障礙模型大鼠海馬5-HT1A受體,5-HT2A受體的變化[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16 (4):157-160.

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[7] 覃軍,劉惠玲,邱孟.半夏厚樸湯對失眠癥治療作用的實驗研究[J].中國中醫藥現代遠程教育,2010,(9):58-59.

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Effect of Mongolian Medical Warm Needling on Rat Sleep Time and Spontaneous Activities

-,,,,.

,010110,

To investigate the improving effect of Mongolian medical warm needling on sleep by observing its effect on spontaneous activities and pentobarbital natrium-induced sleep time in a rat model of insomnia.(1)A method of inducing sleep with pentobarbital natrium was used. Thirty healthy male SD rats were randomly allocated to blank control and Mongolian medical warm needling groups, 15 rats each. Pentobarbital-induced sleep time was taken as an observation index. (2)A rat model of insomnia was made with chlorophenylalanine. Sixty healthy male SD rats were randomly allocated to blank control, insomnia model, Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups, 15 rats each. Rat spontaneous activities and general conditions were observed.There was no statistically significant difference in pentobarbital natrium-induced sleep latency between the Mongolian medical warm needling and blank control groups of rats (＞0.05). There was a statistically significant difference in pentobarbital natrium-induced sleep time between the Mongolian medical warm needling and blank control groups of rats (＜0.01). Body weight decreased in the insomnia model, Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups of rats before model making in comparison with the blank control group (all＜0.01). There was a statistically significant posttreatment difference in body weight between the insomnia model and blank control groups of rats (＜0.01). Body weight increased in the Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups of rats and there was a statistically significant difference in comparison with the blank control group (＜0.01). Activity time was significantly longer in the insomnia model group than in the blank control group (＜0.01). Activity time was significantly shorter in the Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups than in the blank control group (both＜0.05). The number of standing was significantly larger in the insomnia model group than in the blank control group (＜0.05) and significantly smaller in the Mongolian medical warm needling and diazepam injection groups than in the insomnia model group (＜0.05,＜0.01).Mongolian medical warm needling has a calming effect and an improving effect on sleep in rats.

Acupuncture therapy; Mongolian medicine; Sleep; Spontaneous activity; Rats; Insomnia model

1005-0957(2014)05-0472-04

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2014.05.0472

2014-01-23

國家自然科學基金項目(81260571)

王月洪(1981 - ),女,講師,博士

阿古拉(1965 - ),男,教授,博士生導師