ELISA檢測乙肝兩對半的影響因素

陳金圖

福建省泉州市第一醫院檢驗科 福建 泉州 362000

ELISA檢測乙肝兩對半的影響因素

陳金圖

福建省泉州市第一醫院檢驗科 福建 泉州 362000

目的:對Elisa法對乙肝兩對半的檢測產生的影響，做有關的分析。方法:分析了我院自2013年9月到2014年9月接收的乙肝兩對半檢測患者124例，根據其相關的資料分析Elisa對乙肝兩對半檢測產生的影響。結果:得出Elisa法檢測乙肝兩對半的影響因素有試劑盒對檢測結果的影響、檢測人員和采集的標本對檢測結果的影響、加樣過程中的影響、藥物的影響等。結論:對于乙肝兩對半的檢測，采用Elisa法檢測需要根據其具體的影響因素，排出對檢測結果的影響。

Elisa法乙肝兩對半影響因素處理方法

Elisa法由于其檢測方法的特異性比較強，較高的靈敏性，在操作時世紀較穩定等特點被廣泛應用于醫學中對乙肝兩對半的檢測當中，在現在醫學水平發展比較先進的時代，Elisa法檢測乙肝兩對半仍存在許多影響因素，比如實驗環境的差異，檢測操作人員的熟練程度以及所用試劑盒的質量不同等等，這些因素的存在都對乙肝兩對半的檢測產生了影響，使得得到的檢測結果難以分辨出是否是假陽性的可能［1］，以下就對Elisa法對乙肝兩對半檢測的影響做有關分析。

1.資料和方法

1.1 一般資料

對我院2013年9月到2014年9月接收的124例體檢患者進行分析，其中男性患者占60例，女性患者占64例，其年齡在22歲到85歲之間，其平均年齡為45.6±11.7歲。

1.2 方法

對于要檢測乙肝兩對半的患者要求需要10小時的空腹，抽取其肘正中靜脈血3.0毫升，自行凝固后，于專用抗凝管混勻，1h內以3000r/min離心10min分離血漿，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測乙肝免疫學標志物，包括表面抗原(HbsAg)、表面抗體(Hb－sAb)、e抗原(HbeAg)、e抗體(HbeAb)、核心抗體(HbcAb)。

2.結果

該組124例體檢患者當中傳染性大三陽占3.4%，雙陽的人數占9.6%，小三陽的占10.5%，其檢測結果如下:

項目 HBsAg(+) HBsAb(+) HBeAg(+) HBeAb(+) HBcAb(+)例數647 3 2 2陽性率3.5 37.6 2.6 0.9 1.2

采用軟件SPSS 12.0建立數據庫進行統計學處理，通過X2檢驗和t檢驗分析，P＜0.05，表示差異具有統計學意義。

3.討論

對檢測結果分析，使用Elisa法檢測乙肝兩對半結果的因素主要有以下幾種［2－3］:

(1)試劑盒對檢測結果的影響和如何處理。ELISA方法檢測乙肝兩對半中，試劑盒質量是基本保證實驗結果的準確性，由于商家試劑盒的特異性，靈敏度、穩定性和精度等，存在一定的差異，因此，為了避免對檢測結果的影響，應采取下列方法的影響:工具包應該實驗中使用的國家相關部門檢查產品，每個實驗室都可以根據自己的實際情況，盡量選擇好的靈敏度，特異性強，操作簡單的裝備，和符合質量要求的有關部門，同時，設備保存在2℃－8℃的環境中，并使溫度記錄，測試時，應該把包放在室溫下，平衡0.5h，以確保一致性和準確性的反應時間。

(2)檢測人員和次啊及的標本對檢測結果的影響和處理方法。避免檢驗人員的影響，提高實驗能力，可以采取以下措施:檢查人員做好培訓，使檢驗人員能掌握ELISA方法，實驗原理的設備性能，正確應用測量儀器和操作方法，熟悉質量控制方法和控制的原則處理。紅細胞的樣品壞了，并且可以釋放產生的酶活性氧化物干擾物質，和一定的顏色反應顯色劑，使結果出現假陰性或假陽性，與此同時，ELISA方法，管的重復應用，很容易造成交叉污染，產生假陽性結果。因此，為了避免實驗標本的影響，可以采用以下方法:樣本收集，盡量避免溶血，不要應用抗凝劑，特別是肝素抗凝不可用時，體外是最好的應用抗凝一次性真空管，標本集后，離心機，避免纖維蛋白不能完全凍結，影響結果。未能實現相關的檢驗樣本，血液標本存儲時，應該盡量保持在8℃溫度2℃的環境中，時間不超過1周，1周內如果無法檢測血清分離，它可以存儲在一個溫度20℃，環境，節省時間1年，冷凍標本不能反復凍融的操作發生。

(3)加樣過程中的影響和處理方法。精度測試實驗，吸收數量和吸嘴清潔與否將直接影響測試結果，為了避免樣品的影響過程中，可以采用以下方法:添加使用吸管，嚴格按照相關程序來實現，當添加標本反應孔應該吸點與孔壁的反應達到了第三的位置，其他的反應孔，不污染放入溫育箱之前，應該使用振蕩器加上樣品混合超過0.5分鐘。

(4)藥物的影響和處理方法。乙肝兩對半試劑的敏感性和特異性，不同的廠商生產有一定差異，數據顯示，不同制造商試劑的特異性和敏感性分別為89.4% ～99.3%，78% ～89%存在較大差異。一些制造商酶標板孔之間的差異值大于15%;標志酶活性和穩定性的顏色液體是不好的。使用的試劑不可避免地導致假陽性或假陰性，選擇高質量的試劑的關鍵之一是保證結果的準確性。不同方法的檢測試劑，可以使兩對半一些不同的結果。例如:在ELISA檢測表面抗原陰性結果用于實際工作，和電化學測試呈陽性。除了靈敏度的方法，使用單一或多克隆抗體試劑阻力的差異。薄層電阻突變亞型抗原或乙型肝炎標志物檢測的差異，顯示制造商的代理準備亞型的類型和濃度應考慮的問題。

(5)檢測結果讀取的影響和處理。測試結果判斷通常是在終止液添加10分鐘完成，防止洞結晶現象，從而影響酶標準儀器進行測試。同時，為了保證測試結果的準確性，操作員應該高責任、試劑的有效性并確保質量，如果審查后，異常的結果，處理樣本集合，然后給評論，整個實驗，應該添加到外部質量控制血清，嚴格控制質量，為所有記錄的詳細審查。

［1］陳宏安，門自起，汪盈，蔣文娟.用ELISA評價膠體金測試卡檢測乙型肝炎病毒血清標志物兩對半的性能［J］.西南軍醫.2009(05)

［2］解殿清，瞿靜.ELISA法乙肝兩對半定性檢測影響因素探討［J］.中國現代藥物應用.2010(11)

［3］吳麗娟.溶血標本對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響［J］.赤峰學院學報(自然科學版).2012(06)

R446.1

B

1009－6019(2014)11－0064－01