叉頭框C2和Vimentin蛋白在胃癌中的表達及意義

孫穩蓮

叉頭框C2和Vimentin蛋白在胃癌中的表達及意義

孫穩蓮

目的 探討人叉頭框C2（FOXC2）和Vimentin蛋白在胃癌組織中的表達和意義。方法 采用免疫組化S-P法檢測65例胃癌組織及20例正常胃黏膜中FOXC2和Vimentin的表達，分析兩種蛋白與胃癌臨床特征之間關系的相關性。結果 胃癌組織中FOXC2和Vimentin均呈現高表達，FOXC2和Vimentin在胃癌組織中的陽性表達率分別為41.53%(27/65)和35.38%(23/65)。FOXC2在中晚期胃癌的表達率為58.62%(17/29)，明顯高于早期胃癌表達率27.78%(10/36)（P＝0.012；FOXC2在有淋巴結轉移組中的表達率為55.88%(19/34)，明顯高于無淋巴結轉移組表達率29.03%(9/31)（P＝0.018）。Vimentin在中晚期胃癌的表達率為51.72%(15/29)，明顯高于早期胃癌表達率22.22%（8/36）（P＝0.013）；在有淋巴結轉移組的表達率為41.17%（14/34），高于無淋巴結轉移組表達率 19.35%（6/31）（P＝0.014）。胃癌組織中FOXC2和Vimentin的表達成正相關（P＝0.037）。結論 FOXC2和Vimentin可能參與上皮細胞間質轉化過程，在胃癌轉移中扮演重要角色。

胃腫瘤；FOXC2；Vimentin；EMT

胃癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，居全球癌癥發病率和死亡率的第2位[1]，雖經過多年的研究，胃癌的發病機制仍不清楚。叉頭框C2（forkhead box C2，FOXC2）屬forkhead轉錄因子家族的一員。有研究表明，FOXC2在上皮細胞-間質細胞轉變（epithlial-mesenchymal transition，EMT）過程中，促進間質細胞的轉化，對EMT起著關鍵的調節作用[2-3]。而上皮性癌細胞的浸潤和轉移過程與EMT十分相似，擬通過免疫組化法檢測胃癌組織中FOXC2和Vimentin的表達情況，探索胃癌的高度惡性行為是否與EMT有關。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年1月～2013年6月經病理證實胃癌手術患者65例的標本作為研究對象。其中，男48例，女17例；年齡30～81歲；有淋巴轉移34例，無淋巴轉移為31例。另取20例健康者正常胃黏膜組織作為陰性對照。

1.2 方法

1.2.1 試劑 抗FOXC2多克隆抗體購于Abcam公司，抗Vimentin單克隆抗體購于福建邁新公司，SP(SP Kit Rabbit)免疫組化試劑盒和濃縮型DAB(Diaminobenzidine)試劑均購自北京中杉試劑公司。

1.2.2 實驗方法 按SP免疫組化試劑盒說明書進行。標本常規10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋制片，4m切片脫蠟水化，于枸櫞酸鈉緩沖液（pH6.0）中微波抗原修復，過氧化物酶阻斷內源性過氧化物酶活性，非免疫性動物血清阻斷非特異性反應，分別滴加山羊抗人FOXC2多抗和鼠抗人Vimentin單抗，4℃過夜，37℃復溫1h后滴加二抗，DAB (Diaminobenzidine)顯色，蘇木素復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，鏡檢。

1.2.3 結果判定[1]FOXC2與Vimentin均主要表達在細胞質內，以細胞質內明顯著色及強著色為陽性細胞，計數5個高倍鏡視野，陽性細胞數＜5%為陰性，≥5%為陽性，判定過程由2名經驗豐富的病理醫生負責。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0 統計分析軟件進行數據分析，計數資料采用率和百分比表示，兩組間計數資料比較采用χ2或Fisher確切概率法，檢驗水準α＝0.05,以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FOXC2和Vimentin的表達情況 FOXC2及Vimentin在胃癌組織中表達較強，胞內顆粒粗大；在正常胃黏膜組織中表達較弱，顆粒細小。FOXC2在胃癌組織中的陽性表達率為41.53%(27/65)，Vimentin在胃癌組織中的陽性表達率為35.38%(23/65)。

2.2 FOXC2和Vimentin的表達與臨床生物學行為的關系FOXC2在中晚期胃癌的表達率為58.62%(17/29)，明顯高于早期胃癌表達率27.78%(10/36)（P=0.012）；FOXC2在有淋巴結轉移組中的表達率為55.88%(19/34)，明顯高于無淋巴結轉移組表達率29.03%(9/31)（P=0.018）。FOXC2的過表達與年齡、性別、分化程度是否有關，差異無統計學意義（見表1)。

Vimentin在中晚期胃癌的表達率為51.72%(15/29)，明顯高于早期胃癌表達率22.22%(8/36)（P=0.013）；在有淋巴結轉移組的表達率為41.17%(14/34)，高于無淋巴結轉移組表達率19.35%(6/31)（P=0.014），差異均有統計學意義。而Vimentin的過度表達與年齡、性別、分化程度是否有關，差異無統計學意義(見表 1)。

表1 FOXC2和Vimentin的表達與胃癌臨床病理指標的關系

2.3 FOXC2和Vimentin表達的關系 FOXC2陽性表達的胃癌組織中，Vimentin的陽性表達為66.67%，FOXC2陰性表達的胃癌組織中，Vimentin的陽性表達為23.40%，兩者成正相關（P=0.405，P=0.037,見表 2）。

表2 FOXC2和Vimentin的相關性（例）

3 討論

雖然現階段的流行病學調查發現，不同地區胃癌的發病率均較前有所下降，但全球每年仍有超過93萬的病例確診胃癌，盡管治療方案越來越多，每年仍至少有70萬的胃癌患者死亡。在我國對胃癌進行了多年的基礎和臨床研究，但其發病機制仍不完全清楚。有研究發現，EMT在各種上皮細胞來源的惡性腫瘤的侵襲轉移過程中發揮了重要作用[1]。EMT為暫時而快速的細胞表型可逆性改變，上皮細胞之間的緊密連接消失或者減少，上皮細胞失去其極性并改變其細胞骨架（間質成分增加），細胞運動、遷延、抗凋亡能力提高[3]。EMT可以改變腫瘤細胞的表型，從而提高腫瘤細胞浸潤和轉移的能力[4]。參與EMT中的蛋白分子眾多，如β-Catenin、Paxillin、Vimentin、slug等[5]，其中代表間質細胞的Vimentin由于其高度的選擇性表達受到廣泛的研究。

FOXC2屬于FOXC亞族，經過多年研究發現，它不僅參與調節胚胎的發育，如血管、淋巴管的生成等[6]，還與肥胖、胰島素抵抗、糖尿病等代謝性疾病相關[7]。近年來的研究還發現，FOXC2與腫瘤的浸潤和遠處轉移密切相關，在乳腺基底細胞癌、子宮內膜癌等腫瘤中呈現高表達，其表達量與腫瘤分期及惡性程度呈正相關，這可能與FOXC2啟動EMT促進上皮細胞轉化并轉移有關[8]。本實驗結果顯示，FOXC2在胃癌組織伴淋巴結轉移組及晚期病例中呈高表達，提示其可能通過上述途徑參與胃癌的發展。

Vimentin是一種中間絲蛋白，是連接細胞膜與核膜之間的重要骨架蛋白。Vimentin主要表達于間葉組織細胞，如內皮細胞、成纖維細胞、巨噬細胞、淋巴細胞等，是EMT中的一個重要因子。目前大量報道顯示，Vimentin在許多上皮性腫瘤，尤其是低分化癌中異常表達，可能與腫瘤細胞的浸潤和轉移有關。本實驗結果顯示，Vimentin在胃癌組織伴淋巴結轉移組及晚期病例中呈高表達，提示其可能參與胃癌的發展。又有報道稱，Vimentin的過度表達還與肝細胞癌、乳腺癌及結腸癌的高度惡性和不良預后有著明顯的聯系[9-11]；還在Vimentin在膀胱癌中表達異常增加。因此，Vimentin可能作為評估上皮性腫瘤有無轉移的指標之一[12]。

本實驗還表明，FOXC2和Vimentin的表達呈正相關，隨著胃癌的惡性程度增高，FOXC2及Vimentin表達均增加，促進上皮細胞向間質細胞轉化。研究結果表明，EMT在結腸癌、乳腺癌、肺癌、肝癌等多種癌癥的浸潤及轉移中起著重要作用[13]。通過本實驗發現，FOXC2及Vimentin參與胃癌的EMT過程，促進腫瘤細胞浸潤和轉移，這可能為繼續探索胃癌發病機制提供了新的思路，也為胃癌的診斷及預后判斷提供了新的指標。

[1] Filomena A,Saieva C,Lucchetti V,et al.Gastric Cancer surveillance in a high-risk population in Tuscany(Central Italy):preliminary results[J].Digestion,2011,84(1):70-77.

[2] Meine GC,Rota C,Dietz J,et al.Relationship between cag A-positive helicobacter pylori infection and risk of gastric cancer:a case control study in porto alegre.RS.Brazil[J].Arq Gastroenterol,2011,48(1):41-75.

[3] Savagner P,The epithelial-mesenchymal transition(EMT)phenomenon[J].Ann Oncol,2010,21(Suppl 7):S89-92.

[4] Kokkinos MI,Wafai R,Wong MK,et al.Vimentin and epithelial mesenchymal transition in human breast cancer-ob-servations in vitro and in vivo[J].Cells Tissues Organs,2007,185(1-3):191-203.

[5] 洪倫.上皮-間質轉化及相關microRNA分子與腫瘤的惡性行為的研究進展[J].中國癌癥雜志，2011，21(9):725-730.

[6] Hayashi H,Sano H,Seo S,et al.The FOXC2 transcription factor regulates angiogenesis via induction of integrin beta3 expression[J].J Biol Chem，2008，283(35):23791-23800.

[7] 彭曉韌，鄒大進．脂肪組織FOXC2表達水平與肥胖和胰島素抵抗的關系[J]．醫學研究生學報，2008，21(6):614-618.

[8] Mani SA,Yang J,Brooks M,et al.Mesenchyme forkhead(FOXC2) plays a key role in metastasis and is associated with aggressive basal-like breast cancers[J].Proc Natl Acad Sci USA,2007,104(24):10069-10074.

[9] 周順，賈筱琴，喻春釗，等．上皮間質轉化相關蛋白在肝細胞肝癌組織中的表達鑒定及其小分子RNA表達譜的研究[J].中華實驗外科雜志，2011，28(1):68-71.

[10] Dandachi N,Hauser-Kronberger C,More E,et al.Co-ex-pression of tenascin-C and vimentin in humen breast Cancer cells indicates phenotypic transdifferentiation during tumour progression:correlation with histopathological parameters,hormone receptors.and oncoproteins[J].J Pathol,2001,193(2):181-189.

[11] 吳共發，胡潔，王雅娟，等.結直腸癌與其淋巴結轉移癌及結直腸癌細胞上皮-間質轉化的對比研究[J].中國癌癥雜志，2011，21(4):251-255.

[12] Baumgart E,Cohen MS,Silva Neto B,et al.Identification and prognostic significance of an epithelial-mesenchymal transition expression profile in human blader tumors[J].Clin Cancer Res,2007,13(6):1685-1694.

[13] Sabbah M,Emami S,Redeuilh G,et al.Molecular signature and therapeutic perspective of the epithelial to mesenchymal transitions in epithelial cancers[J].Drug Resist Updat,2008,11(4-5):123-151.

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.3.011

云南 655400 云南省宣威市中醫醫院（孫穩蓮）