柴胡疏肝散對抑郁癥模型大鼠HPA軸功能的影響?

馬書娟，姚建平,樊蔚虹,禹 方

(1.河南中醫學院第一附屬醫院，鄭州 450004；2.河南中醫學院，鄭州 450046)

下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸是一個重要的內分泌軸，是神經內分泌網絡的樞紐，對維持機體內環境的平衡起著至關重要的作用。研究發現，HPA軸功能紊亂與抑郁癥的發生有密不可分的關系。HPA軸的功能亢進是抑郁癥患者的主要神經內分泌改變，這種HPA軸功能亢進隨著抑郁癥的加重或緩解也隨之發生改變。本實驗采用慢性應激法造成大鼠HPA軸功能紊亂模型即抑郁癥模型，以柴胡疏肝散進行干預觀察各組大鼠HPA軸功能的差異，探索柴胡疏肝散治療抑郁癥的作用機理。

1 材料

1.1 實驗動物

SPF級雄性SD大鼠100只，體質量(200±20)g，由河南省實驗動物中心提供(動物許可證號SCXK(豫)2010-0002)。

1.2 主要試劑與藥品

大鼠(Rat)促腎上腺皮質激素(ACTH)ELISA試劑盒，大鼠(Rat)皮質酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒，中藥(飲片)由河南東升藥業有限公司提供。

1.3 主要實驗儀器

酶標儀。

2 方法

2.1 動物分組、造模與給藥

SPF級SD雄性大鼠，open-field法進行行為學評分，水平運動和垂直運動總得分低于30分或高于120分的動物予以剔除。選擇60只動物按隨機數字表法分為正常對照組、模型組、柴胡疏肝散組3組，每組20只。采用慢性應激造模方法，應激刺激參考文獻[1]改進，冰水游泳、熱應激、束縛、夾尾、禁水、禁食及晝夜顛倒共7種刺激，每日隨機安排1種刺激方式，整個刺激實驗每種刺激給予3次共21 d。柴胡疏肝散組大鼠在應激開始時灌胃給藥，每日1次，模型組蒸餾水ig共21 d。

2.2 藥材及制劑

柴胡疏肝散方藥參照中國中醫藥出版社《中醫方劑學》第七版教材。按原方比例水提，生藥濃度為1 g/ml。大鼠按生藥量7.875 g/kg/d灌胃，相當于成人(60 kg)臨床用量的15倍。從應激刺激開始灌胃至應激結束止共用藥21 d。

2.3 取材

大鼠腹腔麻醉(25%烏拉坦，0.75 mg/kg)，腹主動脈取血8 ml,其中4 ml用于制備血漿，另4 ml用于制備血清，-70℃保存。

2.4 指標檢測

2.4.1 ELISA法檢測大鼠血清ACTH濃度 從室溫平衡20 min 后的鋁箔袋中取出所需板條；設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50 μL；樣本孔先加血清10 μL，再加血清稀釋液40 μL，空白孔不加；除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100 μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋溫育60 min；棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，重復洗板5 次；每孔加入底物A、B 各50 μL，37℃避光孵育15 min； 每孔加入終止液50 μL，15 min 內在450 nm 波長處測定各孔的OD 值。

2.4.2 ELISA法檢測大鼠血漿CORT濃度 方法同上。

2.5 數據及結果分析

在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。所得數據以均數±標準差(±s)表示，SPSS13.0統計軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠血清ACTH濃度的影響

表1顯示，與正常對照組比較，模型組大鼠血清ACTH濃度顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，柴胡疏肝散組大鼠血清ACTH濃度顯著降低(P<0.05)。

表1 大鼠血清ACTH濃度比較(±s)

表1 大鼠血清ACTH濃度比較(±s)

組 別例數劑量(生藥g5kg-1)血清ACTH濃度(pg/ml)正常對照組10—22.34±1.88*模型組10—44.30±2.58柴胡疏肝散組107.87522.66±2.05*

注：與模型組比較:＊P<0.05

3.2 柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠血漿CORT濃度的影響

表2顯示，與正常對照組比較,模型組大鼠血漿CORT濃度顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，柴胡疏肝散組大鼠血漿CORT濃度顯著降低(P<0.05)。

表2 大鼠血漿CORT濃度比較(±s)

表2 大鼠血漿CORT濃度比較(±s)

組 別例數劑量(生藥g5kg-1)CORT濃度(ng/ml)正常對照組10— 8.66±0.60*模型組10— 11.95±0.88柴胡疏肝散組107.87510.20±0.54*

注：與模型組比較:＊P<0.05。

4 討論

HPA軸是神經內分泌的重要組成部分，下丘腦分泌促腎上腺皮質激素釋放激素(CRH)作用于腺垂體，調控腺垂體促腎上腺皮質激素(ACTH)的分泌，ACTH又可作用于腎上腺皮質，影響HPA軸終末激素(靈長類為皮質醇，嚙齒類為皮質酮)的分泌。研究發現，抑郁癥患者的血漿皮質醇濃度增加，失去了正常人夜間自發性分泌抑制的規律，整日處于腎上腺皮質功能亢進狀態。Rubin[2]等研究發現，與健康對照組比較，抑郁癥患者的腎上腺皮質增生約38%，增生程度與皮質醇濃度有關，且隨著抑郁的恢復，這種增生似乎隨皮質醇濃度恢復而逐漸消失。唐萍等[3]對23例抑郁癥患者治療前后皮質醇和促皮質醇激素變化研究中發現，抑郁癥患者血漿ACTH水平顯著升高，血漿皮質醇水平也有顯著升高。徐虹等[4]研究亦證實，抑郁癥患者HPA軸功能亢進是狀態依賴。動物實驗也發現，慢性應激可使大鼠血漿CORT濃度增高[5]。

抑郁癥是西醫病名，類似中醫“郁證”、“癲證”、“臟躁”及“百合病”等疾病。雖然很多醫家認為抑郁癥就是中醫的“郁證”，是由情志不舒、氣機郁滯所致，以心情抑郁、情緒不寧、胸部滿悶、胸脅脹滿，易哭易怒、咽中如物阻等癥狀為主要臨床表現的一類病癥，但抑郁癥不單純屬于中醫“郁證”范疇,在“百合病”等其他古代文獻中亦有記載。所以抑郁癥的表現形式可在多種中醫病名的癥狀中出現,與郁證二者不是簡單的等同關系。抑郁癥病因繁多、病機復雜，但從肝論郁為大多數醫家所認同，認為其基本病機為肝氣郁結并貫穿疾病始終，因此疏肝解郁是中醫治療抑郁癥的基本法則。

本實驗結果顯示，模型組大鼠血清ACTH和血漿CORT的濃度均顯著高于正常對照組，而柴胡疏肝散組大鼠血清ACTH和血漿CORT的濃度顯著低于模型組，表明抑郁癥模型大鼠HPA軸功能亢進，其分泌ACTH和COR增多，柴胡疏肝散可通過調節亢進的HPA軸功能，減少大鼠ACTH和CORT的分泌，從而發揮對抑郁癥的治療作用。

參考文獻：

[1] Katz R J,Roth K A.Acute and chronic stress effects on open-field activity in the rat:Implications for a model of depression[J].Neurosci Biobehav Rev,1981,5(2):247.

[2] Rubin RT, Phillips JJ , McCracken JT, et al. Adrenal gland volume in major depression relationship to basal and stimulated pituitary-adrenal cortical axis function[J].Biological Psychiatry，1996,40(2): 891.

[3] 唐萍，唐勝修，陳瓊英.抑郁癥患者治療前后皮質醇和促皮質醇激素的變化[J].廣西醫學，2004,26(7)：1012.

[4] 徐虹，孫忠人，李麗萍，等.針灸治療抑郁癥及其對患者下丘腦-垂體-腎上腺軸的影響[J].中國針灸，2004,24(2)：78-80.

[5] Hsien-Yu Peng,Ming-Chun Hsieh,Cheng-Yuan Lai, et al.Glucocorticoid mediates water avoidance stress-sensitized colon-bladder cross-talk via RSK2/PSD-95/NR2B in rats[J].Am J Physiol Endocrinol Metab, 2012,303: E1094 - E1106.