使用低營養小鼠模型評價中藥右歸丸的補益功效?

周曉靚，樊賽軍，黃海舟，沈 秀，李麗紅，龍 偉，王德芝，周則衛△

(1.中國醫學科學院北京協和醫學院放射醫學研究所，天津 300192； 2.國家食品藥品監督管理局保健食品審評中心， 北京 100070； 3.天津中醫藥大學，天津 300193)

中藥右歸丸是明代著名醫學家張景岳為治療腎陽虛證設立的經典方劑，記載于其著作《景岳全書》卷五十一。功能為溫補腎陽、填精止遺，適用于腎陽不足、命門火衰、腰膝酸冷、精神不振、畏寒怕冷、陽痿遺精、大便稀溏、尿頻而清等癥[1]，為后人所傳承應用至今，是臨床治療常用的經典代表方劑。本方劑由10味中藥配伍組成，所選藥材本身具有多種功效，現代中醫學已將其用于治療多種病證，如腎虛宮冷、低血壓、白細胞減少癥、痛經等[2]。

雖然右歸丸臨床運用廣泛，但作為OTC藥品在日常保健中應用尚顯不足，原因有多方面。本研究本著中醫藥“藥食同源”的宗旨，以玉米喂食法建立低營養動物模型，結合已建立的食品BDI-GS評價體系[4,5]，對右歸丸的補益及治療功效進行綜合評價，以期指導臨床正確用藥，并使其在日常保健中得到更廣泛合理的應用。

1 材料

1.1 動物

6～8周齡線性生長期健康的SPF級ICR雄性小白鼠32只，體質量18～22 g，由北京維通利華實驗動物中心提供，飼養環境為SPF級實驗動物房(實驗動物房使用許可證號SYXK(津)2010-0004)。

1.2 藥品、飼料與儀器

對照組飼料使用本地普通黃玉米粉。右歸丸藥品為河南省宛西制藥股份有限公司生產的水蜜丸(9 g/袋，9袋/盒，批號121008，國藥準字Z41022170)。主要儀器：HITACHI 7180型全自動生化分析儀(日本株式會社日立高新技術)，OLYMPUS SZX7-型體視生物顯微鏡(日本東京OLYMPUS公司)，Anke TGL-16G型臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)，1/1000 Mettler PL20三型精密電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

2 方法

2.1 飼料的制備

以普通玉米粉制作飼料喂養對照組，并以普通玉米粉為原料分別摻入0.38%、0.75%和1.5%的右歸丸，制成不同混合飼料喂養實驗組。實驗各組飼料用1/100電子天平進行準確稱量后打粉并充分混勻，均配制800 g加入適量水制成條狀料，蒸制10～15 min放涼后存入冰箱備用。

2.2 動物分組

取ICR小鼠按體質量分成4組，每組 8只，分別為對照組及0.38%、0.75%、1.5%右歸丸給藥組。實驗開始即換成相應飼料，自由覓食及飲水，隔天稱取體質量1次并添加水和料。于第12天稱取體質量后眼球取血，脫臼處死解剖，完整剖取心、肺、胸腺、脾、胰腺、肝、雙腎、性腺精囊、股骨等9項臟器組織，裸目結合體視顯微鏡下觀察無組織病理學改變后稱取濕重，股骨為80℃烘干4 h后稱取干重[6]。血液經6000 r/min離心5 min 2次，取上層血清用全自動生化分析儀檢測生化指標。

2.3 BDI-GS評價方法[4,5]

損益指數(BDI)=受試物實驗指標統計均值結果/對照組對應指標均值結果。通過損益指數(Benefit-Damage Index, BDI)直觀表示受試物對臟器組織的損益及程度。BDI又分為質量BDI代表受試物補益功效評價指標，以及系數BDI代表健康、治療功效及可能存在副效應的評價指標。以BDI值為依據，通過累計積分(GS General Score)，作為整體綜合補益及健康效應評價指標。累計GS值越大說明該受試物對機體的綜合功效越高。

2.4 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析，數據以均數±標準差(±s)表示，配對樣本采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 從體質量變化評價補益效應

圖1顯示，右歸丸實驗中，實驗各組小鼠的體質量圍繞初始體質量波動，0.38%和1.5%給藥組的體質量與空白組小鼠有所增加，但增加并不明顯；而0.75%給藥組小鼠體質量還有所降低，說明右歸丸對實驗小鼠體質量的影響輕微。

3.2 從質量BDI及累計GSW評價補益效應

表1顯示，3個劑量對所取9項臟器組織中的7項都具有一定的補益效應，表明右歸丸的補益功效

是較均衡全面的，其中對于胸腺、肝臟、腎臟、性腺精囊和股骨質量BDI 3個劑量組均在1.0以上；只有0.75%右歸丸組對心脾的質量BDI<1.0，而其他2劑量組對心脾的質量BDI均>1.0。呈現負效應的組織肺臟和胰腺損傷也很輕，表現在質量BDI值均在0.85以上；并且3個劑量藥物對9項臟器組織累加GSW均高于9.0。右歸丸對肝臟的補益效應與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05,P<0.01)。

圖1 小鼠體質量變化趨勢圖

表1 右歸丸補益效應評價(±s，n=8)

表1 右歸丸補益效應評價(±s，n=8)

評價指標(g) 對照組0.38%右歸丸組0.75%右歸丸組1.5 %右歸丸組質量質量BDI質量 BDI質量BDI體質量19.46±1.28819.80±1.09919.29±1.63019.80±1.207心 臟 0.136±0.019 0.140±0.0231.030.133±0.014 0.98 0.157±0.0371.16肺 臟 0.163±0.0120.162±0.0230.990.150±0.0180.920.154±0.0100.95胸 腺 0.038±0.015 0.042±0.0141.110.043±0.007 1.12 0.044±0.0091.15脾 臟 0.066±0.0140.070±0.014 1.050.061±0.0110.920.076±0.017 1.15胰 腺0.078±0.021 0.069±0.014 0.88 0.067±0.0170.85 0.068±0.0180.87肝 臟 0.755±0.063 0.846±0.089*1.120.860±0.104*1.14 0.933±0.144**1.24腎 臟0.292±0.0220.316±0.0301.080.302±0.0431.040.326±0.0601.12性 腺0.478±0.108 0.511±0.0731.070.476±0.1091.000.500±0.0721.05股 骨 0.024±0.002 0.024±0.002 1.030.025±0.0021.050.024±0.0021.009項指標GSW9.369.019.67

注：與對照組比較：*P<0.05，**P<0.01

3.3 右歸丸對各臟器組織健康、治療效應評價

表2顯示，由于右歸丸對小鼠體質量影響不大，故而系數BDI與質量BDI的表現相近似。從局部而言，除對胰腺及肺呈現輕微負效應，低劑量右歸丸對機體各個器官的健康均表現出一定的正效應，表明其對各臟器補益功效較均衡。系數BDI累計GSI均大于9.0的基本值，表明服用右歸丸對機體健康綜合效應是正面有益的，具有一定的綜合保健功效。在本實驗設計的劑量范圍內，右歸丸對機體整體的健康效應為1.5%>0.38%>0.75%。

表2 右歸丸健康效應評價(±s，n=8)

表2 右歸丸健康效應評價(±s，n=8)

評價指標(mg/g) 對照組0.38%右歸丸組0.75%右歸丸組1.5 %右歸丸組系數系數BDI系數BDI系數BDI心 臟 6.962±0.781 7.050±0.8761.016.923±0.573 0.99 7.872±1.4771.13肺 臟 8.402±0.6028.176±1.0410.977.768±0.6200.927.809±0.5150.93胸 腺 1.962±0.772 2.120±0.6181.082.227±0.410 1.13 2.218±0.4541.13脾 臟 3.398±0.5963.525±0.586 1.043.164±0.5260.933.831±0.727 1.13胰 腺3.994±0.853 3.450±0.592 0.86 3.434±0.7010.86 3.535±0.8460.89肝 臟 38.88±3.482 42.81±4.8941.1044.52±4.657*1.15 47.04±5.693**1.21腎 臟15.04±1.18415.97±0.9741.0615.64±1.3381.04 16.43±2.4091.09性 腺24.44±4.672 25.76±3.180 1.0524.53±4.2391.0025.25±3.2781.03股 骨 1.215±0.071 1.225±0.091 1.011.294±0.1031.071.196±0.1140.989項指標GSI9.199.109.52

注：與對照組比較：*P<0.05，**P<0.01

3.4 右歸丸血清生化指標的評價

表3顯示，3組右歸丸對肝功能血清標志物轉氨酶(ALT、AST)的影響輕微，差異無統計學意義。代表腎臟健康的尿素氮(BUN)亦各有升降，中劑量尿素氮明顯最低，與空白對照組比較差異有統計學意義(P<0.01)；而血肌酐(CREA)各有升降，與空白對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。低劑量右歸丸對血糖(GLU)與甘油三脂(TG)影響不大，而其他2組均有升高，說明中劑量右歸丸具有顯著升高血糖的作用。值得特別注意的是，高劑量組升高甘油三酯(TG)與空白對照組比較差異有統計學意義(P<0.01)。3組右歸丸對膽固醇(CHOI)均無明顯影響。此外，血清蛋白指標(TP、ALB、GLOB)3組右歸丸各有升降；中劑量白蛋白(ALB)顯著升高(P<0.01)，而3個劑量右歸丸的球蛋白(GLOB)均有下降，中劑量呈顯著性降低(P<0.05)。

表3 右歸丸的血液生化指標評價(±s, n=8)

表3 右歸丸的血液生化指標評價(±s, n=8)

指 標 對照組0.38%右歸丸組0.75%右歸丸組1.5%右歸丸組ALT(U·L-1)240.000±5.03324.880±8.87127.000±7.01025.860±5.242AST(U·L-1)131.300±13.310133.900±22.550135.300±22.980 139.100±20.280TP(g·L-1)35.490±6.864 35.830±4.98935.230±4.511 39.190±4.139ALB(g·L-1)31.000±2.33030.130±2.64234.880±2.588** 32.430±2.573GLOB(g·L-1)8.983±2.8708.667±5.291 3.720±3.486*6.813±3.625GLU(mmol·L-1) 4.338±0.5484.763±1.6117.813±1.247**5.850±3.076BUN(mmol·L-1) 3.713±0.6363.888±1.218 2.875±0.453**3.829±0.706CREA(umol·L-1)18.570±6.63023.000±7.98216.000±3.47219.430±11.300CHOI(mg·dL-1)2.966±0.4592.814±0.3712.961±1.0452.813±1.116TG(mmol·L-1)1.910±0.2392.164±0.272 2.090±0.5022.308±0.387*

注：與對照組比較：*P<0.05，**P<0.01

4 討論

右歸丸推薦成人服用劑量每次1袋(9 g)水蜜丸，每天1～2袋，但在藥品包裝上缺乏用藥指導及飲食宜忌事項。本研究認為，方中使用的中藥附子為辛溫大熱之味，強悍的通行之性具有掣上掣下之功，可以通行十二經脈；附子易產生一定的毒副作用，因此飲食上辛苦、酸澀法當忌之。服藥期間飲食清淡，對藥效的正常發揮和減少不必要的副作用是十分有益的。由于右歸丸具有明確的補肝溫陽作用，肝陽上亢的高血壓人群應當慎用；同時，右歸丸對脾腎陽虛的泄瀉人群有很好的實大便止瀉功效，因而對于腸燥便秘的人群以及便秘合并高血壓的人群當禁用。另外，夏令時節陽氣很盛，體質特別虛寒之人為調節體質、冬病夏治可以應用，普通人群夏季容易引起中醫上火之癥當慎用。雖然有言右歸丸源于金匱腎氣丸的改進，但其功用、療效遠非腎氣丸可比，運用得當可起沉疴，其適用人群不應該僅限于右手脈弱之陽氣虛衰人群。

本實驗研究表明，右歸丸組與對照組小鼠的腎臟、性腺精囊在臟器質量和系數上均有所增加，提示右歸丸對于提高腎臟生理功能、減少尿蛋白、逆轉腎衰進程可能會有一定的功效。實驗期間給藥組小鼠表現十分活躍，提示右歸丸有補益陽氣、提振精神的作用。3個給藥劑量組的胸腺質量和系數均有所增加，同時低、高劑量具有一定健脾功效，體現了脾虛則氣虛的生理機制及補脾則益氣的中醫理法方藥，表明右歸丸具有一定的增強機體免疫的功效。右歸丸組小鼠的股骨相對于空白對照組，其臟器質量和系數均無損傷甚至有所增加，提示該藥對于骨質疏松癥可能具有一定的對抗及保健作用，與相關的臨床報道一致[7,8]。右歸丸能夠升高機體血糖水平，與對胰腺有輕度負面影響臟器水平的評價結果是一致的，表明右歸丸對糖尿病人是不適用的。右歸丸輕微升高血脂(TG)水平，表明高血脂人群應當慎用。

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