高效液相色譜法快速檢測食品中蘇丹紅的含量

曹麗芬　姚黎霞　何良興等

摘要 [目的]建立快速檢測食品中蘇丹紅（蘇丹紅I、Ⅱ、Ⅲ、IV）含量的高效液相色譜法，簡化樣品的前處理，降低成本，縮短儀器檢測時間。[方法] 選用Athena C18XDB 色譜柱（4.6 mm × 150.0 mm，3.5 μm），以乙腈水溶液和乙腈丙酮溶液為流動相進行等度洗脫，通過二極管陣列檢測器檢測食品中蘇丹紅。[結果] 該方法檢測線性良好，相關系數R≥0.999 1，檢出限為0.01 mg/L，相對標準偏差（n=10）為0.9%～2.0%，回收率為90%～96%。[結論] 該法具有較高的準確度和精密度，適用于食品中蘇丹紅含量的測定。

關鍵詞 高效液相色譜；蘇丹紅；食品

中圖分類號 S509.9 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）05-01532-02

Abstract [Objective] A analytical method was established to determine Sudan （Sudan I， Ⅱ， Ⅲ， IV） content in food by high performance liquid chromatography （HPLC） with simplified sample pretreatment， reduced cost and shorten instrument detection time. [Method] The Sudan were separated on an Athena C18XDB column （4.6 mm × 150.0 mm， 3.5 μm） by isocratic elution using acetonitrile water solution and acetonitrile acetone solution as mobile phase， and analyzed with a diodearray detector. [Result] The method showed a good linear relationship with correlation coefficient of more than 0.999 1. The limit of detection （LOD） was 0.01 mg/L， the relative standard deviation （n=10） was between 0.9%-2.0%， and the recovery rate was between 90%-96%. [Conclusion] The method has a high accuracy and precision， which is suitable for analyzing the Sudan content in food.

Key words High performance liquid chromatography （HPLC）； Sudan； Food

蘇丹紅是偶氮苯類人工色素，屬于工業染料，主要用于油、蠟、鞋等的增光著色。蘇丹紅及其代謝產物具有致癌性，世界衛生組織早就明文規定禁止蘇丹紅作為食品添加劑，我國在食品添加劑使用標準[1]中也禁止使用蘇丹紅。但由于蘇丹紅價格低廉、顏色鮮艷、不易褪色[2]，一些不法商販將其添加到食品中，極大地危害消費者的健康。

國內外報道的蘇丹紅檢測方法主要有氣相色譜-質譜聯用法[3]、高效液相色譜法[4-6]、液相色譜-質譜法[7-8]、薄層層析法[9]等，有些由于儀器和試劑昂貴難以普及。目前我國檢測蘇丹紅（蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV）的國標方法為GB/T19681-2005[10]，該方法為高效液相色譜法，需用氧化鋁過柱，并經過多次濃縮提取，重復性和回收率都不太理想，同時該方法采用梯度洗脫，檢測耗時長。筆者在該方法的基礎上進行優化，以期建立一套快速準確的食品中蘇丹紅的分析方法，便于在實際工作中應用。

1 材料與方法

1.1 材料

主要儀器：Agilent 1200 高效液相色譜儀配有四元泵、DAD 紫外檢測器和自動進樣器，安捷倫科技有限公司；KQ5200 超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司；ML204/02 分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；

CT14RD 臺式低速冷凍離心機，上海天美科學儀器有限公司；MilliQ 超純水處理器，美國Millipore 公司。主要試劑：標準品為蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ，純度≥87%；甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙醚，HPLC 級。

1.2 色譜條件

色譜柱：Athena C18XDB 分析柱（4.6 mm × 150.0 mm，3.5 μm）；流動相：溶劑A為 0.1%甲酸的水溶液∶乙腈=85∶15，B為 0.1%甲酸的乙腈溶液∶丙酮=80∶20；流速1 ml/min；進樣量10 μl；DAD紫外檢測器；檢測波長478 nm。

1.3 標準溶液配制

分別稱取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10.0 mg（按實際含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250 ml，配制成標準儲備液。吸取標準儲備液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 ml，用正己烷定容至25 ml，配制成0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56 mg/L標準溶液，經0.45 μm的水系濾膜過濾后，按“1.2”的色譜條件進樣分析。

1.4 樣品前處理

將樣品剪碎，稱取10～20 g（準確至0.01 g）樣品于離心管中，加入10～30 ml 5%丙酮的正己烷液，3 000 r/min離心10 min，過濾，再用10 ml 5%丙酮的正己烷液洗滌數次，合并濾液，于旋轉蒸發儀上蒸至5 ml以下，用正己烷轉移并定容至5 ml，經0.45 μm有機濾膜過濾后待測。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 波長的選擇。

該試驗采用二極管陣列檢測器，可在紫外-可見波長范圍內對被分離組分掃描獲得其吸收光譜。該試驗分別對蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV在波長200～700 nm 進行光譜掃描和參考其他文獻，發現在波長478 nm處均有較高的靈敏度，故選定478 nm為檢測波長。

2.1.2 流動相的優化。

2.3 回收率試驗

選取具有代表性的3種樣品，含水量較大的醬腌菜、固體樣品方便面和粉末樣品辣椒粉，且該3種樣品均未檢測出蘇丹紅。分別稱取樣品10 g，各加入0.02 mg蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV，平行測定3次，得出回收率在90%～ 96%，標準偏差RSD在0.9%～3.8%，加標量越大，RSD值越小（表2）。

3 結論

該研究采用高效液相色譜法快速測定食品中蘇丹紅（蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV）含量，樣品前處理采用離心提取，再濃縮定容，流動相比例為溶液A（0.1%甲酸的水溶液∶乙腈=85∶15）∶溶液B（0.1%甲酸的乙腈溶液∶丙酮=80∶20）=10∶90，柱溫30 ℃，檢測波長為478 nm。該方法操作簡單快速，回收率、精密度均滿足要求，適用于食品中蘇丹紅的定性、定量分析。

參考文獻

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