活化小膠質細胞在急性腦梗死中的作用及其機制的研究

宮琨

【摘要】 目的 探討活化小膠質細胞在急性腦梗死中的作用及其機制，為診療提供靶點與途徑。方法 配置小膠質細胞標記液并建立急性腦梗死模型小鼠，分別于12h、24h、72h輸注，測定相關指標對比。結果 于手術后12h、24h、72h移植，小膠質細胞于小鼠體內分布差異顯著，小膠質細胞隨著時間推移向梗死病灶周圍聚集；12h后移植小鼠使用前肢的次數較24h、72h后移植顯著增加；12h后移植小鼠腦梗死面積小于24h、72h移植者，差異顯著（P<0.05）。結論 活化小膠質細胞在急性腦梗死中發揮重要作用，通過抑制神經細胞壞死促進神經細胞存活，進而影響患者神經功能與梗死體積，對預防、診療急性腦梗死具有一定的價值。

【關鍵詞】 活化小膠質細胞；急性腦梗死；機制研究

文章編號：1004-7484（2014）-06-3123-01

腦梗死又名缺血性腦卒中，是局部腦卒中因血液循壞障礙，致缺血、缺氧而發生軟化壞死的一種腦部病變，其中急性腦梗死具有發病率高、死亡率高、致殘率高的特點[1]。腦梗死病因復雜，近年來隨著危險因素的增多，人口進入老齡化，我國急性腦梗死發病率逐年增高，給患者及其家屬帶來巨大的傷害，深入研究急性腦梗死的發病機制、相關因素對于該病的預防、診療具有重要意義。本次研究運用活化小膠質細胞在急性腦梗死小鼠中的作用及其機制進行闡述。

1 資料及方法

1.1 一般資料 取清潔級成年雄性昆明小鼠，體重25-35g，標準飼料喂養，飼養室溫度20-25℃恒溫，安靜環境，實驗前5日取至觀察室[2]。

1.2 方法 選用倒置相差熒光顯微鏡、低速離心機、手術顯微鏡、磁力加熱攪拌器、全自動生化分析儀等儀器設備，選用細胞示蹤檢測試劑盒、TTC等試劑，配制完好的原代培養第三代小膠質細胞。

小膠質細胞標記：于15ml離心管離心1ml CFDA-SE細胞標記液懸浮1.0×107細胞，取2μl配置好的小膠質細胞標記儲存液（1000×）與前者混合，搖勻配置為CFDA-SE存儲液（2×），將存有細胞CFDA-SE標記液與儲存液（2×）1ml混合，以37℃恒溫孵育10min，向離心管內傾入15%胎牛血清DMEM培養基混勻后以1200r/min離心持續5min取上清液再行洗滌，加入8ml完全培養基，孵育5min再次離心取上清液，再次加入10ml完全培養基，置于37℃恒溫5%CO2培養箱培養，標記完成[3]。取第3代小膠質細胞CFDA為標記組，余下MG為對照組用MTT法檢測CFDA SE標記，確認標記對小鼠小膠質細胞影響不顯著再行實驗。建立局灶性小鼠腦梗死模型：選用0.16mm單絲尼龍線處理后制備完成，采用右側大腦動脈栓塞，于小鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，用牙次刺之驗證麻醉完全，常規消毒后于手術顯微鏡下手術；剪開小鼠皮下組織，取頸動脈分離總動脈與迷走神經并結扎、夾閉，將標記栓線插入頸總動脈開口并推送至小鼠大腦動脈起始部，將切口與栓線一同結扎后置于養殖箱中，選取假手術組步驟與手術組同但未插入栓塞[4]。

隨機抽取實驗鼠采用MRI檢測模型穩定性，穩定性滿意后繼續實驗；再次麻醉小鼠后固定，使用超導高場磁共振掃描儀，對冠狀動脈進行檢測。將培養好的小膠質細胞進行制備后以手術組小鼠作為移植對象，剪去后者頸前毛發后經鎖骨下靜脈向心臟方向注射標記好的小膠質細胞懸液50μl，以慶大霉素縫合；于移植后12、24、72h脫頸處死小鼠取其腦進行冰凍切片處理，以包埋劑冰凍，以切片機切片，厚度5μm，于熒光顯微鏡下觀察小膠質細胞情況。

2 結 果

于手術后12h、24h、72h移植標記液小鼠大腦內小膠質細胞分布差異顯著，小膠質細胞隨著時間推移向梗死病灶周圍聚集；12h后移植標記液小鼠使用前肢的次數較24h、72h顯著增加；12h后移植標記液小鼠腦梗死面積小于24h、72h移植者。

3 討 論

小膠質細胞（microglia，MG）廣泛分布于中樞神經系統中，數量極多，約占神經膠質細胞總數5%-20%，其形態、免疫表型和生物學功能與單核/巨噬細胞性相似，學術界普遍認為其為中樞神經系統內主要免疫效應細胞[4]。小膠質細胞在生理條件正常、異常情況下均可發揮重要作用，具有監視腦部環境改變與預防外在感染及有毒物質的作用。本次研究中，經標記培養制備的小膠質細胞與小鼠體內膠質細胞并無顯著性差異，通過輸注入急性腦梗死模型小鼠中，隨著時間的推移漸漸向病灶區域轉移，及早輸注小鼠其病灶面積相對較小、前肢活動次數較多，差異顯著（P<0.05），說明小膠質細胞應用于腦梗死中具有抑制病灶發展、保護神經的作用，具有一定的臨床價值，相信隨著相關人類實驗取得更多有價值的結果，其臨床價值必將愈加凸顯。

參考文獻

[1] 王淑英，鄔劍，李堯，等.EGB對大鼠局灶性腦缺血—再灌注中小膠質細胞的影響[J].黑龍家醫藥科學，2013，36（05）：46-47.

[2] 劉學華.動物腦炎和腦軟化的病理特點[J].養殖技術顧問，2013，13（09）：8-9.

[3] 仁富亮，宋少偉，李恩東.神經細胞和小膠質細胞的相互作用于神經變性性疾病的關系[J].中國衛生產業，2013，35（25）：156-157.

[4] 潘新發，萬曙.小膠質細胞在腦出血后繼發性腦損傷中的作用[J].中國神經精神疾病雜志，2013，39（17）：437-438.