嚴全根 朱曉鳴 楊云霞 韓 冬, 3 金俊琰 解綬啟 李鐘杰
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飼料中棉粕替代魚粉蛋白對草魚的生長、血液生理指標和魚體組成的影響
嚴全根1, 2朱曉鳴1楊云霞1韓 冬1, 3金俊琰1解綬啟1李鐘杰1
(1. 中國科學院水生生物研究所淡水生態與生物技術國家重點實驗室, 武漢 430072; 2. 中國科學院大學, 北京 100049; 3. 淡水水產健康養殖湖北省協同創新中心, 武漢 430070)
以初始體重(100.0±0.29) g的草魚為研究對象, 通過8周的生長實驗, 研究飼料中棉粕替代魚粉蛋白對草魚的生長、飼料利用, 血液生理指標和魚體生化組成的影響。實驗設置7種等氮等能飼料, 對照組(C)以魚粉為唯一蛋白源, 其余6組分別以棉粕替代飼料中魚粉蛋白的20% (R20)、40% (R40)、60% (R60)、80% (R80)、90% (R90)、100% (R100)。研究結果表明: 隨著飼料中棉粕含量的升高, 草魚特定生長率呈下降的趨勢, 當替代比例達到60%, 顯著低于對照組(<0.05); 飼料效率、蛋白質貯積率和能量貯積率隨著飼料中棉粕含量升高而顯著降低(<0.05)。通過折線法分析, 在實驗條件下, 棉粕可以替代魚粉蛋白的43.3%而不影響草魚的生長。各組草魚之間血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶和甘油三酯含量無顯著差異(>0.05); 總膽固醇、高密脂蛋白膽固醇和低密膽固醇呈現下降趨勢, 當替代水平達到40%顯著低于對照組(<0.05)。棉粕替代魚粉蛋白顯著影響魚體的水分含量(<0.05), 當替代比例達到80%, 魚體的水分含量顯著高于對照組(<0.05); 各組之間魚體的蛋白質和灰分含量無顯著性差異(>0.05)。R20組的魚體脂肪和能量含量顯著高于對照組(<0.05), R100組的魚體脂肪和能量含量顯著低于對照組(<0.05), 其他各組之間和對照組無顯著性差異(>0.05)。
棉粕; 魚粉; 草魚; 生長; 血液指標; 魚體組成

草魚(), 典型的草食性魚類, 具有生長速度快, 肉味鮮美等優點, 受到廣大養殖戶和消費者的青睞。草魚是我國淡水養殖魚類, 據統計, 2009年我國草魚產量4.08×109kg, 2010年產量達4.22×109kg, 是我國第一大水產養殖品種, 占淡水魚養殖產量的20.45%[13], 在全球的水產飼料中草魚飼料的使用量最大。本實驗以(100.0±0.29) g的草魚為研究對象, 探討棉粕替代魚粉蛋白對草魚的生長、飼料利用、形態學、血液生理和魚體生化組成等的影響。為草魚配合飼料中合理添加棉粕提供科學依據。
實驗用高蛋白棉粕由江西正邦科技股份有限公司提供, 采用溶劑浸提工藝生產, 產地為新疆。魚粉為美國進口蒸汽白魚粉, 購于武漢高龍飼料有限公司。表1所示為實驗飼料中蛋白源的主要化學組成和氨基酸組成。本實驗以棉粕和魚粉作為蛋白源, 制成7種等氮(蛋白水平33.00%)、等能(能值為14.45 kJ/g)的飼料。棉粕分別替代魚粉蛋白的0 (C)、20% (R20)、40% (R40)、60% (R60)、80% (R80)、90% (R90)以及100% (R100); 對照飼料(C)以白魚粉作為唯一蛋白源。實驗飼料配方和化學組成見表2。飼料原料過四十目篩, 充分混勻后, 經飼料機(上海華夏漁業機械儀器工貿公司生產的SLP-45型膨化機)做成2.0 mm的沉性顆粒, 65℃烘干, 置于–20℃冰柜備用。實驗飼料氨基酸組成見表3。

表1 實驗飼料中蛋白源的化學組成及氨基酸組成(%干物質)
注: 1. 棉粕采用實驗室小型粉碎機進行粉碎, 其中不能通過篩片的棉絨、棉殼剔除, 從而導致實驗用棉粕高蛋白、高脂肪
Note: 1. vsing a small mill to crush the cottonseed meal and remave the lint and cotton shell which cannot pass the sieve. So the experimental cottonseed meal had relatively higher protein and lipid contents
實驗在室內循環水養殖系統的21個圓錐形玻璃缸(直徑80 cm, 水體積300 L)中進行。進入每個缸的流水速度為8 L/min。每天測一次水溫, 每周監測一次水體溶氧和氨氮。實驗期間, 水溫23.2—27.9℃, 氨氮濃度小于0.5 mg/L, 溶氧濃度高于6 mg/L, pH約為6.9。光照周期為12L/12D, 光亮周期從8:00至20:00, 使用節能燈作為人造光源, 水面光照強度為60.69 lx。
實驗草魚來自湖北省洪湖市大同養殖場的1齡幼魚。實驗魚在室內水泥池進行馴養, 馴養期間每天09: 00和15: 00飽食投喂, 馴養時間持續5周, 前3周使用對照組飼料進行投喂, 后2周使用7種實驗飼料的等量均勻混合物進行馴養, 使草魚適應攝食實驗飼料。實驗開始時, 實驗魚饑餓24h后, 選取體格健壯、規格均勻的個體[平均尾重(100.0±0.29) g], 稱重后隨機放入21個魚缸中, 每缸9尾。每種實驗飼料對應隨機的3個平行。生長實驗持續56d, 實驗期間, 每天9: 00和15:00投喂至表觀飽食。
實驗開始時, 隨機取3組每組3尾草魚稱重, 作為實驗魚初始樣, 存放于–20℃保存用作魚體生化組成分析。實驗結束時, 將魚饑餓24h稱重, 每缸取2尾魚分析生化成分。每缸隨機取3尾魚, 測量其肥滿度、肝體比和臟體比。
每缸隨機取4尾魚, 尾靜脈抽血, 室溫下靜置3h后3500 r/min離心15min獲得血清樣, 用于測定血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、總膽固醇、高密脂蛋白膽固醇、低密脂蛋白膽固醇和甘油三酯。
實驗飼料和魚體的干物質、粗蛋白、粗脂肪、灰分和總能參照文獻[14]的方法進行測定: 干物質在105℃烘干至恒重, 通過失重法測定; 粗蛋白采用FOSS定氮儀(2300 Kjeltec Analyzer Unit)測定; 粗脂肪采用索氏抽提儀(Soxtec system HT6, Tecator, Hoganas, Sweden)進行測定; 灰分在馬福爐中550℃燃燒3h, 失重法測定; 能值通過氧彈測熱儀(Phili-pson mi-crobomb calorimeter, Gentry Instruments Inc·, Aiken, USA)測定。每一樣品測定2個平行。
飼料的棉酚含量(游離棉酚、總棉酚)使用HPLC(DGU-20A5E, 島津)測定, 由湖北省農業科學院分析測試中心測定。

表2 實驗飼料配方及化學組成(%干物質)
注: 1. 礦物鹽預混物(mg/ kg 飼料): 氯化鈉, 500; 硫酸鎂, 4575.0;磷酸二氫鈉, 12500.0; 磷酸二氫鉀, 16000.0; 磷酸二氫鈣, 6850.0; 硫酸亞鐵, 1250.0; 乳酸鈣, 1750.0; 硫酸鋅, 111.0;硫酸錳, 61.4; 硫酸銅, 15.5; 硫酸鈷, 19.02; 碘化鉀, 178.33; 淀粉, 6253.33; 2. 維生素預混物(mg/kg飼料): 硫胺素, 20; 核黃素, 20; 維生素B6, 20; 維生素 B12, 2; 葉酸, 5; 泛酸鈣, 50; 肌醇, 100; 煙酸, 100; 生物素, 5; 淀粉, 3226; 維生素A (ROVIMIX A-1000), 110; 維生素D3, 20; 維生素E, 100; 維生素K3, 10
Note: 1. Mineral premix (mg/kg diet): NaCl, 500; MgSO4.7H2O, 7500; NaH2PO4.2H2O, 12500; KH2PO4, 16000; Ca(H2PO4).2H2O, 10000; FeSO4, 1250; C6H10CaO6.5H2O, 1750; ZnSO4.7H2O, 176.5; MnSO4.4H2O, 81; CuSO4.5H2O, 15.5; CoSO4.6H2O, 0.5; KI, 1.5; starch, 225; 2. Vitamin premix (mg/kg die): thiamin, 20; riboflavin, 20; pyridoxine, 20; cyanocobalamine, 2; folic acid, 5; calcium patotheniate, 50; inositol, 100; niacin, 100; biotin, 5; starch, 3226; vitamin A (ROVIMIX A-1000), 110; vitamin D3, 20; vitamin E, 100; vitamin K3, 10

表3 實驗飼料氨基酸組成(%干物質)
血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、總膽固醇、高密脂蛋白膽固醇、低密脂蛋白膽固醇、甘油三酯使用全自動生化分析儀(Olympus, AU400, Tokyo, Japan)測定。
用統計軟件SPSS 17.0進行統計分析。實驗結果經過一元方差分析(One-way ANOVA)后, 進行Duncan’s多重比較各實驗組間差異的顯著性,<0.05表示差異顯著。
各組草魚的成活率均100%。實驗結果如表4所示, 草魚的特定生長率隨著飼料中棉粕含量的升高呈現顯著下降的趨勢, 當替代魚粉蛋白比例達到60%, 特定生長率顯著低于對照組(<0.05)。草魚的攝食率隨著飼料中棉粕替代比例的升高呈現顯著上升的趨勢, 當替代魚粉蛋白比例達到60%, 攝食率顯著高于對照組(<0.05)。飼料效率隨飼料中棉粕含量的增加呈現顯著下降的趨勢, 當替代魚粉蛋白比例達到40%, 飼料效率顯著低于對照組(<0.05)。
蛋白質貯積率隨著飼料中棉粕含量的升高呈現顯著下降的趨勢, 當替代比例達到40%, 蛋白貯積率顯著低于對照組(<0.05)。能量貯積率隨著飼料中棉粕含量的升高而下降, 當替代比例達到60%, 能量貯積率顯著低于對照組(<0.05)。
通過折線法(Broken-line), 在本實驗條件下, 由草魚的特定生長率與飼料中棉粕替代魚粉蛋白比例相關性得到飼料中棉粕替代魚粉蛋白最適比例為43.3%(圖1), 飼料中棉粕含量為24.46%。
棉粕替代魚粉蛋白對草魚形態學的影響如表5所示。各組草魚之間的肥滿度沒有顯著性差異(>0.05)。棉粕替代魚粉蛋白顯著影響草魚肝體比指數(<0.05), 隨著飼料中棉粕含量的升高, 肝體比呈現顯著下降的趨勢, 但各組和對照組之間差異不顯著(>0.05)。棉粕替代魚粉蛋白顯著影響草魚的臟體比(<0.05), 隨著飼料中棉粕含量的升高, 臟體比呈顯著下降的趨勢, 但各組和對照組之間差異不顯著(>0.05)。

圖 1 草魚特定生長率和飼料中棉粕替代魚粉蛋白水平的關系
由表6可知, 攝食不同比例棉粕替代魚粉蛋白的飼料8周后: 各組草魚之間的血清谷丙轉氨酶活性和血清谷草轉氨酶活性無顯著性差異(>0.05)。血清總膽固醇含量隨著飼料中棉粕含量的上升, 呈現顯著下降的趨勢(<0.05), 當替代比例達到40%, 總膽固醇含量顯著低于對照組(<0.05)。血清高密脂蛋白膽固醇和低密脂蛋白膽固醇呈現和總膽固醇一樣的趨勢, 即隨著飼料中棉粕含量的升高, 其含量顯著下降(<0.05), R20組和對照組無顯著性差異(>0.05), 其他各組含量顯著低于對照組(<0.05)。各組草魚之間的血清甘油三酯含量無顯著性差異(>0.05)。
由表7可知, 飼料中棉粕替代魚粉蛋白顯著影響草魚的生化組成。棉粕替代魚粉蛋白顯著影響魚體的水分含量(<0.05), 當替代比例達到80%, 魚體的水分含量顯著高于對照組(<0.05)。各組草魚之間的魚體蛋白質含量無顯著性差異(>0.05)。R20組魚體脂肪含量顯著高于對照組(<0.05), R100組魚體脂肪含量顯著低于對照組(<0.05), 其他各組和對照組無顯著性差異(>0.05)。各組之間魚體的灰分含量無顯著性差異(>0.05)。R20組魚體能量顯著高于對照組(<0.05), R100組魚體能量顯著低于對照組(<0.05), 其他各組之間和對照組無顯著性差異(>0.05)。
本實驗得出初始體重(100.0±0.29) g的草魚飼料中高蛋白棉粕替代魚粉蛋白比例不超過43.3%為宜, 不補充必需氨基酸的前提下, 在飼料中的添加比例最高為24.46%。研究和生產實踐表明, 棉粕在水產配合飼料中的比例可以達到 10%—30%[15], 但不同種類的水產動物, 甚至是同種水產動物的不同生長階段對飼料中棉粕耐受量有差異。
表4 飼料中棉粕替代魚粉蛋白對草魚生長和飼料利用的影響(平均值±標準誤)*

Tab.4 Effects of replacement of fishmeal protein with cottonseed meal on the growth and feed utilization of grass carp (means±SE)*
注:*表中同行數據后不同上標英文字母表示差異顯著(<0.05) , 下同Different superscripts within each row represent significant differences (< 0.05). The same applies bellow;1初始體重: initial body weight (g);2終末體重: final body weight (g);3攝食率(, %BW/d)=100×總干物質攝食量/[實驗天數×(初始體重+終末體重)/2]: feeding rate (%BW/d) = 100×feed intake/[days×( (initial body weight + final body weight) /2);4特定生長率(, %/d)=100×[Ln(終末體重)–Ln(初始體重)]/實驗天數: specific growth rate (%/d) = 100×(Ln(final body weight) –Ln(initial body weight) ) / days;5飼料效率(, %)=100×魚體濕重總增重/總干物質攝食量: feed efficiency (%) =100×wet weight gain/dry feed intake;6蛋白貯積率(, %)=100×(魚體積累蛋白/蛋白攝食量): Protein retention efficiency (%) =100×(protein retained in fish body /protein intake);7能量貯積率(,%)=100×(魚體積累能量/能量攝食量): Energy retention efficiency (%)=100×(energy retained in fish body/energy intake)

表5 飼料中棉粕替代魚粉蛋白對草魚形態學的影響(平均值±標準誤)
注:1肥滿度= 100×體重/ (體長);2肝體指數(%) = 100×肝臟濕重/魚體重;3臟體指數(%)= 100×內臟濕重/魚體重
Note:1: Condition factor = 100×body weight / (body length);2: Hepato-somatic index (%) = 100×liver wet weight / body weight;3: Viscera-somatic index (%) = 100×viscera wet weight / body weight



表6 飼料中棉粕替代魚粉蛋白對草魚血液生理的影響(平均值±標準誤)

表7 飼料中棉粕替代魚粉蛋白對魚體生化組成的影響(平均值±標準誤)(%濕重)
王勝[22]報道了草魚飼料蛋白38%時賴氨酸的適宜需要量為1.94%; 草魚飼料蛋白37%時總含硫氨基酸的適宜需要量為1.21%, 折算成飼料蛋白含量33%, 其賴氨酸和含硫氨基酸需求量分別為1.80%和0.97%, 由表3得知, R40組飼料賴氨酸含量為1.78%, 含硫氨基酸含量為0.96%; R60組飼料賴氨酸含量為1.62%, 含硫氨基酸含量為0.94%; R40組草魚的生長和對照組無顯著差異, 而R60組草魚的生長顯著低于對照組, 說明飼料中賴氨酸含量低是影響草魚飼料中棉粕替代魚粉蛋白的原因之一。
膽固醇是體內重要的脂類物質, 可以合成各種類固醇激素。總膽固醇濃度的高低反映了脂類吸收狀況, 同時可以反映肝臟脂肪代謝狀況[23]。本實驗結果表明, 草魚攝食棉粕替代魚粉蛋白的飼料后, 其血清總膽固醇含量顯著下降。有研究發現, 在狼鱸飼料中使用植物蛋白源替代魚粉, 導致血清的總膽固醇含量降低。可能是由于膽汁鹽排泄增加, 或膽固醇胃腸道吸收受到限制, 或僅僅是因為植物蛋白源替代導致飼料中膽固醇含量不足所導致[24]。
AST和ALT是廣泛存在于肝臟為主的細胞線粒體中的重要氨基轉移酶, 在機體蛋白質和氨基酸代謝中起著重要作用, 其活性與氨基酸代謝強弱有關。血清中AST和ALT可以作為魚類評價肝臟損傷程度的主要指標[25]。Cai,.[9]研究發現異育銀鯽飼料中棉粕添加量高達56%, 其AST和ALT和對照組無顯著差異, 本實驗結果和其一致。

隨著飼料中棉粕含量的升高, 魚體水分呈現顯著上升的趨勢。在通常情況下, 隨著飼料中植物蛋白源比例的上升, 水生動物的水分含量上升, 干物質含量下降, 這表明水生動物對植物蛋白源的利用率低于魚粉[26]。但Yue和Zhou[4]研究發現奧尼羅非魚隨著飼料中棉粕含量的升高, 魚體水分含量呈現下降的趨勢。類似的, 尼羅羅非魚的魚體水分隨著飼料中棉粕含量的升高呈現下降的趨勢[5]。
總之, 本研究表明, 草魚[初始平均體重(100.0± 0.29) g]飼料中棉粕替代魚粉蛋白的比例可以達43.3%, 飼料中棉粕含量為24.46%, 而不影響草魚的生長。
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EFFECT OF REPLACEMENT OF FISH MEAL WITH COTTONSEED MEAL ON GROWTH, HEMATOLOGICAL PHYSIOLOGY, AND BODY COMPOSITION OF GRASS CARP
YAN Quan-Gen1, 2, ZHU Xiao-Ming1, YANG Yun-Xia1, HAN Dong1, 3, JIN Jun-Yan1, XIE Shou-Qi1and LI Zhong-Jie1
(1.State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China;2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China; 3. Freshwater Aquaculture Collaborative Innovation Center of Hubei Province, Wuhan 430070, China)
To evaluate the effects of replacement of fishmeal with cottonseed meal on growth, feed utilization, hematological physiology, and body composition of juvenile grass carp [mean initial body weight of (100.0±0.29) g], seven isonitrogenous and isoenergetic diets (C, R20, R40, R60, R80, R90 and R100) containing graded levels of cottonseed meal (CSM) (replacing 0, 20%, 40%, 60%, 80%, 90%, and 100% FM protein by CSM protein) were fed to triplicate groups of fish for 8 weeks. The results showed that the diets containing ≥ 60% of replacement levels significantly diminished the specific growth rate () of the fish compared with the non-replacing group (<0.05). The increased levels of CSM significantly decreased,and(<0.05), and the optimal replacement level by CSM was 43.3% protein. CSM had no significant effects on the ALT activity, AST activity or the content of TGy (>0.05). Moreover, the dietary CSM reduced the content of serum TCh, HDL-C and LDL-C, and the significant difference was observed when the replacement is 40% or more. The dietary CSM at all graded levels had significant effect on the water content of fish body (<0.05), but it did not regulate the content of protein or ash of the fish body. The role of diatery CSM in regulating the lipid and gross energy contents is concentration-dependent: R20 diet significantly increased them compared to the control group (<0.05); R100 diet significantly decreased them; (<0.05); R40, R60, R80, or R90 did not have significant effects.
Cottonseed meal; Fishmeal; Grass carp; Growth; Hematological physiology; Body composition
2012-03-22;
2013-12-07
現代農業產業技術體系建設專項資金(CARS-46-19); 公益性行業(農業)專項(201003020, 201203015); 國家973項目(2009CB118702)資助
嚴全根(1978—), 男, 江西人; 博士研究生; 研究方向為魚類營養學。E-mail: qgyan@sina.com
解綬啟, E-mail: sqxie@ihb.ac.cn
S965.1
A
1000-3207(2014)02-0362-08
10.7541/2014.51