腎性高血壓模型建立法*
——從“兩腎一夾”到“單腎可控結扎”

毛曉燕，胡東旭，冉兵（瀘州醫學院:附屬醫院小兒科；生理教研室，四川瀘州646000）

腎性高血壓模型建立法*
——從“兩腎一夾”到“單腎可控結扎”

毛曉燕，胡東旭1，冉兵1
（瀘州醫學院:附屬醫院小兒科；1生理教研室，四川瀘州646000）

目的:探討銀針與左腎動脈共結扎后抽取銀針造成左腎動脈縮窄的方法以改良“兩腎一夾”法復制腎性高血壓模型。方法:選50只150 g SD雄性大鼠,隨機分為5組，每組10只，分別為0.10mm組、0.20mm組、0.25mm組、0.30mm組、0.35mm組。每組均采用大鼠背側臥位，切口取左側肋弓下緣平行于脊柱約0.5 cm處，暴露腎臟選取不同直徑針灸針與左腎動脈共結扎，然后抽出針灸針造成左腎動脈不同程度的狹窄。術前后連續監測動物血壓5周，術后4周觀測模型成功率及腎臟形態。結果:不同口徑的左腎動脈狹窄模型術后1～2周內血壓均升高，特別是第2周更為顯著，與術前對照差異有統計學意義（P＜0.05）,組間比較差異無統計學意義。結論：0.25mm管徑的左腎動脈狹窄能成功的復制實驗性腎性高血壓模型。

腎性高血壓；動物模型；大鼠；兩腎一夾

目前各種腎性高血壓動物模型多以大鼠為實驗動物，縮窄其腎動脈以形成腎性高血壓。腎性高血壓（renalhypertension）是由于腎實質或腎動脈病變引起的全身動脈血壓升高，腎動脈狹窄，腎內灌注壓降低和腎實質疾病等因素使球旁細胞釋放大量腎素，引起腎素-血管緊張素-醛固酮系統（RAAS）高活動水平是腎素依賴型腎性高血壓的主要發病機制[1]。各種腎性高血壓動物模型多以大鼠為實驗動物，傳統模型主要有“一腎一夾法”、“兩腎一夾法”和“雙腎雙夾法”，均采“u”型銀夾縮窄大鼠腎動脈以制備腎性高血壓模型。但銀夾制作困難，且內徑不好控制，成功率不高。其中“二腎一夾”法和“雙腎雙夾法”在形成高血壓的同時均有慢性腎功能損傷。本研究采用銀針與左腎動脈共結扎后抽取銀針造成腎動脈縮窄的方法以改良“兩腎一夾”法制備腎性高血壓模型且成功率高。

1 實驗材料與儀器

1.1 實驗動物及分組

SD大鼠（130±20 g），雄性，由重慶隆鑫公司提供，動物隨機分為5組，每組動物10只，分別為0.10 mm組、0.20mm組、0.25mm組、0.30mm組、0.35mm組。

1.2 儀器和器械

1.2.1 主要儀器

動物無創動脈血壓測量儀（成都泰盟公司）。

1.2.2 實驗器械和藥品

針灸針（北京漢醫醫療器械中心）、鑷子、止血鉗、大剪刀、組織剪、眼科剪、動脈夾、玻璃分針、燒杯、棉簽、紗布、細線等。3%的戊巴比妥鈉、30%的H2O2；2%的碘伏、75%的酒精、0.9%的生理鹽水等。

1.3 實驗方法

3%戊巴比妥鈉（0.1～0.3m l/100 g）腹腔注射麻醉，約1～2min內將麻藥緩慢注入，并注意觀察大鼠的呼吸、心率、角膜反射及肌張力的變化。將大鼠背側臥位，固定消毒備皮后在左側肋弓下緣平行于脊柱約0.5 cm處向下剪開一約1.5～2.0 cm的切口，逐層剪開至腹腔。以0.9%的生理鹽水打濕后的紗布將腎臟輕輕移至腹外，確保腎蒂不能出現扭轉或扭曲，并以濕紗布遮蓋腎臟，以免腎臟失水干燥，盡量減少環境和操作對腎臟的損傷。充分暴露腎臟及腹主動脈，以溫紗布輕輕將腎動脈鞘表面的脂肪拭去，在腹主動脈與腎動脈的分叉處用玻璃分針將腎動靜脈分開，剝離約0.5～1.0 cm的長度，穿單線備用，用不同直徑的針灸針放于腎動脈上方與腎動脈平行，用6-0號手術線結扎腎動脈后抽出針灸針，造成腎動脈狹窄。

1.4 鼠尾動脈無創血壓測量

將大鼠放于鼠套內固定，置于無創動脈血壓儀器預熱箱內并將預熱溫度設置在37℃，保溫15～20min，使尾動脈擴張。先將血流阻斷器套于大鼠尾部近心段，脈搏感受器至于鼠尾中上1/3處，感受點置鼠尾的正下方固定。待動物安靜后，打開無創動脈血壓測量軟件，可見有動脈脈搏信號出現。當規律性的脈搏波出現后，控制加壓套內壓力升高直到脈搏波完全消失，儀器自動放氣，第一個重新出現的脈搏波所對應的壓力值即為收縮壓（SP），當波形出現最高點時即為舒張壓（DP，見圖1）。

圖1 無創動脈血壓測量

1.5 腎性高血壓模型標準

舒張壓在80mmHg以下的為正常大鼠，手術后4周動物舒張壓明顯大于手術前收縮壓，舒張壓超過100mmHg，且解剖后左腎腎臟無壞死、鈣化、萎縮為復制腎性高血壓模型成功。術后血壓未升高、死亡為失敗予以剔除。

1.6 統計學方法

實驗所得數據均以x±s表示，應用SPSS13.0軟件進行數據處理，組間采用重復測量的方差分析；實驗組內各對應觀察的比較采用配對t檢驗。P＜0.05認為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同程度左腎動脈狹窄模型血壓的變化

不同口徑的左腎動脈狹窄模型術后1～2周內血壓均升高，特別是第2周更為顯著，與術前對照差異均具有統計學意義（P＜0.05）,組間比較差異不具有統計學意義。0.10mm組第2周血壓仍維持較高水平，第4周后幾乎回降到正常水平。0.20mm組術后1周血壓逐漸下降。0.25mm組動物血壓持續維持高水平，4周后升至最高，收縮壓達153.68±24.05mmHg，舒張壓達120.03±18.98mmHg；0.30mm及0.35mm組2周后血壓均恢復正常。提示，0.25mm管徑的左腎動脈狹窄能成功的復制實驗性腎性高血壓模型（見表1，圖2）。

圖2 不同程度左腎動脈狹窄模型平均動脈壓（AP）的動態變化

表1 不同程度左腎動脈狹窄模型平均動脈壓（AP）的動態變化（x±s,n=10）

2.2 不同程度左腎動脈狹窄模型腎形態及模型成功率對比

0.10 mm組腎臟解剖發現腎臟重量超過40 g以上，腎內組織失去結構呈干酪樣壞死。0.20mm組大部分動物腎臟萎縮鈣化，模型成功率為10%。0.25 mm組腎臟完好，無萎縮鈣化及水腫，模型成功率可達80%以上。0.30mm組大部分動物血壓基本正常，未發現腎臟形態異常，成功率約為10%。0.35mm腎臟未發現任何改變，模型成功率為零。

實驗提示：0.25mm組的左腎動脈狹窄能成功的復制實驗性腎性高血壓模型，見圖3。

圖3 不同程度左腎動脈狹窄模型腎形態變化

3 討論

腎疾患時出現的高血壓謂之腎性高血壓（renal hypertension），為繼發性高血壓中最常見者。不同口徑的左腎動脈狹窄模型術后1～2周內血壓均升高，特別是第二周更為顯著，考慮到可能是機體應急現象，0.1mm組第2周血壓仍維持較高水平，第4周后幾乎回降到正常水平，腎臟腫大內呈干酪樣壞死，誘發腎臟腫大的原因很多，考慮到可能是動脈狹窄口徑過小，腎皮質出現炎癥腎小管上皮細胞變性和壞死脫落，并伴有明顯的增生出現，導致腎功能衰竭，繼而出現此癥[2]。0.20mm組術后第2周血壓逐漸下降，腎臟萎縮鈣化，考慮可能是腎動脈狹窄時，腎血流灌注減少，腎素血管緊張素活化，引起的腎血管性高血壓難以控制；而腎小球缺血性硬化，腎小管壞死，腎間質纖維化造成腎臟鈣化[3]。0.25mm組動物血壓持續維持高水平，4周后升至最高，收縮壓達153.68±24.05mmHg,舒張壓達120.03±18.98mmHg；0.30mm及0.35mm組2周后血壓均恢復正常，腎臟未發現任何改變，平均壓正常，我們考慮這種情況是狹窄的口徑不足，無法造成腎動脈的狹窄,腎素-血管緊張-醛固酮的系統激活。

以上結果說明腎動脈狹窄程度過大，腎嚴重缺血導致腎變性壞死，失去功能。腎動脈狹窄程度過輕，則腎血流量能基本滿足腎代謝的需求，腎結構和功能均能很好的保持，動脈血壓亦能維持相對正常。以0.25mm的針灸針所造成的左腎動脈狹窄，腎功能及腎結構均能維持正常，舒張壓可達100mmHg以上，能建立較理想的腎性高血壓模型。

1.Reinhold SW,Uihlein DC,Boger CA,et al.Renin, endothelial NO synthase and endothelin gene expression in the2 kidney-1 clip Goldblattmodelof long-term renovascularhypertension[J].Eur JMed Res,2009,14(12): 520～525.

2.SheaSM，R tmkova J，Morrison AB.A stereologicstudyof glomerular，hypertm phy in the subcotally nephrectc laized rat[J].Am JPathol，1978，90:201～210.

3.Brenner BM，M eyer TW.t-lostetter TH Dietary protein in—tlakeand the progessivenatureofkrdmey disease[J].N EnglJMed，1982，307:652～659.

（2013-10-17收稿）

An im proved renalhypertensionmodelestablishingmethod——From“twokidneyoneclip”to“onekidneyonecontrolled ligation”method

MaoXiaoyan，Hu Dongxu1，Ran Bing1
DepartmentofPediatrics，the Affiliated Hospitalof Luzhou MedicalCollege;1Departmentof Physiology,Luzhou MedicalCollege

Ob jective：To investigate the“ligation of leftrenalartery togetherwith aneedle ofdifferent thickness then extraction of theneedle”ways to improve the“tow kidney one clip”method ofestablishing renal hypertension model.Methods：50SDmale rats（150 g）were random ly divided into0.10mm,0.20mm,0.25mm,0.30mm and 0.35mm thicknessgroups（n=10）.The ratswereputin dorsal lyingposition,leftsubcostalincisionwas taken parallelto the spine at about 0.5 cm to expose kidney,acupuncture needle with different diameterswas selected and ligated togetherwith left renal artery，and then extracted out to leave the left renal artery with different degree of calibre. Continuousmonitoring rat'sblood pressurebeforeand after surgery for fiveweeks,4weeksafteroperation themodel success rate and renalmorphology were observed.Results:The blood pressure in 5 groups of renal artery stenosis modelafter1 to2 weekswere all,increased especially at the first twoweeks,comparedwith the preoperative control；the difference was statistically significant(P＜0.05).The inter-group difference was not statistically significant. However,the success rateand the condition ofkidney in 0.25mm group wasbetter than in othergroups.Conclusion: The0.25mm calibered leftrenalarterystenosiscan successfully replicatetheexperimentalmodelofrenalhypertension.

Renalhypertension;Animalmodel;Rat;Twokidneyoneclip

R544.1+4

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2014.02.013

*四川省衛生廳科研課題（川衛辦發[2009]46490188）

毛曉燕（1983-），女，住院醫師，碩士，E-mail: 2533146563@qq.com

冉兵（1969-），男，教授，研究生導師，E-mail: 2782909@qq.com