轉錄因子-κB在彌漫性大B細胞淋巴瘤組織中的表達及意義

丁凱陽，楊 艷，王 芳，張瑰紅，王志華

(1安徽醫科大學附屬省立醫院，合肥230001;2安徽醫科大學)

彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤最常見的類型，在形態學、遺傳學和臨床表現上都具有明顯的異質性［1］。近年來，以利妥昔單抗和蒽環類藥物為基礎的聯合化療方案已從根本上改善患者病情，但仍有30%以上的DLBCL患者在標準治療后復發或難治［2］。目前已發現轉錄因子(NF)-κB在多發性骨髓瘤、淋巴瘤等腫瘤細胞中異常活化，是腫瘤預后不良的分子指標之一［3］。2010年9月～2012年9月，我們檢測了DLBCL組織中NF-κB的表達，并探討其意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集安徽省立醫院82例DLBCL患者的腫瘤組織標本，患者均資料齊全、未經治療;由2名病理科主任醫師按2008年WHO淋巴系統腫瘤病理分類標準，并與10例淋巴結反應性增生組織對比進行確診。其中男45例、女37例，年齡7～83歲;發病部位:淋巴結外53例，淋巴結內29例;Ⅰ～Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期54例。參照Hans等［4］的方法，分為生發中心B細胞樣(GCB)型17例和非生發中心B細胞樣(non-GCB)型65例。

1.2 方法

1.2.1 NF-κB檢測方法 所有標本經10%中性甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋切片。常規HE染色，確定為DLBCL組織。采用免疫組化法檢測NF-κB，嚴格按照說明書操作，同時以PBS代替一抗作為陰性對照。陽性表達判斷標準［5］:NF-κB p50陽性染色定位在細胞質或細胞核，呈淡黃至棕黃色顆粒狀，見插頁Ⅱ圖4。每張切片于400倍光鏡下隨機選取5個視野，根據平均陽性細胞百分比及染色強度的乘積表示表達情況。染色強度無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽性細胞陰性為0分，＜10%為1分，10% ～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。兩者乘積≥3為陽性，0～3為陰性。

圖4 NF-κB陽性表達

1.2.2 預后觀察方法 隨訪時間從確診之日到2012年4月30日或死亡之日。隨訪資料來源于病例記錄或電話聯系，記錄患者的生存情況。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。率的比較采用χ2檢驗，Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，存活期比較采用Log-rank檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NF-κB表達及其與臨床病理參數的關系 NF-κB表達陽性、陰性各41例。NF-κB陽性表達與臨床病理參數的關系，見表1。

表1 NF-κB陽性表達與臨床病理參數的關系［例(%)］

2.2 生存情況比較 隨訪76例，失訪6例，隨訪率92.68%，隨訪時間0.5～73個月;其中46例死亡，死亡率60.53%。76例患者 Log-rank檢驗結果顯示，GCB型患者存活期為4～64個月，non-GCB型為0.5～41個月，P ＜0.05。NF-κB 表達陽性患者存活期為0.5～73個月，陰性為1～73個月，P ＞0.05。GCB型中，NF-κB表達陽性患者存活期為10～64個月，陰性為4～61個月，P ＞0.05;non-GCB 型中，NF-κB表達陽性患者存活期為0.5～73個月，陰性為1～73 個月，P ＞0.05。

3 討論

NF-κB在DLBCL細胞中持續活化，其過表達可能促進腫瘤細胞增殖及腫瘤的惡性進展。p50是NF-κB蛋白的亞單位，目前免疫組化法檢測NF-κB蛋白抗體多采用 p50。研究證實，DLBCL患者中non-GCB型較GCB型發病率高、生存期短。本研究發現，NF-κB在non-GCB型中的表達率為56.92%，高于 GCB型的 23.53%，與國內學者的研究相似［6，7］。這可能與 non-GCB 型 DLBCL 細胞來源于后生發中心B細胞向漿細胞分化過程中的某個階段，從而高表達BCR途徑活化的靶基因有關。體外實驗還發現，抑制NF-κB信號傳導通路對non-GCB型DLBCL細胞株是有毒性的，而對GCB型DLBCL細胞株增殖沒有影響［8］。Davis等［9］研究表明，NF-κB的靶基因在很多ABC-DLBCL細胞系中明顯高表達，而在GCB型DLBCL細胞中低表達。因此，NF-κB信號通路活化可能是活化B細胞樣(ABC)-DLBCL細胞系的共同特征，NF-κB的作用可能是在其他癌基因的作用下阻止腫瘤細胞凋亡，促進其轉化。

從臨床治療方面看，傳統聯合化療(CHOP)后的ABC-DLBCL患者預后比GCB型患者差［10］。NF-κB信號傳導通路異常活化，表達一些與腫瘤侵襲性生長有關的靶基因可以解釋臨床上這種差異性，故檢測NF-κB有利于亞型與預后的判斷。異常的NF-κB活化可以促進腫瘤的生長，也可使腫瘤細胞對化療和放療產生抑制。體外實驗證明，利妥昔單抗可抑制NF-κB活性，但是經利妥昔單抗聯合CHOP化療后的DLBCL預后在兩組間無差異性，所以這一結果對于臨床有何意義仍未知［11］。

目前，針對NF-κB通路的藥物尚在進一步研究中，臨床上泛蛋白水解酶抑制劑硼替佐咪多用于治療復發性難治性多發性骨髓瘤。研究表明，經過6個周期的CHOP聯合硼替佐咪治療后，88%的DLBCL患者獲得了完全緩解，2年無病生存率和總生存率都達到了100%［12］。本研究中，NF-κB表達陽性、陰性患者存活期未見明顯差異，可能與未使用或少數使用恩扎妥啉及硼替佐咪有關，有待于延長隨訪時間、增加病例數或加入阻斷NF-κB活化的藥物等進一步研究。

綜上所述，NF-κB在non-GCB型的表達率高于GCB型，而non-GCB型患者的生存期較GCB型明顯縮短。檢測DLBCL中NF-κB的表達有利于判斷臨床亞型和預后，并為選擇性使用NF-κB抑制劑提供理論依據。隨著分子生物學和免疫學的發展，NF-κB的作用機制將成為下一步研究的重點。

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