白芍總苷對葡萄膜炎模型大鼠的保護作用Δ

吳 偉，何梅鳳，郭澤莉，黃祥坤，鐘建文（中山大學中山眼科中心，廣州 510060）

葡萄膜炎是眼科常見的致盲眼病之一，病因和致病機制復雜，主要與自身免疫有關，其治療以糖皮質激素和環孢素、環磷酰胺、苯丁酸氮芥、他克莫司等免疫抑制劑為主，但此類藥物往往因毒副作用大而使有些患者不能耐受，給臨床治療帶來極大的困難。因此，亟需開發新的安全有效藥物治療葡萄膜炎。白芍總苷是我國傳統中藥白芍根中提取的有效成分，廣泛應用于類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、干燥綜合征、特發性關節炎、特發性血小板減少性紫癜、慢性蕁麻疹等多種疾病的治療[1-3]，在炎癥免疫性疾病中發揮了重要作用。本研究通過內毒素（LPS）誘導的葡萄膜炎模型大鼠，初步探討白芍總苷對葡萄膜炎模型大鼠的保護作用，以期為葡萄膜炎的臨床治療提供一種新的選擇。

1 材料

1.1 儀器

Axioplan 2型熒光顯微鏡（德國Zeiss公司）；SL-D7/DC-3型裂隙燈數碼圖像處理系統（日本Topcon公司）。

1.2 內毒素與藥品

傷寒桿菌（LPS，美國Sigma公司，批號:032 M4002 V）；白芍總苷膠囊（寧波立華制藥有限公司，批號:120312，規格:0.3 g/粒）；醋酸潑尼松片（天津藥業焦作有限公司，批號:12040411，規格:5mg/片）。

1.3 動物

SPF級SD大鼠32只，♀♂兼用，體質量200～220 g，由南方醫科大學實驗動物中心提供[實驗動物使用許可證號:SCXK（粵）2011-0015]。

2 方法

2.1 復制模型

[4]方法，將LPS溶于生理鹽水中，使之終質量濃度為2 g/L，分別在SD大鼠的雙后足底部注射50μl以復制大鼠葡萄膜炎模型。

2.2 分組與給藥

32只SD大鼠隨機均分為4組，即正常對照（等容生理鹽水）組、模型（等容生理鹽水）組、白芍總苷（4.8 g/kg）組、醋酸潑尼松（0.05mg/kg）組。于復制模型前ig給藥，白芍總苷每隔6h給藥1次，共3次；醋酸潑尼松僅單次給藥。

2.3 大鼠眼部臨床表現觀察

分別于注射LPS 6、12、18、24、36、48 h后，用裂隙燈顯微鏡觀察大鼠眼部臨床表現，參照文獻[5]臨床評分方法:虹膜充血，0～2分；前房內滲出，0～2分；前房積膿，0～2分；瞳孔縮小，0～2分；總分為8分。

2.4 病理學檢查

于注射LPS 18、24、36、48 h后各組隨機處死2只大鼠，取眼球作病理檢查。鹽酸氯胺酮（0.3ml）和鹽酸氯丙嗪（0.3ml）混合后ip大鼠進行麻醉。沿胸骨兩側剪開胸腔，暴露心臟，心尖部注射0.3ml肝素鈉注射液（1500u/ml），用4Ⅸ預冷的0.01 mol/L PBS緩慢灌注，直到肝臟變白，再用40ml/L多聚甲醛溶液灌注固定。小心摘取眼球置40ml/L多聚甲醛溶液中固定24h。作常規石蠟包埋切片，HE染色，熒光顯微鏡觀察結果。

2.5 統計學方法

實驗數據均采用SPSS13.0進行分析，數據以表示。組間單因素比較先用單因素分析其正態分布，后以LSD法進行統計，方差不齊時，各組間兩兩比較采用Tamhance’s T2檢驗。不同時間點測定同一數據采用重復測量方差分析法。P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 白芍總苷對模型大鼠眼部炎癥的影響

正常對照組大鼠未見炎癥發生。模型組大鼠注射LPS 6h開始出現瞳孔縮小，結膜充血，虹膜血管輕度擴張，并表現出畏光；12h時瞳孔進一步縮小，結膜、虹膜充血加重，瞳孔緣開始出現纖維素樣滲出；18h時炎癥進一步加重；24h時達炎癥的高峰，大鼠瞳孔顯著縮小，虹膜充血明顯，前房纖維素樣滲出明顯增多，甚至前房積膿。白芍總苷組大鼠注射LPS 6h結膜輕度充血；12h時開始出現瞳孔縮小，虹膜輕度充血，并表現出畏光；18～24h時，瞳孔進一步縮小，虹膜充血明顯，瞳孔區靠近虹膜緣處隱約見少量纖維素樣滲出，但前房內未見白色積膿。注射LPS 36h后各組大鼠炎癥開始減退。各時間點與模型組比較，白芍總苷組大鼠眼部炎癥臨床評分降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。大鼠眼部炎癥臨床評分見表1（正常對照組僅作參考，表中未列出）。

表1 大鼠眼部炎癥臨床評分（）Tab 1 The clinical score of ocular inflammation in rats（）

表1 大鼠眼部炎癥臨床評分（）Tab 1 The clinical score of ocular inflammation in rats（）

與模型組比較:＊P＜0.05vs.model group:＊P＜0.05

時間12h（n＝16）總評分3.12±0.722.00±0.37＊1.81±0.40＊6.5±0.823.69±0.70＊3.56±0.51＊6.67±0.894.08±0.67＊3.92±0.67＊炎癥臨床評分18h（n＝16）24h（n＝12）組別模型組白芍總苷組醋酸潑尼松組模型組白芍總苷組醋酸潑尼松組模型組白芍總苷組醋酸潑尼松組虹膜充血1.56±0.511.06±0.251.00±0.002.00±0.001.50±0.521.44±0.512.00±0.001.50±0.521.50±0.52前房內滲出0.38±0.500.00±0.000.00±0.001.63±0.500.81±0.400.69±0.491.67±0.491.00±0.430.92±0.51前房積膿0.00±0.000.00±0.000.00±0.001.06±0.570.00±0.000.00±0.001.08±0.510.00±0.000.00±0.00瞳孔縮小1.19±0.400.94±0.250.88±0.341.81±0.401.38±0.501.44±0.511.92±0.291.58±0.511.5±0.52

3.2 白芍總苷對模型大鼠眼部病理學的影響

正常對照組未見炎癥發生。注射LPS 18h后模型組大鼠虹膜睫狀體水腫明顯，前后房、玻璃體內有炎癥細胞浸潤，前房內纖維素樣滲出明顯，視網膜水腫增厚，有炎癥細胞浸潤，炎癥的高峰期持續至24h。白芍總苷組大鼠眼部炎癥較模型組明顯減輕，在炎癥的高峰期虹膜睫狀體水腫明顯減輕，僅有少量的炎癥細胞浸潤，前房有少量的纖維素樣滲出，視網膜的浸潤細胞明顯減少。注射LPS 36h時各組大鼠眼部炎癥開始減退，虹膜睫狀體腫脹、炎癥細胞浸潤、前房纖維素樣滲出等炎癥表現均較24h時明顯減輕。48 h眼部炎癥已基本減退。注射LPS 24h后大鼠眼前段和后段的病理學改變見圖1、圖2。

圖1 注射LPS 24h后大鼠眼前段組織病理學改變A.正常對照組；B.模型組；C.白芍總苷組；D.醋酸潑尼松組Fig 1 Histopathological change in anterior segment of eye in rats 24h after injection of LPS for 24hoursA.normal control group；B.model group；C.TGP group；D.prednisone acetate group

圖2 注射LPS 24h后大鼠眼后段組織病理學改變A.正常對照組；B.模型組；C.白芍總苷組；D.醋酸潑尼松組Fig 2 Histopathological change in posterior segment of eye in rats 24h after injection of LPSA.normal control group；B.model group；C.TGP group；D.prednisone acetate group

4 討論

近年研究顯示，白芍總苷可通過多種途徑發揮抗炎和免疫調節作用。劉國玲等[6]的研究發現，白芍總苷對類風濕性關節炎模型大鼠炎癥有抑制作用，其機制可能與下調NF-kB/p65蛋白的表達，降低類風濕性關節炎模型大鼠血清中腫瘤壞死因子（TNF）-α、白介素（IL）-1 β的水平有關。劉朝東等[7]觀察了白芍總苷對慢性非細菌性前列腺炎模型大鼠的作用，發現白芍總苷可能通過抑制CD3+T淋巴細胞等炎癥細胞的浸潤，降低IL-6等促炎癥細胞因子的過高表達。謝長江等[8]研究顯示，白芍總苷能降低IL-1、IL-6及TNF-α水平，減輕膿毒血癥模型大鼠的炎癥反應及肺組織的損傷程度，降低病死率。此外，白芍總苷能抑制膠原誘導性關節炎大鼠滑膜細胞增殖，下調β抑制蛋白-2的表達，并能降低血清促炎癥細胞因子IL-1 β、TNF-α和前列腺素（PG）E2水平，從而對模型大鼠膠原誘導性關節炎產生抑制作用[9-12]；白芍總苷還能抑制脂多糖誘導的炎癥反應及TNF-α、IL-6過度分泌[13-14]。由此可見，白芍總苷可以在多個環節影響自身免疫疾病的細胞免疫、體液免疫以及炎癥過程，減輕自身免疫性炎癥反應。在眼科臨床，有學者應用白芍總苷治療內因性葡萄膜炎發現，它能改善患者細胞與體液免疫異常狀況，并有一定的治療作用[15]。提示其對緩解葡萄膜炎的炎癥反應可能起著一定的作用，具有潛在的應用價值。

本研究選用大鼠葡萄膜炎模型，以ig給藥方式探討了白芍總苷對葡萄膜炎的保護作用。結果發現，白芍總苷對模型大鼠的臨床癥狀、疾病進程、病理進程均有不同程度減輕，其主要原因可能與白芍總苷的抗炎及免疫調節有關，但尚需進一步研究驗證。同時，白芍總苷不良反應少，并且還有肝臟保護作用，有良好的耐受性[16-17]。因此，對于因自身免疫原因而反復發作，遷延不愈，需長期規范用藥才能控制的葡萄膜炎，以及不宜應用強效免疫抑制劑或激素治療的葡萄膜炎患者，白芍總苷將是一種較為理想的藥物。

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