p H示差法測定不同種類藍果忍冬總花色苷含量

王藝菲，辛秀蘭，陳亮，霍俊偉，*

（1.東北農業大學園藝學院，黑龍江哈爾濱150030；2.北京電子科技職業學院，北京100029；3.北京化工大學化工資源有效利用國家重點實驗室，北京100029）

藍果忍冬 （Lonicera caerulea L.）俗稱山茄子、黑瞎子果、羊奶子等，在植物學分類上屬于忍冬科（Caprifoliaceae）、忍冬屬（Lonicera Linn.），主要分布在北半球的寒帶漿果帶，北美和北歐各國以及我國東北和新疆。我國東北大小興安嶺和長白山蘊含著豐富的藍果忍冬野生資源[1]。藍果忍冬是一種新開發的，具有北方特色的小漿果樹種，果實富含糖類、有機酸、礦物質、維生素和多種微量元素，口感酸甜，略有苦味，可鮮食，也可加工成飲料、果醬、果糕和果酒，具有很高的保健價值。莖葉和果實可提取天然紫紅色素，是天然食品添加劑的重要來源，可入藥。因其名貴、稀有、風味獨特、污染少，且有滋補和藥用功效，故而成為理想的天然保健營養食品，被世界糧農組織定為世界稀有珍貴野生漿果[2]。藍靛果忍冬含有豐富的花青素、維生素等物質，營養成分和營養價值和越橘很相似，但對土壤等栽培條件的要求卻不象越橘那么特殊，因此，某種程度上可以替代越橘進行栽培[3]。

花色苷不僅是一種天然食用色素，而且具有緩解視疲勞、增強記憶力、抗菌抗氧化作用，還可以改善血液循環、預防心血管疾病、抗癌防癌[4-7]。目前我國尚缺乏藍果忍冬優良品種，特別是國內珍貴的野生資源沒有得到合理的開發利用。據中國植物志記載，在我國野生藍果忍冬主要有兩個種類，即分布在東北地區的藍靛果忍冬（Lonicera edulis），在新疆分布的阿爾泰忍冬（Lonicera altaica）。本文利用pH示差法，對這兩種野生藍果忍冬的總花色苷含量進行測定和評價，以其為今后選育藍果忍冬優良品種提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

藍果忍冬冷凍果；鹽酸、乙醇、氯化鉀、乙酸鈉均為分析純：北京化工廠；雷磁PHS-3C-S型精密pH計：上海雷磁儀器廠；model C9860A超聲波清洗器：天津市科貝爾光電技術有限責任公司；7DZ5-WS多管架自動平衡離心機：湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；7600-1紫外可見分光光度計：上海菁華科技儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 藍果忍冬樣品的選取

2012年6月份在東北農業大學園藝試驗站藍果忍冬種質資源圃中，選取了20株果實形態良好的藍果忍冬野生株系，其中10株為來自吉林長白山地區的藍靛果忍冬，10株來自新疆阿爾泰地區的阿爾泰忍冬。將每個植株進行命名，采自吉林長白山地區的藍果忍冬依次命名為 C1，C2，C3，C4，C5，C6，C7，C8，C9，C10；采自新疆阿爾泰地區的藍果忍冬依次命名為A1，A2，A3，A4，A5，A6，A7，A8，A9，A10。將果實放入-20 ℃冰柜中冷凍保存。

1.2.2 藍果忍冬花色苷的提取

取藍果忍冬冷凍果3g，研磨，加入30mL60%乙醇（含有0.1%HCl），超聲 30min，溫度20℃，4000r/min 離心15 min，殘渣再另加30 mL提取溶劑，重復操作2次，洗提濾渣至無色，合并3次上清液，定容至100 mL。

1.2.3 緩沖液的配制

pH為1的緩沖液（準確稱取1.86 g的KCl，與980 mL蒸餾水混合，用HCl校正pH至1.0，移至1 L容量瓶中，用蒸餾水定容）。

pH為4.5的緩沖液（準確稱取54.43 g CH3COONa，與960 mL水混合，用HCl校正pH至4.5，移至1 L容量瓶中，用蒸餾水定容）。

1.2.4 經驗公式的選取

花色苷含量（mg/100 g）=（A/εL）×MW×DF×V/Wt×100

式中：A為吸光度；ε為矢車菊-3-葡萄糖苷消光系數，26 900；L為比色皿光程，1 cm；MW為矢車菊-3-葡萄糖苷分子量，449.2；DF為稀釋因子；V為最終體積，mL；Wt為產品重量，mg；

2 結果與分析

2.1 最大吸收波長的確定

將提取液經過pH為1.0和pH為4.5緩沖液稀釋，在400 nm～800 nm波長范圍內進行可見光掃描，掃描結果見圖1，確定藍果忍冬花色苷最大吸收波長為510 nm。

圖1 藍果忍冬花色苷光譜掃描曲線Fig.1 Spectral scanning curve of anthocyanin in blue honeysuckle

2.2 平衡時間的確定

表1 藍果忍冬花色苷吸光值Table 1 Blue honeysuckle anthocyanin absorption value

由表1，在pH為1.0的緩沖液中，花色苷的吸光值隨時間的延長而逐漸增加，在60 min時基本達到穩定；在pH為4.5的緩沖液中，花色苷的吸光值隨時間的延長而減小，在40 min時基本達到穩定。因此，綜合考慮，平衡時間確定為60 min。

2.3 總花色苷含量的測定

取2.5 mL提取液，分別用pH為1.0和pH為4.5的緩沖液定容至25 mL。待達到平衡時間后，在最大吸收波長下測定吸光值，計算花色苷含量。吉林長白山地區的10株野生藍靛果忍冬的總花色苷含量見表2，圖2。

表2 吉林長白山地區藍靛果忍冬總花色苷含量Table 2 Total anthocyanin content of L.caerulea var edulis in Changbai Mountain area

圖2 吉林長白山地區藍靛果忍冬總花色苷含量Fig.2 Total anthocyanin content of L.caerulea var edulis in Changbai Mountain area

由表2和圖2中可以看出，采自吉林長白山地區的10株野生藍靛果忍冬中，總花色苷含量最低的為C2：284.72 mg/100 g，含量最高的為C10：657.10 mg/100 g。10個野生品種的總花色苷含量平均值為411.30mg/100 g，標準差為116.77，其中有四個野生品種C3、C6、C9、C10的總花色苷含量高于平均值。

新疆阿爾泰地區的10株野生阿爾泰忍冬的總花色苷含量見表3，圖3。

表3 阿爾泰忍冬總花色苷含量Table 3 Total anthocyanin content of L.caerulea var altaiea

圖3 阿爾泰忍冬總花色苷含量Fig.3 Total anthocyanin content of L.caerulea var altaiea

由表3和圖3，采自新疆阿爾泰地區的10株野生阿爾泰忍冬中，總花色苷含量最低的為A2：238.24mg/100g，含量最高的為A10：540.49 mg/100 g。10個株系的總花色苷的平均值為403.28 mg/100 g，標準差為99.83，其中，有 6 個株系 A3、A5、A6、A8、A9、A10 的總花色苷含量超過平均值。

通過兩地野生藍果忍冬總花色苷含量平均值的對比，可以看出，采自吉林長白山地區的野生藍果忍冬品種的總花色苷含量更高，但采自新疆阿爾泰地區的野生藍果忍冬品種的標準差更小。

3 討論與小結

藍果忍冬是我國獨具特色的小漿果樹種，市場前景良好，但目前我國由于沒有優良品種而不能進行人工栽培，很大程度上限制了藍果忍冬的良性發展，珍貴的野生資源未能達到合理的開發。

本文從吉林長白山、新疆阿爾泰地區分別選擇了兩個不同種類的藍果忍冬野生株系，測得的總花色苷含量有明顯的差異。采自吉林長白山地區的藍靛果忍冬總花色苷含量平均值為411.30 mg/100 g，其中，最低值為C2：284.72 mg/100 g，而C10的總花色苷含量最高，達到657.10 mg/100 g；采自新疆阿爾泰地區的阿爾泰忍冬總花色苷的平均值為403.28 mg/100 g，其中，最低值為A2：238.24 mg/100 g，而A10的總花色苷含量最高，達到540.49mg/100g。據參考文獻顯示，紅樹莓中總花色苷含量為105mg/100g[10]；野生桑葚總花色苷含量為154.27mg/100g[11]；野生的越橘品種中，篤斯越橘為343.67mg/100g，而紅豆越橘僅為147.76mg/100g[12]。可見在幾種野生小漿果的總花色苷含量對比中，藍果忍冬的總花色苷含量非常高，甚至比越橘的花色苷含量還要高。本實驗表明我國野生藍果忍冬的花色苷含量具有豐富的遺傳多樣性，為今后合理選擇親本進行高花色苷品種選育工作提供了理論依據，對于藍果忍冬資源的開發利用和保護也具有重要的意義。

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