黑素瘤細胞黏附分子在慢性阻塞性肺疾病中的表達及意義

張 冬 王慧敏 何慧潔 王春娜 趙 剛 王德軍

包頭醫學院第一附屬醫院呼吸科，包頭 014010

黑素瘤細胞黏附分子在慢性阻塞性肺疾病中的表達及意義

張 冬 王慧敏 何慧潔 王春娜 趙 剛 王德軍

包頭醫學院第一附屬醫院呼吸科，包頭 014010

目的 比較慢性阻塞性肺疾病（COPD）穩定期、急性加重期和健康人群黑素瘤細胞黏附分子（MCAM）含量。 方法 選取COPD穩定期患者30例，COPD急性加重期患者30例及無COPD疾病的健康體檢者（對照組）30例，并通過流式細胞儀檢測3組MCAM的含量。結果COPD穩定期患者的MCAM含量顯著高于對照組，COPD急性加重期患者的MCAM含量明顯高于COPD穩定期患者及對照組（P＜0.05）。 結論COPD急性加重期內皮損傷主要在毛細血管，甚至持續至臨床癥狀消失之后，高水平MCAM提示肺部炎癥的存在，預示COPD患者容易急性加重。

黑素瘤細胞黏附分子；慢性阻塞性肺疾病；流式細胞術

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種常見的以持續氣流受限為特征的可以預防和治療的疾病，氣流受限進行性發展，與氣道和肺臟對有毒顆粒或氣體的慢性炎性反應增強有關，急性加重和并發癥影響疾病的嚴重程度，患者急性加重明顯加速肺功能的下降及增加患者死亡的風險，減少急性發作是COPD管理策略的重要組成部分［1］。近年來，越來越多的證據表明，血管內皮損傷與COPD病理生理過程密切相關。許多動物實驗已經表明，肺血管的內皮細胞損傷是肺泡破壞的基本機制［2-3］，而且推測內皮損傷發生在急性加重期，然而，COPD患者急性加重期對內皮細胞的影響不完全清楚。黑素瘤細胞黏附分子（MCAM）CD146+，定位于黏附連接之外，是由激活或凋亡的內皮細胞脫落的囊泡，數量增加反映患者發生血管內皮損傷［4-6］。本文主要檢測COPD患者穩定期和急性加重期的CD146+內皮細胞膜微粒數量，以評估這些細胞膜微粒與COPD疾病進展之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

COPD穩定期30例（標本采集前3個月無急性加重），男18例，女12例，平均年齡（58.36±7.26）歲；COPD急性加重期患者30例（COPD患者急性加重），男16例，女14例，平均年齡（64.23±6.38）歲；30例無COPD疾病的健康體檢者（對照組），男15例，女15例，平均年齡（62.76±8.26）歲。所有參與者簽署知情同意書。所有患者有呼吸困難，慢性咳嗽或咳痰病史。氣流受限定義為肺功能檢測吸入支氣管舒張劑后FEV1/ FVC＜0.70，嚴重程度分級依據慢性阻塞性肺疾病全球倡議（GOLD）標準。所有受試者入組前停止吸煙＞2個月。排除目前已知有導致循環內皮細胞膜微粒升高的受試者，包括心血管疾病，慢性腎衰竭，代謝性疾病如糖尿病、高脂血癥和血管炎。急性加重標準：急性加重的診斷基于入組前任意兩個主要癥狀（呼吸困難、咳痰和痰量）的增加，或者1個主要癥狀的增加和1個次要癥狀（喘息、咽喉腫痛、咳嗽、鼻塞/流涕）至少持續2 d，急性加重是需要抗生素治療和或全身糖皮質激素治療的呼吸道癥狀的惡化。

1.2 方法

采集患者及健康體檢者清晨空腹外周血2 ml，EDTA-K2抗凝，3000 r/min離心15 min，收集乏血小板血漿，取40 μl樣品與10 μl PE-CD146充分混勻，避光孵育20 min，加入5 μl熒光微球，避光孵育20 min，上機檢測。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0統計軟件對數據進行分析和處理，計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

3組的MCAM、FEV1、FEV1/FVC及FEV1%pre比較差異有統計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組相關觀察指標的比較（±s）

表1 兩組相關觀察指標的比較（±s）

與COPD急性加重比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05

組別 n MCAM（個/μl） FEV1（L） FEV1/FVC （%）FEV1%pre （%）COPD急性加重COPD穩定期對照組F值P值30 30 30 384.3±102.6 220.6±73.8*#84.9±34.7*117.75 ＜0.05 1.22±0.36 1.56±0.48*#2.68±0.52*83.32 ＜0.05 42.7±8.66 53.2±10.21*#76.2±5.36*127.05 ＜0.05 51.3±12.2 66.8±18.5*#98.3±10.2*86.74 ＜0.05

3 討論

COPD的特征性病理生理變化是持續氣流受限導致肺通氣功能障礙，隨著病情的發展，肺組織彈性日益減退，肺泡持續擴大，回縮障礙，則殘氣量及殘氣量占肺總量的比例增加，肺氣腫加重導致大量肺泡周圍的毛細血管受膨脹肺泡的擠壓而退化，導致毛細血管大量減少，肺毛細血管內皮損傷。內皮細胞在激活或凋亡過程中能釋放內皮細胞膜微粒［5-6］。細菌脂多糖、炎性反應細胞因子如TNF-α、IL-1、補體復合物C5b-9、聚集的低密度脂蛋白或活性氧簇刺激內皮細胞，使內皮細胞激活產生內皮細胞膜微粒，升高的Ca2+在內皮細胞膜微粒釋放過程中起重要作用。當內皮細胞激活時，大量Ca2+進入細胞質，使細胞膜脂類分布有關的酶-翻轉酶活性降低，使位于細胞膜內層的磷脂酰絲氨酸暴露于細胞表面，接著Ca2+依賴性蛋白水解酶將細胞骨架水解，釋放內皮細胞膜微粒［7-9］。

為了評估COPD患者急性發作引起的內皮損傷，本研究比較了COPD不同分期循環血中內皮細胞膜微粒（CD146+）數量，結果顯示，COPD穩定期MCAM含量為（220.6±73.8）個/μl，明顯高于對照組的（84.9± 34.7）個/μl，差異有統計學意義（P＜0.05）；COPD急性加重期MCAM含量為（384.3±102.6）個/μl，明顯高于COPD穩定期及對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），提示COPD急性加重期內皮損傷主要在毛細血管。高MCAM含量可能預測 COPD急性加重的易感性。MCAM定位于黏附連接之外，表明微粒的釋放反映了內皮結構的破壞。MCAM含量增加可能成為預測炎癥的部位和類型的可靠標志物。

高MCAM暗示嚴重的氣流受限，在COPD患者肺和全身血管內皮功能異常已經被確認，因此，在COPD進展中高水平細胞膜微粒可能意味著內皮損傷的一個角色。與每年的FEV1下降相比，MCAM水平能更快地反映。監測MCAM水平對于評估COPD進展有價值，其是可用于藥物開發的一個有用指標。

總之，COPD急性加重期內皮損傷主要在毛細血管，甚至持續在臨床癥狀消失之后，MCAM提示肺部炎癥的存在，預示COPD患者容易急性加重，COPD急性加重的診斷主要依據臨床癥狀，然而，臨床特征不具體，難以量化，監測MCAM的數量有利于評估患者的狀況，其能成為一個有用的藥物治療有效指標。

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Expression and significance of MCAM in patients with chroinc obstructive pulmonary disease

ZHANG DongWANG Hui-minHE Hui-jieWANG Chun-naZHAO GangWANG De-jun
Department of Respiration,the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College,Baotou 014010,China

ObjectiveTo compare MCAM number in stable COPD patients,acute COPD and normal control.MethodsMCAM numbers were examined in 30 stable COPD patients,30 patients with acute COPD and 30 healthy non-COPD volunteers(control group)by flow cytometry.ResultsMCAM number in stable COPD patients was significantly higher than that in control group,MCAM number in patients with acute COPD was significantly higher than that in stable COPD patients and control group respectively(P＜0.05).ConclusionEndothelial damage during acute exacerbation of COPD is mainly pulmonary capillary,even continue to the clinical symptoms disappeared.Higher MCAM level suggest the presence of lung inflammation,indicate COPD patients who are susceptible to exacerbation.

MCAM;Chronic obstructive pulmonary disease;Flow cytometry

R563

B

1674-4721（2014）10（c）-0169-03

2014-09-26本文編輯：李亞聰）

內蒙古自治區包頭市醫藥衛生科技計劃項目（wsjj2013079）