Snail和SRF在人惡性腦膠質瘤中的表達及其與微血管密度的關系

華海俠，董玉寶，王曉華，姚 薇，王 玲，付占昭＊，顧 濤，趙 敏

（秦皇島市第一醫院1.腫瘤內科；3.老年病科；4.急診科；5.病理科，河北秦皇島066000；2.撫寧縣人民醫院腫瘤科，河北秦皇島066300）

Snail和SRF在人惡性腦膠質瘤中的表達及其與微血管密度的關系

華海俠1，董玉寶2，王曉華3，姚 薇1，王 玲4，付占昭1＊，顧 濤1，趙 敏5

（秦皇島市第一醫院1.腫瘤內科；3.老年病科；4.急診科；5.病理科，河北秦皇島066000；2.撫寧縣人民醫院腫瘤科，河北秦皇島066300）

膠質瘤是神經系統常見腫瘤，手術和傳統放化療手段效果不佳［1］。膠質瘤的發生機制尚未完全闡明，但是目前認為腫瘤細胞獲得侵襲和轉移的能力，以及產生放化療耐藥能力是腫瘤復發和生存率低的分子基礎［2］。本研究通過檢測鋅指蛋白轉錄因子Snail和血清反應因子（SRF），觀察二者與微血管密度（MVD）之間的關系，為探討膠質瘤發生機制提供一定的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 臨床標本 收集秦皇島市第一醫院2010年6月至2012年6月間手術切除，經病理確診的腦膠質瘤石蠟標本80例，并按照2007年WHO中樞神經系統腫瘤分類及分級標準復診并進行病理組織學分級，其中Ⅰ級5例，Ⅱ級32例，Ⅲ級25例，Ⅳ級18例。對照組腦組織15例，均來自癌旁正常腦組織。

1.2 方法 所有石蠟切片均常規行HE染色，均由2名病理科醫師分別進行組織學觀察，5μm連續切片，分別行Snail、SRF和CD34免疫組織化學染色，抗體濃度均為1∶100，采用枸鹽酸熱修復，實驗中分別設立陰性對照和陽性對照。

1.3 結果判定 由2名病理科醫師獨立閱片，在400倍視野下觀察10個視野，每視野計數100個細胞，計算陽性細胞百分比，按照以下4級進行計分：0分：陽性細胞數＜10%；1分：10%－25%；2分：26%－50%；3分：51%－75%；4分：＞75%。染色強度評分標準：無色0分；淡黃色1分；棕黃色2分；棕色或棕褐色3分。以兩者乘積作為陽性評判標準，其中4分以上定義為陽性。CD34表達以血管內皮細胞胞漿棕黃色著色，計數標準為：棕黃色的單個、數個內皮細胞可計數為1個血管，計數5個不連續高倍視野內的微血管數，取其平均值作為該病例的微血管密度值。

1.4 統計學處理 用SPSS13.0進行統計，不同組別間比較采用χ2檢驗，MVD兩組間采用t檢驗，相關性分析采用spearman相關系數法，以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Snail、SRF在兩組中的表達 Snail、SRF在膠質瘤中陽性表達率分別為70.00%、45.00%，顯著高于對照組的26.67%、13.33%，兩組間比較差異均具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 CD34染色結果及MVD測定 膠質瘤組織中血管壁CD34免疫組織化學染色呈棕黃色，微血管形態呈芽狀、管狀、條索狀。腦膠質瘤組中MVD值為42.12±12.18，顯著高于對照組的13.14±3.26，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 Snail、SRF、MVD在腦膠質瘤中表達的臨床意義 如表2所示，Snail、SRF、MVD在腦膠質瘤中的差異表達，與性別、年齡、腫瘤大小均無關（P＞0.05）；而與腫瘤級別和1年復發率密切相關，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。

表1 Snail、SRF在對照組及腦膠質瘤組中的表達

表2 Snail、SRF和MVD在腦膠質瘤組織中表達的臨床意義

2.4 Snail、SRF與MVD在腦膠質瘤組織中表達的相關性分析 Snail陽性組MVD值為48.24± 14.73，顯著高于陰性組的38.12±7.45，差異具有統計學意義（t＝3.187，P＝0.002）；SRF陽性組MVD值為47.28±10.34，顯著高于陰性組的36.38± 9.25，差異具有統計學意義（t＝4.972，P＝0.000）。

3 討論

研究表明，腦膠質瘤的復發和放化療耐性與上皮－間質轉化（EMT）關系密切［5］。在腦膠質瘤SHG－44細胞中過表達整連素相關蛋白激酶能夠誘導Snail蛋白表達上調，細胞獲得更強的遷移和侵襲能力。在本研究中發現Snail在膠質瘤組織中高表達，并與腫瘤級別和復發關系密切，提示Snail在膠質瘤中的高表達多提示預后不良。而轉錄因子SRF在EMT中發揮重要調控作用，能夠調控惡性腫瘤的進行性進展，破壞細胞連接，使腫瘤細胞松散獲得遷移可能，并能夠促進腫瘤細胞增殖，上調基質金屬蛋白酶（MMP）－2、－9的表達，使腫瘤細胞更易浸潤和侵襲；SRF的轉錄能夠誘導腫瘤細胞獲得間質細胞表型，促進遷移和侵襲的能力提高，提示SRF在腫瘤的發生、發展進程中起到了較為重要的調控作用，其對膠質瘤細胞的遷移亦具有重要的調控作用［6］。

［1］Chang L，Su J，Jia X，et al.Treating malignant glioma in Chinese patients：update on temozolomide［J］.Onco Targets Ther，2014，7：235.

［2］Miyazono K，Ehata S，Koinuma D.Tumor－promoting functions of transforming growth factor－βin progression of cancer［J］.Ups J Med Sci，2012，117（2）：143.

［3］Chiang C，Ayyanathan K.Snail／Gfi－1（SANG）family zinc finger proteins in transcription regulation，chromatin dynamics，cell signaling，development，and disease［J］.Cytokine Growth Factor Rev，2013，24（2）：123.

［4］Zhao M，Xu H，He X，et al.Expression of serum response factor in gastric carcinoma and its molecular mechanisms involved in the regulation of the invasion and migration of SGC－7901cells［J］.Cancer Biother Radiopharm，2013，28（2）：146.

［5］Xi H，Hong X，Min Z，et al.Serum response factor is overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma and promotes Eca－109cell proliferation and invasion［J］.Oncol Let，2012，5（3）：819.

［6］Ziv－Av A，Taller D，Attia M，et al.RTVP－1expression is regulated by SRF downstream of protein kinase C and contributes to the effect of SRF on glioma cell migration［J］.Cell Signal，2011，23（12）：1936.

2013－07－19）

1007－4287（2014）07－1092－02

＊通訊作者