常規細針穿刺聯合免疫細胞化學在甲狀腺乳頭狀病變診斷中的應用

吳麗華

（南通大學附屬醫院病理科，江蘇南通226001）

常規細針穿刺聯合免疫細胞化學在甲狀腺乳頭狀病變診斷中的應用

吳麗華

（南通大學附屬醫院病理科，江蘇南通226001）

目的 探討術前運用細針穿刺甲狀腺結節行細胞學檢查，結合免疫細胞化學分析，進一步提高對甲狀腺乳頭狀病變術前診斷的準確率。方法 回顧分析本院2008年2月至2009年4月收治的術前細針穿刺甲狀腺乳頭狀病變62例。作常規細胞學涂片及液基薄層細胞學涂片，同時結合免疫細胞化學檢查進行Galectin－3，細胞角蛋白19和HMBE－1等標記的測定和分析，與手術后組織病理結果作比較。結果 對照術后組織病理，32例為癌性乳頭，30例為良性乳頭，細胞學診斷準確率為83.9%（良性乳頭中有6例、惡性乳頭中有4例細胞形態難以確定其病變性質）。Galectin－3、CK19及HMBE等標記在癌性乳頭中的表達率分別為87.5%（28／32）、93.75%（30／32）及87.5%（28／32）；而30例良性乳頭的表達率則分別為30.0%（9／30）、33.3%（10／30）及20.0%（6／30），兩者相比有統計學意義。結論 甲狀腺細針穿刺細胞學涂片結合免疫細胞化學分析，有助于提高診斷的準確率。

細針吸取細胞學；甲狀腺乳頭狀病變；免疫細胞化學

（Chin J Lab Diagn，2014，18：1084）

甲狀腺病變臨床常表現為無痛性甲狀腺結節，且有些病變無須手術治療，內科治療即可達到治療目的，因此，術前準確診斷尤為重要。隨著細針穿刺細胞學檢查（fine needle aspiration cytology，FNAC）技術在臨床的廣泛應用，甲狀腺穿刺已經成為甲狀腺結節性疾病術前診斷的重要檢查方法。甲狀腺細胞學涂片中常出現乳頭狀結構，而這種形態學結構在良惡性甲狀腺疾病中均可存在，如僅依靠HE染色，常常難以明確診斷。近年來一些免疫標記物應用于甲狀腺良惡性疾病的鑒別診斷中。本研究通過術前FNAC結合免疫細胞化學技術，并與術后組織病理診斷比較，探討FNAC結合免疫細胞化學技術在甲狀腺乳頭狀病變診斷中的價值，以提高甲狀腺結節狀病變術前診斷的正確率。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集本院2008年2月－2009年4月間因甲狀腺結節病變而行術前FNAC檢查，且有術后組織病理學診斷的甲狀腺乳頭狀病變62例。其中男性15例，女性47例，年齡23－74歲，平均年齡（48.78±13.64）歲。

1.2 FNAC方法 患者呈坐位頭仰伸，充分暴露其頸部，常規皮膚消毒。術者右手持帶有7號針頭的5ml注射器，在略帶負壓下反復穿刺結節。將針芯內的抽吸物推于清潔玻璃片上，立即涂片3張，其中1張行細胞學診斷，另2張行免疫細胞化學檢查。

1.3 常規細胞學染色 將涂片立即置于95%乙醇和乙醚混合固定液中，固定5－10min，水洗1min，蘇木素染色7min，水洗1min，鹽酸乙醇分化，水洗藍化1min，伊紅染色10s，梯度脫水，封片，鏡檢。

1.4 免疫細胞化學染色 免疫細胞化學染色采用EnVision法，涂片脫水后，3%H2O2阻斷其內源性過氧化物酶，PBS洗滌3次，分別加入鼠抗人Galectin－7、CK19、HBME等一抗，經37℃恒溫、5h孵育后PBS洗滌，加入EnVision（鼠），37℃孵育20min，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封固。

1.5 免疫組化結果判斷標準 Galectin－3陽性定位于細胞漿和核、CK19的陽性定位于細胞漿、HBME－1主要為細胞膜著色。凡出現明顯的棕色或棕黃色顆粒為陽性細胞。按陽性細胞所占比例分為：陽性細胞≤10%為陰性（－），陽性細胞占10%－25%為弱陽性（＋），陽性細胞占25%－50%為陽性（＋＋），陽性細胞＞50%為強陽性（＋＋＋）。

1.6 統計學分析 采用SPSS16.0統計學軟件進行統計分析。組間比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 細胞學診斷結果 62例甲狀腺乳頭狀病變，細胞學診斷與手術切除標本病理診斷一致者52例，細胞學診斷正確率為83.9%。10例與術后病理診斷不一致，其中惡性4例、良性6例。細胞學上，癌性乳頭細胞呈擁擠重疊，細胞核明顯增大，核染色質空，核形不規則，常有核溝，核內假包涵體（見圖1）。而良性乳頭細胞排列有一定的方向性，核偏小圓而規則，核染色質細膩。

圖1 乳頭狀癌涂片細胞核大毛玻璃樣變并可見核溝。HE×200

2.2 免疫細胞化學結果 Galectin－3、CK19及HMBE－1等標記在癌性乳頭中的表達率分別為87.5%（28／32）、93.75%（30／32）及87.5%（28／32），陽性細胞呈中強度表達（見圖2、3、4）；而30例良性乳頭的表達率則分別為30.0%（9／30）、33.3%（10／30）及20%（6／30），陽性細胞呈局灶或弱表達。上述兩組表達率的差異有顯著的統計學意義（P＜0.01，表1）。

圖2 乳頭狀癌，CK19呈胞漿胞膜陽性表達（ENVISION法×200）

圖3 乳頭狀癌，Glectin－3呈胞漿胞核陽性表達（ENVISION法×200）

圖4 乳頭狀癌，HMBE呈胞膜陽性表達（ENVISION法×200）

表1 62例甲狀腺乳頭狀病變免疫組化結果分析

3 討論

甲狀腺病變中僅惡性及部分良性疾病需行手術治療，因此，術前診斷對決定是否需要手術治療十分重要。由于甲狀腺解剖結構復雜，血運豐富，如術前行常規活檢則并發癥多。而超聲、影像學等檢查則常常難以定性。FNAC因操作簡單、快速，對人體損傷少和并發癥少等特點，日益成為甲狀腺術前診斷的一種安全、經濟而有效的手段，深受醫生和患者的歡迎，能使甲狀腺病變的手術率降低58%［1］。

甲狀腺FNAC涂片中常出現乳頭狀結構。它們既可是良性乳頭狀增生，也可為惡性乳頭狀癌。盡管大多數乳頭狀病變通過細胞學形態可明確診斷，但少數乳頭狀病變需要借助免疫標記而確定良惡性。

近年來隨著分子和蛋白水平對腫瘤研究的進展，與甲狀腺癌發生、發展、轉歸有關的腫瘤標志物出現較多，而理想的腫瘤標志物應該具有特異性高、敏感性強、可信度高及穩定性強的特點。國內外相繼應用了一些標志物如HBME－1，部分高分子量CK、Galectin－3等來作為相應的輔助診斷，這些標志物在敏感性或特異性上各有優缺點。本實驗選取CK19，Galectin－3及HBME－1作為標記物聯合檢測可明顯提高診斷的準確率。

Galectin－3是凝集素蛋白家族的成員之一，它在多種腫瘤中均有表達，尤其是在分化型甲狀腺癌細胞中有較高的陽性率，因而在甲狀腺腫瘤中倍受關注［2］。Weinberger［3］等則證實Galectin－3在乳頭狀癌中高度表達，在其他正常或良惡性病變的甲狀腺組織類型中較少表達。Galectin－3廣泛應用于甲狀腺癌免疫組織化學研究中，是一種特異度高和敏感性較好的甲狀腺癌的腫瘤標記物。HBME－1為單克隆抗體，是間皮細胞微絨毛表面特異性標記物，在腫瘤血管的形成、腫瘤的生長以及腫瘤的轉移中發揮重要作用［4］。多項研究顯示HBME－1在甲狀腺癌中呈高表達，而結節性甲狀腺腫和乳頭狀良性增生病變中為陰性或部分表達，發現HBME－1的特異性和敏感性均較高，HBME－1與其他分子如CK19等的聯合檢測可提高診斷的準確性［5］。

綜上所述，甲狀腺細針細胞學檢查是目前公認的經濟而準確性高的術前檢查方法，但由于細胞學檢查缺乏組織的結構變化及相鄰周圍組織，包括血管及包膜的病變情況，故對于某些甲狀腺腫塊易于漏診。為能提高診斷的準確性，本研究應用常規細胞涂片檢查結合免疫細胞化學CK19、Galectin－3、HBME－1作為標記物的檢查手段來提高術前診斷的準確性，雖然仍存在一定的假陽性及假陰性，但可明顯提高診斷的準確率。但在一部分良性病變中仍有一些病例還不能進一步確診，有待進一步深入研究。

總之，FNAC檢查結合免疫細胞化學檢測可提高術前診斷準確率，值得在臨床推廣應用。

［1］Castro MR，Gharib H，Tofflus SM.Treatment of continuing controversies in the management gene of thyroid nodules［J］.Ann Intern Med，2005，142（11）：996.

［2］Das DK，Al－Waheeb SK，George SS，et al.Contribution of immunocytochemical stainings for galectin－3，CD44，and HBME1to fine－needle aspiration cytology diagnosis of papillary thyroid carcinoma［J］.Diagn Cytopathol，2013，10：1002.

［3］Weinberger PM，Houger RT，Adam BL，et al.Association of nuclear，cytoplasmicexpression of galectin－7with beta－catenin／Wntpathway activation in thyroid carcinoma［J］.Arch Otolaryngol Head NeckSurg，2007，133（5）：503.

［4］Lenggenhager D，Maggio EM，Moch H，et al.HBME－1expression in hyalinizing trabecular tumours of the thyroid gland［J］.Histopathology，2013，62（7）：1092.

［5］Isic Dencic T，Cvejic D，Paunovic I，et al.Cytokeratin19expression discriminates papillary thyroid carcinoma from other thyroid lesions and predicts its aggressive behavior［J］.Med Oncol，2013，30（1）：362.

The application of fine－needle aspiration cytology combined with immunocytochemistry in cytohistologic diagnosing of thyroid pa－pillary lesions

WU Li－hua.

（Department of Pathology，Affliated Hospital of Nantong University226001，China）

Objective To explore the application of preoperative fine－needle aspiration cytology（FNAC）diagnosing thyroid nodules，combined with immunocytochemistry to further improve the accuracy of preoperative diagnosis of thyroid papillary lesions.Methods Retrospective analysis of 62cases of thyroid papillary lesions which were treated with preoperative FNAC in our hospital from February，2008to April，2009.All cases were examined with conventional cytologic smears and ThinPrep cytologic Test（TCT），and the expression of Galectin－3，Cytokeratin19and HMBE－1of lesion cells in smears was determined by immunocytochemistry.Preoperative FNAC diagnosis was compared with postoperative histopathological diagnosis.Results Of 62cases，52cases were diagnosed unequivocally by Preoperative FNAC（diagnostic accuracy rate was 83.9%）.The expression rates of Galectin－3，CK19，and HMBE－1in the cells of papillary carcinoma were 75%（24／32），87.5%（28／32）and 81.3%（26／32），respectively，and in the cells of benign papillae were 26.7%（8／30），26.7%（8／30），10%（3／30），respectively.Difference between above two groups was statistically significant.Conclusion Combined FNAC with immunocytochemistry in the Preoperative diagnosis of thyroid nodules，would help to improve diagnostic accuracy.

fine needle aspiration cytology；thyroid papillary lesions；immunocytochemistry

R446.8

A

吳麗華，女，學士，副主任技師。

2013－08－15）

1007－4287（2014）07－1084－03