復方祛白噴霧劑的皮膚毒性和安全性研究

(山東省濟寧市皮膚病防治院，山東 兗州 272100)

復方祛白噴霧劑主要由補骨脂等精制而成，有增加皮膚黑色素及光敏的作用，皮膚用藥適用于白癜風、銀屑病等。依照國家食品藥品監(jiān)督管理總局頒布的《化學藥物急性毒性試驗技術(shù)指導原則》《化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導原則》，筆者對復方祛白噴霧劑進行了急性皮膚毒性和安全性研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與試藥

白色中國家兔，雌雄各半，體重(2.0±0.5)kg；白色 DHP豚鼠，雌雄各半，體重250～300 g。以上動物均由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實驗動物中心提供，清潔級動物，用普通飼料喂養(yǎng)，動物房溫度19～23℃、濕度40% ～60%，合格證號為SCXK(魯)20080002。復方祛白噴霧劑受試物由濟寧市皮膚病防治院提供(魯藥制ZBZ0955)；空白對照用生理鹽水；陽性對照用2，4-二硝基氯代苯(DNCB)，由上海科豐化學試劑有限公司生產(chǎn)；硫化鈉由深州嘉信化工有限責任公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 急性皮膚毒性試驗

試驗方法[1-2]:取白色中國家兔24只，雌雄各半，隨機分為4組，各6只，即復方祛白噴霧劑高、中、低劑量組(A1，A2，A3組分別為臨床用藥濃度的6倍、3倍、1倍)及空白對照組(B組，用生理鹽水)。將中國家兔背部右側(cè)脫毛約50 cm2，避免損傷皮膚，用75%乙醇消毒，于脫毛區(qū)涂搽受試物或生理鹽水，24 h后用溫水除去殘留受試物。逐日詳細觀察并記錄動物的體重、皮毛、飲食、呼吸、二便、眼睛、黏膜、行為改變、自主活動改變情況，每日1次，觀察14 d。如受試物對完整皮膚未觀察到毒性反應(yīng)，則在中國家兔背部左側(cè)脫毛約50 cm2，24 h后先用75%乙醇消毒皮膚，再用預(yù)消毒的400#細砂紙在脫毛處磨成輕度擦傷，以滲血為度；立即在擦傷部位涂搽受試物，試驗方法及觀察指標同上。如出現(xiàn)死亡動物或瀕死動物應(yīng)行尸解，當肉眼可見病變時，應(yīng)行病理學檢查。

試驗結(jié)果:A1組、A2組、A3組的完整皮膚和破損皮膚亞組用藥后，觀察期內(nèi)體重、皮毛、飲食、呼吸、二便、眼睛、黏膜、行為改變、自主活動情況均無明顯改變，未觀察到急性毒性反應(yīng)，無死亡動物或瀕死動物。破損皮膚亞組均在給藥后第2天出現(xiàn)點狀血痂，第7天內(nèi)脫痂痊愈。在觀察期內(nèi)，中國家兔體重變化見表1，復方祛白噴霧劑各劑量組與B組比較，均無顯著性差異。

表1 復方祛白噴霧劑對中國家兔體重的影響（n=6，±s，kg）

表1 復方祛白噴霧劑對中國家兔體重的影響（n=6，±s，kg）

給藥后組別 給藥前A1組A2組A3組B組2.13±0.17 2.13±0.16 2.14±0.17 2.14±0.18完整皮膚動物2.28±0.20 2.28±0.19 2.29±0.20 2.28±0.20損傷皮膚動物2.42±0.22 2.42±0.21 2.43±0.22 2.44±0.23

2.2 皮膚過敏試驗

試驗方法[3]:取白色豚鼠20只，雌雄各半，隨機分為兩組，各10只，復方祛白噴霧劑組(C組)、陽性對照組(D組，陽性對照物為DNCB，致敏溶液濃度為1%，激發(fā)溶液濃度為0.1%，臨用前用分析純丙酮配制成溶液)。致敏接觸:將豚鼠背部脊柱兩側(cè)脫毛，每側(cè)脫毛區(qū)面積約為10 cm2。脫毛24h后，先在豚鼠背部左側(cè)脫毛區(qū)涂搽0.2mL復方祛白噴霧劑，D組涂搽1%DNCB0.2mL，接觸6 h后除去受試物，初次試驗后第7天和第14天分別以同樣的方法重復1次，共3次。激發(fā)接觸，末次給受試物致敏接觸后14d(總第28天)在豚鼠背部右側(cè)脫毛區(qū)涂搽0.2mL復方祛白噴霧劑，D組涂搽0.1%DNCB0.2mL，接觸6 h后除去并用溫水洗凈受試物。分別于0，24，48，72h時觀察局部皮膚的過敏反應(yīng)，同時觀察豚鼠是否出現(xiàn)站立不穩(wěn)、休克等全身過敏反應(yīng)，計算過敏發(fā)生率。過敏發(fā)生率=[過敏反應(yīng)動物數(shù)/動物總數(shù)]×100%。

試驗結(jié)果:C組自激發(fā)接觸后，0～72 h激發(fā)接觸部位均未出現(xiàn)紅斑及水腫，過敏率為0。D組自激發(fā)接觸后，觀察結(jié)果:0 h 2只出現(xiàn)明顯紅斑，評分為2×2分，其中1只又伴輕度水腫，評分為1×1分，6只出現(xiàn)嚴重紅斑，評分為3×6分，其中1只又伴重度水腫，評分為3×1分，其中3只又伴輕度水腫，評分為1×3分，總評分為29分；24 h后開始消退總評分為21分；48 h后總評分為12分；72 h后總評分為9分。詳見表2，可見，復方祛白噴霧劑對豚鼠皮膚無致敏作用。

表2 對豚鼠的皮膚過敏試驗結(jié)果(n=10)

2.3 皮膚刺激性試驗

分組方法[4]:取白色中國家兔24只，雌雄各半，隨機分為4組，各6只，分組方法及給藥方法同2.1項。

完整皮膚刺激性試驗:每個劑量組各取3只家兔，將其脊柱兩側(cè)對稱脫毛2塊，每塊脫毛面積約50 cm2，避免損傷皮膚，用75%乙醇消毒。試驗采用左右側(cè)自身對照，脫毛24h后左側(cè)脫毛區(qū)涂搽受試物，右側(cè)脫毛區(qū)涂搽生理鹽水，涂藥6h后用溫水除去殘留受試物，每天1次，連續(xù)涂藥觀察3次。分別于末次去掉受試物后24，48，72h觀察局部紅斑和腫脹等反應(yīng)情況。

破損皮膚刺激性試驗:各劑量組均取3只家兔，將其脊柱兩側(cè)對稱脫毛2塊，每塊脫毛面積約50 cm2，24 h后先用75%乙醇消毒皮膚，再用預(yù)消毒的400#細砂紙在脫毛處磨成輕度擦傷，以滲血為度；立即在擦傷部位涂搽受試物。其他試驗方法及觀察指標同完整皮膚試驗。計算刺激性指數(shù)，刺激性指數(shù)平均值=(刺激反應(yīng)分值/動物總數(shù))，評價皮膚刺激性強度。

試驗結(jié)果:完整皮膚試驗，未觀察到刺激性，評分均為0分，刺激指數(shù)為0。破損皮膚試驗，有輕度刺激性，但該刺激性在給藥48 h內(nèi)可自行逐漸消失，刺激強度小于0.5，為無刺激性；破損皮膚試驗動物皮膚有點狀血痂，至48 h開始脫落，給藥區(qū)與空白對照區(qū)無明顯差異，家兔皮膚光澤度、彈性與完整皮膚試驗亦無顯著差異，結(jié)果見表3。

表3 復方祛白噴霧劑對中國家兔損傷皮膚的刺激性試驗結(jié)果(n=6，分)

3 討論

復方祛白噴霧劑外用于中國家兔完整皮膚和破損皮膚，均未觀察到明顯急性毒性；復方祛白噴霧劑對豚鼠皮膚無致敏作用，對中國家兔完整皮膚未觀察到刺激性，對中國家兔破損皮膚有輕度刺激性，但該刺激性在給藥48 h內(nèi)可自行消失，該試驗給藥劑量是臨床用藥濃度的6倍，故可認為不影響藥物治療的連續(xù)性。結(jié)果表明，復方祛白噴霧劑經(jīng)皮膚用藥無明顯毒性，安全性良好。

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