高效液相色譜法測(cè)定香菊顆粒中黃芪甲苷含量

馬雯霞，衷紅梅

(1．西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，陜西 西安 710038；2．陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710065）

香菊顆粒具有辛散祛風(fēng)、清熱通竅的功效，臨床用于治療急慢性鼻竇炎、鼻炎等疾病，其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局·國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第38冊(cè)。標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定樣品有效成分黃芪甲苷含量方法為薄層掃描法，由于受點(diǎn)樣、展開、顯色、掃描等多種因素的影響，該法測(cè)定結(jié)果差異較大。筆者參考文獻(xiàn)[1－5]，采用高效液相色譜法對(duì)香菊顆粒中黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters－Alliance 2695－2487型(YY01520041103)高效液相色譜儀；Alltech ELSD 2000型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。香菊顆粒及其陰性樣品（陜西雪龍海姆普德藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為100302，100303，100306）；黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為 110781－200613，供含量測(cè)定用）；水為超純水，乙腈為色譜純，正丁醇、氨水均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm），柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：乙腈 － 水 (32∶68)；流速：1．0 mL ／min；氣流速:2．8 mL ／min；漂移管溫度：105℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

2．2 溶液制備

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取樣品（批號(hào)為100302）約10 g研細(xì)，精密稱定，加甲醇50 mL，加熱回流1 h，濾過，用甲醇15 mL分3次洗滌濾渣及容器，合并濾液和洗滌液，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20 mL，棄去氯仿液，水液用水飽和的正丁醇提取4次，每次15 mL，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗滌3次，每次15 mL，棄去堿液，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15 mL，棄去水液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取陰性樣品10 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：按擬訂色譜條件，取2．2項(xiàng)下3種溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相同保留時(shí)間處有一致的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液色譜則無此吸收峰，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取質(zhì)量濃度為436 μg／mL的黃芪甲苷對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣 1，2，5，10，15，20，25，30 μL，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積，以峰面積的對(duì)數(shù)值與進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值進(jìn)行回歸，得回歸方程 Y＝1．379 X ＋5．961，r＝0．999（n＝8）。表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在 0．436～13．080 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果平均峰面積為16 147 022，RSD為0．32% （n＝6），表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，于制備后20 h內(nèi)進(jìn)樣6次，記錄峰面積積分值。結(jié)果平均峰面積為2 068 456，RSD為1．06%（n＝6），表明供試品溶液在20 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品(批號(hào)為100302）平行制備6份供試品溶液，按擬訂方法測(cè)定黃芪甲苷的含量，結(jié)果平均含量為0．193 1 mg／g，RSD 為 1．90%（n ＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的香菊顆粒（批號(hào)為100302，每1 g含黃芪甲苷0．193 1 mg）樣品適量，研細(xì)，取約10 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液2 mL(質(zhì)量濃度為0．586 4 μg ／mL)，加入樣品，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，依法進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批香菊顆粒樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果批號(hào)為100302，100303，100306的樣品每袋含黃芪甲苷 0．58，0．66，0．79 mg。

3 討論

考察供試品溶液的制備方法時(shí)，對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中的方法進(jìn)行了驗(yàn)證，將原標(biāo)準(zhǔn)中最終定容至2 mL改為定容至10 mL，更便于操作，使結(jié)果更準(zhǔn)確。

改用高效液相色譜法測(cè)定香菊顆粒中黃芪甲苷含量，結(jié)果含量均比原標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的每袋不少于0．05 mg高出數(shù)倍，建議將含量測(cè)定限度標(biāo)準(zhǔn)改為“每袋含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)，不得少于 0．15 mg” 。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:212．

[2]黃麗丹．阿膠養(yǎng)血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．安徽醫(yī)藥，2006，10(11)：812－813．

[3]王舉濤，徐文方，劉金旗，等．HPLC－ELSD法測(cè)定黃芪中黃芪甲苷的含量[J]．安徽醫(yī)藥，2006，10(1)：28－29．

[3]田景奎，吳麗敏，劉建建，等．HPLC－ELSD測(cè)定芪休顆粒中黃芪甲苷的含量[J]．中成藥，2004，26（10）：812 －814

[4]楊慶勝，李彩榮，趙雪暉．HPLC－ELSD測(cè)定補(bǔ)益蒺藜片中黃芪甲苷的含量[J]．甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，22（1）:42 －44

[5]徐小利，陳小虎，謝 靜．HPLC－ELSD法測(cè)定補(bǔ)中益氣丸（濃縮丸）中黃芪甲苷的含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2008，17(19)：36－37．