復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠心肌微血管內皮的影響

王慶凱 ，王慶利 ，閆翠環(huán)，方 敬

(1．河北省滄州中西醫(yī)結合醫(yī)院，河北 滄州 061001； 2．河北省海興縣醫(yī)院，河北 滄州 061200；3．河北中醫(yī)學院，河北 石家莊 050200)

糖尿病心肌病(DCM)由Rullbler等[1]于1972年最早提出，是糖尿病患者最嚴重的并發(fā)癥之一。糖尿病心肌病指在糖尿病狀態(tài)下，排除了高血壓、冠心病及其他可以引起心臟異常的因素，基于氧化應激和炎性反應[2－3]而引起的一系列結構異常及心肌代謝紊亂，并最終導致左心室肥大、舒張和(或)收縮功能減退，臨床病死率高，現(xiàn)受到眾多學者的關注。眾多研究表明，心肌微血管病變是糖尿病心肌病主要發(fā)病機制之一，微循環(huán)障礙、微血管瘤形成和微血管基底膜增厚，是糖尿病心肌微血管病變的典型改變。我院經(jīng)驗方復榮通脈膠囊（批號為冀藥制字Z20070041，組方為水蛭、地龍、全蝎、黃芪、當歸、玄參、葛根、首烏藤、川牛膝、穿山龍、甘草）有養(yǎng)陰益氣、活血通絡之功效，臨床療效明顯。本試驗旨在探討該藥對心血管內皮細胞的作用機制，為臨床進一步應用提供試驗依據(jù)。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1．1 動物與試藥

80只健康雄性Wistar大鼠，體重180～230 g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號為冀醫(yī)動管字第1009065。復榮通脈膠囊（批號為冀藥制字 Z20070041）；STZ、檸檬酸鈉、檸檬酸均由美國Sigma公司提供；冰乙酸（≥99．5%，國藥集團化學試劑有限公司)；ELX800型全自動酶標儀(美國 BIO－TEK公司）；sEPCR及sTM試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)；其余試劑均為國產分析純。

1．2 方法

1．2．1 造模

健康雄性大鼠80只，適應性飼養(yǎng)1周后隨機抽樣，用數(shù)字表法選12只作為正常組，其余68只為造模組，造模前禁食12 h，一次性腹腔注射1%鏈脲佐菌素（STZ）60 mg／kg（STZ臨用前配制，溶于 0．1 mol／L，pH ＝ 4．2，無菌檸檬酸緩沖液）。正常組注入等量檸檬酸緩沖液。72 h后尾靜脈取血測血糖，血糖值不低于16．7 mmol／L，確定為糖尿病大鼠，穩(wěn)定1周后列入觀察對象 (造模過程中死亡7只，血糖值未達標者13只，造模不成功者剔出)。

1．2．2 分組與給藥方法

造模成功的48只大鼠，按完全隨機原則分為糖尿病模型組（DM），復榮通脈膠囊低（FRL）、中（FRM）、高（FRH）劑量治療組，每組12只；正常組12只，共5組。成模大鼠穩(wěn)定1周后給藥。中藥治療組劑量按人體－大鼠體表面積比值表換算出大鼠的等效劑量，低劑量組給藥 0．7 g ／(kg·d)，中劑量組給藥 1．4 g ／(kg·d)，高劑量組給藥2．2 g／(kg·d)灌胃[4]。正常組及模型組灌服蒸餾水。大鼠灌胃容量 10 mL／kg，1日 1次，連續(xù)8周。試驗期間大鼠自由飲水，喂標準飼料，環(huán)境溫度為（24±2）℃。試驗期間未使用胰島素和其他降糖藥物。

1．2．3 取材方法

所有大鼠于灌胃8周后，尾靜脈取血測血糖，以3%戊巴比妥鈉80 mg／kg腹腔注射麻醉，麻醉后大鼠稱體重，后仰臥位固定，剪開腹正中皮膚，暴露腹主動脈，腹主動脈采血，2 mL加入枸櫞酸鈉抗凝管中，3 500 r／min離心，取血清用于可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)、可溶性血栓調節(jié)蛋白(sTM)測定。

1．2．4 觀察指標及方法

分別于治療前、后測體重，取尾尖血測血糖。于治療后8周腹主動脈采血分離血清，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)定量測定sEPCR和sTM質量濃度，在ELX800型全自動酶標儀上讀取 OD值，經(jīng)標準曲線計算質量濃度(ng／mL)。

1．3 統(tǒng)計學處理

2 結果

2．1 一般情況

正常組大鼠精神狀態(tài)較好，毛色白有光澤，進食量、飲水量及尿量均正常，體重增加，動作自如。造模各組大鼠精神狀態(tài)較差，毛色萎黃無光澤，倦怠，嗜臥，活動量少，進食量、飲水量及尿量均明顯增多，體重減輕。

2．2 血糖、體重變化

結果見表1和表2。

表1 各組大鼠治療前后血糖變化比較（,mmol／L）

表1 各組大鼠治療前后血糖變化比較（,mmol／L）

注：與正常組比較，△ P＜0．01。

組別正常組（n＝9）DM 組（n＝9）FRL組（n＝8）FRM 組（n＝8）FRH 組（n＝9）治療前4．88 ± 0．27 23．13 ± 3．95 23．85 ± 3．50 24．74 ± 3．13 24．43 ± 3．71△△△△治療后4．88 ± 0．62 24．51 ± 2．90 25．13 ± 2．21 23．69 ± 3．23 24．78 ± 2．13△△△△

2．3 血清sEPCR及sTM水平變化

結果見表3。

3 討論

糖尿病心肌病是糖尿病個體基于氧化應激和炎性反應而引起的心肌代謝紊亂，最終會導致心肌舒張和收縮功能減退，甚至誘發(fā)心力衰竭和猝死。本病的發(fā)生受多種因素的影響，微血管病變、血管內皮細胞受損和氧化應激反應等直接關系到疾病的輕重程度和進展。在傳統(tǒng)醫(yī)學中，本病被歸于“胸痹”“心悸”“怔忡”等范疇。氣機郁滯、血行痹阻是本病發(fā)生的主要病因病機，伴隨疾病的進程，終將形成氣血虧虛和血液瘀滯并存的虛實夾雜證候，益氣養(yǎng)陰、活血化瘀治療成為中醫(yī)遣方用藥的基本原則。

表2 各組大鼠治療前后體重的變化（,g）

表2 各組大鼠治療前后體重的變化（,g）

注：與正常組比較，△ P＜0．01；與本組治療前比較， ■ P＜0．01。

組別正常組（n＝9）DM 組（n＝9）FRL組（n＝8）FRM 組（n＝8）FRH 組（n＝9）治療后228．4 ± 8．59 196．0 ± 17．9 193．6 ± 11．8 196．3 ± 14．1 195．3 ± 15．7治療前196．5 ± 14．9 205．7 ± 17．1 199．7 ± 11．9 199．7 ± 14．6 200．6 ± 13．9△△△△△■■■■

表3 各組大鼠治療后血清sEPCR及sTM水平變化（,ng／mL）

表3 各組大鼠治療后血清sEPCR及sTM水平變化（,ng／mL）

注：與正常組比較， ◆ P＜0．01；與 DM組及 FRL組比較， △ P＜0．01；與 DM組及 FRL組比較，○ P＜0．01。

組別正常組（n＝9）DM 組（n＝9）FRL組（n＝8）FRM 組（n＝8）FRH 組（n＝9）sEPCR 128．1 ± 16．9 324．8 ± 30．4 296．4 ± 33．1 232．9 ± 27．9 209．5 ± 24．9◆◆◆◆△△○ ○sTM 20．9 ± 3．3 80．4 ± 9．1 81．8 ± 9．1 53．0 ± 6．9 52．3 ± 7．3◆◆◆◆△△○ ○

現(xiàn)代醫(yī)學認為，血管病變是糖尿病致殘致死的主要原因，誘生的血管內皮損傷是糖尿病血管并發(fā)癥的始動因素和病理生理基礎[5]。在生理狀態(tài)下，血管內皮細胞主動調節(jié)微循環(huán)血流、凝血過程和炎性反應。糖尿病出現(xiàn)的高血糖、胰島素抵抗及脂代謝紊亂均可導致血管內皮功能紊亂，使血管內皮細胞受損，通過動物試驗表明[6]，血糖高的大鼠心肌微血管數(shù)目會減少，且伴隨年齡的增加，心肌微血管數(shù)目會顯著減少，受到的損害也越發(fā)明顯。血栓調節(jié)蛋白（TM）是存在于血管內皮細胞膜表面的一種糖蛋白，與凝血酶結合啟動蛋白C抗凝系統(tǒng)[7]。內皮細胞受損，TM釋放入血，血漿中sTM水平增高，造成凝血，形成血栓。近年來，sTM已成為血管內皮損傷和破壞的新標志，血漿中存在的sEPCR是近年來發(fā)現(xiàn)的位于血管內皮細胞的新型蛋白受體，其濃度變化是血管內皮損傷的特異性標志[8]。

復榮通脈膠囊由水蛭、地龍、全蝎、黃芪、當歸、玄參、葛根、首烏藤、川牛膝、穿山龍、甘草組方。方中水蛭破血通經(jīng)、逐瘀消 ；地龍通利經(jīng)絡而除痹舒筋止痛；全蝎攻毒散結，通絡止痛；又加穿山龍、牛膝，諸藥協(xié)同，共奏活血通經(jīng)、散結止痛之功。黃芪具有固表止汗，利水消腫，生肌等功效；當歸為血家之圣藥，功擅補血活血；葛根生津止渴，又加玄參、首烏藤，共同益氣養(yǎng)血，填精扶正之效；最后以甘草調和藥性。全方標本同治，補瀉兼顧，消瘀而不傷正，扶正而不留邪。

現(xiàn)代研究結果顯示，水蛭具有抗凝、抗血栓形成、抗腫瘤、調血脂、抗增殖及抗炎作用。活體水蛭唾液中含有水蛭素，還有肝素、抗血栓素等物質。地龍?zhí)崛∥锞哂欣w溶和抗凝作用，此外還具有鎮(zhèn)靜、降壓、增強免疫的功效。此類活血化瘀的中藥大多可增加血液流動性，改善微循環(huán)及細胞環(huán)境，抑制炎性反應[9]。氧自由基增多可造成心肌細胞的損害，加速心肌肥厚的進程[10]。黃芪化學成分包括苷類、多糖、氨基酸、微量元素等[11－12]，其中黃芪多糖明顯抑制損傷造成的心肌凋亡，能增強機體清除氧自由基的能力，減少細胞膜脂質過氧化物損傷，對心肌缺血、缺血再灌損傷及感染病毒心肌均具有明顯的保護作用。當歸有抗炎、清除氧自由基、保肝利膽、保護腎臟、增強免疫功能等作用[13]。研究證實，在糖尿病大鼠中，葛根素能顯著降低總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白含量，提高局部微血流量，抑制血小板聚集，且可能通過抑制炎癥因子TGF－β1的表達，降低ROS的產生，達到緩解糖尿病心肌病的作用[14]。

本研究結果顯示，以活血化瘀、理氣通絡、益氣養(yǎng)陰為法組成的復榮通脈經(jīng)驗方可顯著降低血sEPCR及sTM。可見，復榮通脈膠囊可能是通過減輕心肌微血管內皮細胞損傷這一機制，發(fā)揮了對糖尿病心肌病的良好治療作用。其組方精良，用藥方便、安全，值得臨床推廣。但是否改善了DCM其他發(fā)病機制如心肌纖維化、心肌細胞結構和功能的損害等，有待進一步研究證實。

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