VEGF在口腔鱗癌組織中表達及其與淋巴結轉移相關性的系統評價

董紅，張小燕，龍明生

(湖北醫藥學院附屬十堰東風口腔醫院口腔內科，湖北 十堰 442000)

·循證醫學·

VEGF在口腔鱗癌組織中表達及其與淋巴結轉移相關性的系統評價

董紅，張小燕，龍明生

(湖北醫藥學院附屬十堰東風口腔醫院口腔內科，湖北 十堰 442000)

目的系統評價VEGF蛋白在口腔鱗癌組織中的表達及其與淋巴結轉移的關系。方法計算機檢索Cochrane Library、PubMed、Embase、CNKI、CBM等數據庫，按照納入與排除標準選擇研究文獻，并對文獻進行異質性檢驗，以病例組及對照組比值比(OR值)為效應評價指標，然后應用Meta分析RevMan5.0.1軟件對各研究原始數據進行系統評價。結果共有25篇病例對照文獻納入研究，其中病例組1 385例，合并對照組908例，Meta分析結果顯示VEGF在OSCC及合并對照組中的陽性表達差異有統計學意義(OR=10.73，95%CI：7.26～15.86，P＜0.00001)；同時，VEGF在OSCC淋巴結轉移組中的陽性表達也明顯高于非轉移組(OR=3.98，95%CI：2.09～7.59)，差異具有統計學意義(P＜0.0001)。結論根據目前研究推測，VEGF在人類口腔鱗癌的發生、發展及淋巴結轉移中起到了重要作用，可作為口腔鱗癌診斷和治療的一個很有價值的臨床生物指標蛋白。

口腔鱗癌；血管內皮生長因子；淋巴結轉移；Meta分析

口腔鱗狀細胞癌(Oral squamous cell carcinoma，OSCC)在口腔頜面部惡性腫瘤中約占80%以上，其發病率位于口腔頜面部腫瘤的首位，近年來仍有上升趨勢，目前對其發病機制及其影響因素仍不十分了解，探討其發病機制和判斷預后具有重要的臨床意義。血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前所知最強的一種促血管生長因子，對血管內皮細胞增殖、遷移和血管構建具有調控作用，在腫瘤組織中的高表達備受關注。目前，有關VEGF與口腔鱗癌關系的探討[1]已有所開展，但其在口腔鱗狀細胞癌中的表達及其與淋巴結轉移之間的關系，國內外研究結果并不一致。本研究擬在全面收集已公開發表的相關文獻基礎上，采用Meta分析的方法，對VEGF在OSCC組織中表達及與淋巴結轉移關系的研究結果進行系統評價，以期為口腔鱗癌的診斷、預后和治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 文獻來源

1.1.1 檢索策略通過Cochrane Library、Embase、PubMed、CNKI、CBM等數據庫檢索建庫至2013年12月31日之間正式發表的文獻，收集國內外發表的關于VEGF在口腔鱗癌組織中表達及與淋巴結轉移相關性的獨立病例對照研究，并文獻追溯及手工檢索相關雜志、會議論文集、學位論文匯編等。檢索詞：英文數據庫：“OSCC OR oral squamous cell carcinoma”AND“VEGF OR vascular endothelial growth factor”。中文數據庫：口腔鱗狀細胞癌，VEGF或血管內皮生長因子。語種限制為英文或中文。

1.1.2 納入標準①公開發表的文獻；②病例組為經病理確診的口腔鱗癌組織標本，對照組為非瘤的口腔黏膜組織標本(包括正常口腔黏膜或口腔扁平苔蘚或白斑的癌前病變組織)；③檢測方法為免疫組化法；④提供病例組和對照組的例數、陽性率等具體數據。

1.1.3 剔除標準①無對照組；②檢測方法為非免疫組化法；③無法提取數據的文獻；④重復報告或資料雷同、質量較差等無法利用的文獻。

1.2 文獻收集和數據提取所有入選文獻及數據均由第一、第二作者獨立分析和提取。通過獨立閱讀文題、摘要，排除明顯不符合納入標準的文獻后，對可能符合納入標準的文獻進一步閱讀全文，以確定是否真正符合納入標準，并交叉核對；若遇有異議，由兩人商討核對后決定。

1.3 質量評價標準參考Lichtenstein等[2]的病例對照研究評價指南，對各獨立研究從以下幾個方面進行質量評估，以考察各個研究是否存在偏倚及其影響程度：(1)試驗設計是否科學；(2)研究對象納入標準及其基本構成特征是否明確；(3)處理因素及其方法是否準確；(4)統計方法是否恰當；(5)是否就本研究存在的偏倚進行討論。以上5項，每滿足1項為1分，總分≥3分者，質量可靠。

1.4 統計學方法采用RevMan5.0.1軟件對資料進行Meta分析。本資料收集的數據均為計數資料,故采用比值比(Odds ratio，OR)和95%的可信區間(Confidence interval，CI)表示。首先對資料進行異質性檢驗，若異質性檢驗P＞0.05或I2≤50%，可以認為各個研究間無異質性，采用固定效應模型(Fixed effect model)計算合并效應值；反之采用隨機效應模型(Rando effects model)。Meta分析結果以森林圖展示，潛在的發表偏倚用漏斗圖(Funnel plot)表示。

2 結果

2.1 文獻檢索結果通過計算機檢索外文、中文數據庫及Google檢索及手工檢索共得到675篇文章，通過閱讀文題和摘要排除596篇無關的文獻，初步確定了79篇相關文獻。再次通過閱讀全文后排除50篇(包括病例組為非OSCC組織、無對照組、重復報道、非免疫組化法等)，確定了29篇文獻；最后再次排除4篇無法提取陽性數據的文獻，最終納入25篇病例對照研究[3-27]。其中13個研究完整報道了口腔鱗癌淋巴結轉移情況及對應的VEGF表達[3-5，11，14，17-21，23，26-27]。納入研究的基本特征和質量評價見表1。

表1 納入文獻基本特征和質量評價結果

2.2 Meta分析結果

2.2.1 全部納入文獻的Meta分析納入資料1385例OSCC組織中VEGF陽性表達數為987例，合并對照組(包括正常口腔黏膜組織、口腔癌前病變組織)908例組織中VEGF陽性表達數為290例；首先對此資料進行異質性檢驗(Chi2=47.72，df=24，P=0.003，I2=50%)，結果各研究間存在異質性，故選用隨機效應模型進行分析。合并OR為10.73，95%CI為7.26～15.86，其合并效應量的檢驗Z值=18.37，P＜0.000 01，說明VEGF在OSCC組織中明顯高表達，結果見圖1。

圖1 VEGF在口腔鱗癌組織中表達的Meta分析森林圖

2.2.2 分層分析根據對照組不同進行分層分析。以口腔黏膜癌前病變組織為對照組，異質性檢驗P=0.005，I2=62%，采用隨機效應模型,結果顯示OR(95%CI)為[5.32(2.95～9.61)]；以正常口腔黏膜為對照組，異質性檢驗P=0.07，I2=31%，故采用固定效應模型，其結果顯示OR，(95%CI)為[14.89，(11.05～20.07)]，兩組檢驗統計量P值＜0.000 01，表明VEGF在口腔鱗癌組織中高表達，結果比較穩定。

2.2.3 敏感性分析去除研究中權重最大的ShilpiArora資料，結果：OR(95%CI)為[11.30(8.56～14.92)]，合并效應量的檢驗結果Z=17.11，P＜0.000 01，與剔除前結果基本一致；去除研究中權重較小的關鍵資料，各資料間存在異質性，故采用隨機效應模型，結果：OR(95%CI)為[10.48(7.08～15.51)]，合并效應量的檢驗結果Z=11.73，P＜0.000 01，與剔除前結果基本一致。分析結果的穩定性均很好，表明VEGF在OSCC組織中高表達。

2.2.4 VEGF在OSCC組織中的表達與淋巴結轉移關系的Meta分析結果VEGF與淋巴結轉移相關性Meta分析的異質性檢驗，結果顯示Chi2=34.02，df=12(P=0.0007，I2=65%)，因此，采用隨機效應模型。納入分析資料的885例OSCC組織中，淋巴結轉移組VEGF陽性表達率79.88%(274/343)高于無淋巴結轉移組的59.04%(320/542)，合并OR值3.98，95%CI：2.09～7.59，合并效應量的檢驗結果差異有統計學意義(P＜0.000 1)，表明VEGF在淋巴結轉移組中高表達，見圖2。

2.2.5 發表偏倚評價VEGF在OSCC和合并對照組間的表達以及在OSCC有無淋巴結轉移組中表達情況的Meta分析漏斗圖結果顯示，大部分研究在漏斗中軸附近或較對稱地分布在中軸兩邊，說明本研究受發表偏倚的影響程度較小，結論可靠。

圖2 VEGF表達與OSCC淋巴結轉移關系的Meta分析森林圖

3 討論

口腔鱗狀細胞癌是口腔領面部常見的惡性腫瘤，位居全身惡性腫瘤第六位，頸淋巴結轉移是影響OSCC預后的重要因素，早期發現頸部轉移，對提高臨床治愈率具有十分重要的意義。近年來，隨著現代分子生物學理論和技術的發展，從分子水平上闡明口腔鱗狀細胞癌的發生、發展、轉移和轉歸，提高口腔鱗狀細胞癌的早期診斷及治療水平已成為研究熱點。VEGF是目前已知促進血管生成的主要細胞因子，是一種分子量為45 kD的分泌性糖蛋白，也被稱作血管通透因子，其原位誘導血管生成作用十分強烈。有報道顯示，VEGF的高表達與頭頸部鱗癌、咽喉癌、胃癌、食道癌等多種惡性腫瘤及其臨床病理特征間存在關聯性。

本篇Meta分析共收集到OSCC病例1 385例，分析了VEGF的表達在口腔鱗癌組織與正常口腔黏膜和癌前病變組織之間的差異性。結果 顯示，VEGF在OSCC組的陽性表達是對照組的10.73倍，與對照組比較，OSCC組織中VEGF的高表達具有顯著統計學意義(P＜0.000 01)。為了檢驗結論的穩定性，還對資料進行了分層分析，分層分析的OR值均大于1，具有統計學意義，說明此次研究的結果是比較穩定和可靠的。基于本研究的證據，顯示VEGF高表達與口腔鱗癌之間存在正關聯，這一結果也與多個文獻報道相一致。如2008年，李立等[28]通過免疫組織化學方法，評價了48例OSCC標本的VEGF表達水平，結果發現VEGF在OSCC組織中陽性表達率達100%，而在相鄰正常口腔黏膜組織則基本無表達或弱表達，由此他推斷：OSCC可能是通過合成分泌VEGF，在增加新的腫瘤血管生成的同時，通過自分泌環路途徑作用于腫瘤細胞上的VEGFR2受體以促進其分裂增殖，并通過抑制樹突狀細胞的成熟，影響腫瘤宿主的免疫系統以促進腫瘤生長，從而在腫瘤的發生、發展過程中扮演了一個關鍵角色。

關于VEGF表達與OSCC淋巴結轉移的關系，蔡小攀等[14]的研究發現，VEGF在OSCC淋巴結轉移組的表達顯著高于無轉移組(P＜0.05)，其認為VEGF陽性表達對OSCC發生淋巴結轉移有顯著意義。而Uehara等[30]的研究卻未確認口腔鱗癌淋巴結轉移狀態與VEGF表達之間的關聯性。因此，有關VEGF表達與OSCC淋巴結轉移的關系，目前尚存在爭議。本文對收集的13個完整報道了口腔鱗癌淋巴結轉移情況及對應的VEGF表達情況的文獻進行了Meta分析，分析結果顯示：合并OR值3.98，95%CI為2.09～7.59，合并效應量的檢驗結果P＜0.0001，顯示，VEGF在OSCC淋巴結轉移組中高表達具有顯著統計學意義，提示VEGF的高表達與OSCC患者的淋巴結轉移存在正相關，可認為VEGF高表達是OSCC淋巴結轉移的一個危險因素，會增加預后不良的風險。

綜上所述，基于文獻研究，VEGF高表達與人類口腔鱗癌及其淋巴結轉移之間存在正關聯，提示VEGF參與了口腔鱗狀細胞癌的發生，在口腔鱗狀細胞癌發展過程中也起著重要作用，推測VEGF的高表達可作為口腔鱗癌診斷和治療的一個很有價值的臨床生物指標蛋白。本次Meta分析也存在一定的局限性，所列入的文獻大多源于國內的資料，并缺乏灰色文獻(如專題討論會記錄、未發表的資料)，可能會漏掉陰性結果的研究而產生發表偏倚。因此，還需累積更多其他人群及大樣本的病例以展開前瞻性的深入研究，以進一步證實VEGF的表達與OSCC之間的關系。

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Relationship between the expression of VEGF and lymphatic node metastasis in oral squamous cell carcinoma:a systematic review.

DONG Hong,ZHANG Xiao-yan,LONG Ming-sheng.Department of Internal Medicine,Shiyan Dongfeng Stomatiogical Hospital Affiliated to Hubei University,shiyan 442000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo investigate the relationship between the expression of VEGF and lymphatic node metastasis in oral squamous cell carcinoma.MethodsThe published studies were searched in The Cochrane Library,PubMed(1950 to 2013),Embase(1950 to 2013),and the Chinese Biomedicine Database(1979 to 2013).The software RevMan 5.0.1 was used to test the heterogeneity.ResultsOSCC cases(n=1 385)and Controls(n=908)in a total of 25 studies were recruited.The expression of VEGF in OSCC was significantly higher than Controls(OR=10.73，95%CI∶7.26～15.86，P＜0.00001).The expression of VEGF in OSCC lymphatic node metastasis was significantly higher than non-lymphatic node metastasis(OR=3.98，95%CI∶2.09～7.59,P＜0.0001). ConclusionAccording to the current research,higher VEGF expression might be associated with oral squamous cell carcinoma and closely related with lymph node metastasis.

Oral squamous cell carcinoma;VEGF;Lymph node metastasis;Meta analysis

R739.85

A

1003—6350（2014）19—2936—05

2014-02-03)

董紅。E-mail：donghong3024@163.com

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2014.19.1155