用于COPD的吉祥草霧化吸入劑制備及其質(zhì)量控制研究

黃詩(shī)婭，李 江，馬國(guó)新

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550002)

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用于COPD的吉祥草霧化吸入劑制備及其質(zhì)量控制研究

黃詩(shī)婭，李 江*，馬國(guó)新

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550002)

目的：制備吉祥草氣霧劑，建立其質(zhì)量控制方法。方法：采用水提醇沉工藝，提取吉祥草的有效部位，采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，紫外分光光度計(jì)法測(cè)定吉祥草氣霧劑中的總皂苷含量。結(jié)果：薯蕷皂苷元在4.0～44.0μg·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 4)；平均加樣回收率為98.79%，RSD=0.44%(n=6)。結(jié)論：吉祥草氣霧劑質(zhì)量穩(wěn)定，薄層色譜法定性鑒別可行，且吉祥草氣霧劑制備工藝合理，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)。

吉祥草；氣霧劑；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；藥物制備

吉祥草又名觀音草，為百合科吉祥草屬植物吉祥草(Reineckiacarnea(Andr.)Kunth)的帶根全草，是我國(guó)西南苗族地區(qū)常用的傳統(tǒng)草藥之一。其味甘，性涼，具有清肺止咳、涼血止血、解毒利咽等功效[1]。苗族民間常用其治療咳嗽、支氣管炎、肺炎等病癥。吉祥草在貴州民間及目前臨床上主要采用霧化吸入的給藥方式，即將吉祥草鮮品直接加水煮沸，患者吸入其氣霧來(lái)治療慢性阻塞性肺疾病[2](COPD)，其是通過(guò)肺部給藥途徑發(fā)揮療效的。肺部給藥具有吸收表面積大、吸收部位血流豐富、藥物吸收快而完全、避免肝首過(guò)效應(yīng)、酶活性低、上皮屏障較薄及膜通透性高等優(yōu)點(diǎn)[3]。近年來(lái)，有以吉祥草為主藥的“咳速停糖漿”“咳速停膠囊”“復(fù)方吉祥草含片”“咳清膠囊”等制劑的研制報(bào)道，但對(duì)于其吸入劑的研究報(bào)道并不多。筆者運(yùn)用現(xiàn)代制劑技術(shù)將該藥制成定位、定量、速效、安全的新型氣霧劑，并采用薄層色譜法鑒別吉祥草，紫外分光光度計(jì)法測(cè)定吉祥草中總皂苷含量，為吉祥草氣霧劑的進(jìn)一步研究和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

紫外分光光度計(jì)GBC Cintra 20(澳大利亞照生公司)；安靈ZF-2型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠)；電子調(diào)溫電熱套98-1-B型(天津市泰斯特儀器有限公司)；安瓿拉絲灌封機(jī)(上海信誼制藥機(jī)械廠)；安瓿瓶(貴州神奇藥業(yè)有限公司)；YX系列手提式壓力蒸汽滅菌器(江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司)；轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-2000(上海亞榮生化儀器廠)；電子天平(Sartorius德國(guó)賽多利斯)；恒溫水浴鍋(江蘇國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)；科導(dǎo)SK8210HP型臺(tái)式超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)。

吉祥草對(duì)照藥材(批號(hào)：121314-200402，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；薯蕷皂苷(批號(hào)：MUST-13042301，成都曼斯特生物科技有限公司中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所)；香蘭素(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)。吉祥草采于貴州六枝縣，經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院生藥教研室孫慶文老師鑒定為百合科吉祥草屬植物吉祥草Reineckiacarnea(Andr.)Kunth的帶根全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 吉祥草氣霧劑制備[4]

取吉祥草藥材干品30g，切碎，置于3 000mL圓底燒瓶中，加20倍量的水浸泡3h，水浴回流提取2次，每次3h，濾過(guò)，合并濾液，濃縮并定容至50mL，室溫冷卻，慢慢加入乙醇，邊加邊快速攪拌，使含醇量達(dá)到75%，靜置過(guò)夜，取上清液，回收乙醇，濃縮定容至30mL即得含量為1g/mL的醇沉藥液。藥液用YX系列手提式壓力蒸汽滅菌器滅菌8min，精密吸取吉祥草水提液10mL稀釋成200mL，含生藥量為0.1g/2mL，過(guò)0.22μm微孔濾膜后定量裝入氣霧劑瓶?jī)?nèi)，壓蓋，充入拋射劑(壓縮空氣，10kg/cm2)即得。

2.2 定性鑒別

取吉祥草氣霧劑1支，排盡拋射劑后取2mL，揮干，殘?jiān)?0%乙醇30mL，水浴回流1.5h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL微熱溶解，移至錐形瓶中，再加鹽酸8mL，置于水浴中加熱回流2.5h，放冷，濾過(guò)，濾液用氯仿萃取3次，每次分別為30mL、20mL、10mL，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。另取吉祥草藥材和吉祥草對(duì)照品藥材粉末各2g，同法制成藥材溶液、對(duì)照品藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》一部附錄VIB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.2)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外光燈下(365nm)下檢視。結(jié)果顯示，吉祥草霧化吸入液、藥材溶液和對(duì)照品藥材溶液在相同比移值處呈現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

圖1 吉祥草霧化吸入劑中吉祥草的薄層色譜鑒別

注：1.供試品溶液；2.藥材溶液；3.對(duì)照藥材溶液

2.3 總皂苷含量測(cè)定[5-6]

2.3.1 供試品溶液制備 精密吸取吉祥草霧化吸入液10mL，置于分液漏斗中，用石油醚萃取6次(每次分別為15mL、10mL、10mL、10mL、10mL、10mL)，棄去石油醚層，水層用水飽和正丁醇萃取4次(每次分別為15mL、10mL、10mL、10mL)，合并正丁醇層，并用正丁醇飽和水溶液20mL洗滌，減壓回收正丁醇至干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ萦?5mL容量瓶中，作為供試品溶液。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取薯蕷皂苷對(duì)照品0.001 2g，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成濃度為1.2mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.3 測(cè)定波長(zhǎng)選擇 分別精密吸取對(duì)照品溶液1.5mL、供試品溶液0.6mL置于10mL具塞試管中，揮干甲醇，分別加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，搖勻，密塞，60℃水浴中顯色15min，取出后立即用冰水冷卻5min，再加入5mL冰醋酸稀釋，搖勻，靜置10min，在200～900nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3。兩者均在460nm處有最大吸收峰。

圖2 對(duì)照品溶液波長(zhǎng)掃描

圖3 供試品溶液波長(zhǎng)掃描

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密吸取薯蕷皂苷對(duì)照品溶液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2mL，置于10mL具塞試管內(nèi)，揮干甲醇，分別加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，搖勻，密塞，60℃水浴中顯色15min，取出后立即用冰水冷卻5min，再加入5mL冰醋酸稀釋，搖勻，靜置10min，于460nm處測(cè)定其吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明：薯蕷皂苷在4.0～44.0μg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為：A=0.145 9C-0.055 8，r=0.999 4。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照液0.4mL，共6份，按“2.3.3”項(xiàng)下操作方法顯色，于460nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD=0.69%，結(jié)果表明該方法的精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取樣品溶液0.6mL，按“2.3.3”項(xiàng)下操作方法顯色，分別于0、15、30、45、60、90、120min時(shí)于460nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果表明樣品液顯色后在120min內(nèi)穩(wěn)定，吸光度RSD=0.06%。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批氣霧劑6份，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下操作方法顯色，于460nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD=0.14%，結(jié)果表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取已知總皂苷含量的樣品溶液0.1mL于具塞試管中，加入對(duì)照品溶液0.2mL(0.12mg/mL)，按“2.3.3”項(xiàng)下操作方法顯色，于460nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.3.9 樣品總皂苷含量測(cè)定 按照“2.3.1”項(xiàng)下操作方法，制備3批供試品溶液，精密吸取0.2mL，按“2.3.3”項(xiàng)下操作方法顯色，于460nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品總皂苷含量測(cè)定

3 討論

用于治療COPD的吉祥草霧化吸入劑是通過(guò)肺部給藥，其藥物顆粒大小需要進(jìn)行嚴(yán)密控制，因此該實(shí)驗(yàn)采用的微孔濾膜孔徑大小為0.22μm。吉祥草霧化吸入劑中主要含有皂苷類成分，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)水提醇沉法制備吉祥草霧化吸入劑，其提取過(guò)程較為經(jīng)濟(jì)，容易操作，儀器設(shè)備易得。采用薄層色譜法對(duì)吉祥草進(jìn)行定性鑒別；采用紫外分光光度計(jì)法，以薯蕷皂苷為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸法顯色，可對(duì)吉祥草氣霧劑中的總皂苷含量進(jìn)行測(cè)定。該法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好，為吉祥草氣霧劑的質(zhì)量控制研究提供了新的有效手段。

[1] 貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[S].貴陽(yáng):貴州科學(xué)技術(shù)出版社,2003:150.

[2] 劉煒.苗藥吉祥草霧化吸入治療痰熱郁肺型COPD急性加重期臨床觀察[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志,2012,8(8):5-6.

[3] 湯玥,朱家壁,陳西敬.新型肺部給藥系統(tǒng)——吸入粉霧劑[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2009,44(6):571-574.

[4] 聶垣東,柴天川.辛芷氣霧劑制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(6):1396-1397.

[5] 劉亮,杜江,潘爐臺(tái),等.苗藥觀音草中總皂苷的含量測(cè)定[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2011,4(2):2.

[6] 邱德文,杜江,李江,等.貴州十大苗藥研究[M].北京:中醫(yī)古籍出版社,2008:507.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Preparation and Quality Control ofReineckiaCarnea(Andr.) Kunth Aerosol for COPD

Huang Shiya, Li Jiang*, Ma Guoxin

(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002,China)

Objective:To prepareReineckiacarnea(Andr.) Kunth aerosol and establish its quality standard.Methods:We used the water extracting and alcohol precipitation techniques, extracting effective part andReineckiacarnea(Andr.) Kunth was identified by thin-layer chromatography(TLC),Total saponin of the aerosol was determined by UV spectrophotometry.Results:The quality ofReineckiacarnea(Andr.) Kunth aerosol was repeatable and the TLC was reliable. The linear correlation of diosgenin was good in the range of 4.0～44.0μg·mL-1(r=0.999 4),and the range of the spotting recovery rate was 98.79%(RSD=0.44%). Conclusion:The preparation technology ofReineckiacarnea(Andr.) Kunth aerosol is reasonable and the quality standard is reliable.

Reineckiaarnea(Andr.) Kunth; Aerosol;Quality Specification; Preparation

2014-07-25

貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(QZYY2013-110)

黃詩(shī)婭(1988-)，女，貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院碩士研究生，研究方向?yàn)樗幬镄轮苿┘靶聞┬汀?/p>

李江(1973-)，男，博士，貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)方劑配伍和民族藥系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)。

R283

A

1673-2197(2014)22-0019-02