丹桔合劑的質量控制

龐鵬，李文

南京市中醫院，南京 210001

丹桔合劑的質量控制

龐鵬，李文*

南京市中醫院，南京 210001

目的：建立丹桔合劑的質量控制指標。方法：采用薄層色譜法對制劑中丹參、陳皮進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對制劑中丹酚酸B、橙皮苷進行含量測定。結果：薄層色譜斑點清晰，陰性無干擾；含量測定丹酚酸B和橙皮苷分別在進樣量0.19～3.01 μg、0.16～2.51 μg的范圍內呈良好的線性關系；丹酚酸B和橙皮苷的加樣回收率分別為98.28%和97.91%。結論：本方法簡便、專屬性強，可作為該制劑的質量控制指標。

丹桔合劑；薄層色譜法；高效液相色譜法；丹酚酸B；橙皮苷

丹桔合劑為臨床使用多年的經驗方，由丹參、山楂、何首烏、決明子、陳皮等5味藥材組成。其具有滋補肝腎、活血化瘀、化痰祛濁的功效；主治眩暈、肢麻等中風先兆癥狀。本實驗采用薄層色譜法對制劑中的丹參、陳皮等進行定性鑒別；用高效液相色譜法對制劑中丹參與陳皮的有效成分丹酚酸B和橙皮苷進行含量測定。在此基礎上建立丹桔合劑的質量控制方法，似可作為質量評價主要手段之一[1]。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀（UV/Visible Detector 2489；Seperations Module e2695）；Sartorius電子天平（型號：BT25S）；

丹酚酸B對照品（批號：111562-201111），橙皮苷對照品（批號：110721-201115）均由中國藥品生物制品檢定所提供；丹桔合劑（自制，每毫升合劑含0.8 g生藥，批號：20121218、20121219、20121220）；乙腈為色譜純；其余試劑為分析純。

2 性狀及制備

2.1 性狀及制備

棕色液體，嗅之有淡淡的中藥香。

取處方藥味，加水，先浸潤，再加熱煎煮多次；合并水煎液，濾過，分裝入瓶，封口，滅菌，冷卻后貼標簽，即得。

2.2 鑒別

2.2.1 丹參取丹桔合劑3 mL于10 mL帶蓋離心管中，加入甲醇6 mL，振搖混合均勻，超聲提取15 min后，以4500 r·min-1離心10 min，上清液即可作為供試品溶液。取除丹參外的4味藥材各40 g，按合劑制備法制得丹參的陰性合劑，再按供試品溶液的制備方法制備陰性溶液。另取丹參對照藥材0.2 g，加75%甲醇25 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為丹參對照藥材溶液。再取丹酚酸B對照品，加75%甲醇制成每毫升含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照2010版《中國藥典》丹參藥材項下鑒別方法進行檢測。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾[2]。

2.2.2 陳皮取丹桔合劑3 mL于10 mL帶蓋離心管中，加入甲醇6 mL，振搖混合均勻，超聲提取15 min后，以5000 r·min-1離心10 min，上清液即可作為供試品溶液。取除陳皮外的4味藥材各40 g，按合劑制備法制得陳皮的陰性合劑，再按供試品溶液的制備方法制備陰性溶液。另取陳皮對照藥材0.3 g，加甲醇10 mL，加熱回流20 min，濾過，取濾液5 mL，濃縮至1 mL，作為陳皮對照藥材溶液。再取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。照2010版《中國藥典》陳皮藥材項下鑒別方法進行檢測。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾[3]。

2.3 檢查

按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅠJ合劑項下有關規定檢查，對本品的密度、pH值、裝量、微生物限度等進行了檢查和測定，均符合規定。

2.4 含量測定

2.4.1 色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相梯度洗脫如表1；檢測波長：284 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL。理論板數按丹酚酸B峰計算不低于2000。

表1 流動相梯度洗脫程序

2.4.2 溶液的制備

對照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對照品6.01 mg，置于10 mL量瓶中，用50%甲醇充分溶解并定容至刻度，搖勻，即得丹酚酸B對照品儲備液。精密稱取橙皮苷對照品5.02 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇充分溶解并定容至刻度，精密量取5 mL，置于10 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得橙皮苷對照品儲備液。

供試品溶液的制備：精密量取丹桔合劑0.5 mL，加入水4.5 mL，再加入甲醇5 mL，超聲處理15 min，使充分混合均勻；以5000 r·min-1離心15 min。上清液即可作為供試品溶液。

2.4.3 專屬性試驗取本合劑缺丹參、陳皮的陰性制劑，按供試品溶液制備方法制得丹參、陳皮陰性樣品，按上述色譜條件進樣，測定，結果表明，陰性制劑無干擾。見圖1。

2.4.4 線性關系考察精密吸取0.601 mg·mL-1的丹酚酸B對照品儲備液0.31、0.62、1.25、2.5、5 mL分別用50%甲醇定容至10 mL的量瓶中，搖勻，分別得到濃度為0.301、0.150、0.075、0.038、0.019 mg· mL-1的丹酚酸B系列對照品溶液，按上述色譜條件進樣，測定峰面積，以峰面積積分值（A）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程Y=1.0×107X+68826。

精密吸取0.502 mg·mL-1的橙皮苷對照品儲備液0.31、0.62、1.25、2.5、5 mL用甲醇定容至10 mL的量瓶中，搖勻，即得0.251 mg·mL-1的橙皮苷對照品溶液；依次稀釋，分別得到濃度為0.251、0.126、0.063、0.031、0.016 mg·mL-1的橙皮苷系列對照品溶液，按上述色譜條件進樣，測定峰面積，以峰面積積分值（A）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程Y= 9.0×106X-11406。

圖1 樣品色譜圖

2.4.5 精密度試驗精密吸取配制好的丹酚酸B對照品溶液，在上述色譜條件下，連續進樣6針，測定峰面積，計算得丹酚酸B的相對標準偏差（RSD）為0.06%（＜3%），結果表明，在該條件下儀器精密度良好。

精密吸取配制好的橙皮苷對照品溶液，在上述色譜條件下，連續進樣6針，測定峰面積，計算得RSD為0.35%（＜3%），結果表明，在該條件下儀器精密度良好。

2.4.6 重復性試驗平行制備供試品液5份，吸取制備好的供試品溶液，進樣，測定丹酚酸B、橙皮苷峰面積，計算得丹酚酸B的RSD=2.7%（<3%），橙皮苷的RSD=1.9%（<3%），結果表明此測定方法重復性良好。

2.4.7 穩定性試驗吸取制備好的供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、18、24 h進樣，測定丹酚酸B、橙皮苷峰面積，計算得丹酚酸B的RSD=0.28%（＜3%），橙皮苷的RSD=0.39%（＜3%），結果表明，在該條件下樣品溶液在24 h內穩定。

2.4.8 加樣回收率試驗精密量取已知丹酚酸B、橙皮苷含量的同一批合劑共6份，再精密加入等量的丹酚酸B、橙皮苷對照品，測定丹酚酸B、橙皮苷峰面積，計算丹酚酸B、橙皮苷的含量，按下式計算回收率（應為95%～105%）和平均回收率，結果見表2。表明此測定方法回收率良好。

回收率=（測得量-已知樣品量）/加入的標準品量

表2 丹酚酸B、橙皮苷加樣回收試驗結果

2.4.9 樣品含量測定以建立的方法對3批樣品進行含量測定。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果

3 討論

梯度洗脫的選擇：按2010版《中國藥典》藥材項下“含量測定”方法檢測。丹酚酸B的流動相為甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59），檢測波長為286 nm；橙皮苷的流動相為甲醇-醋酸-水（35∶4∶61），檢測波長為283 nm。故本實驗確定檢測波長為284 nm，根據藥典的流動相比例及目標峰的出峰時間，可初判橙皮苷的極性大于丹酚酸B的極性。由圖1可知橙皮苷的出峰時間為16 min左右，丹酚酸B的出峰時間為22 min左右，前15 min的峰非目標峰，故選用相對大極性的流動相比例，以節省時間，目標峰的出峰時間分別采用平緩的梯度23%、27%的乙腈。選用上述梯度洗脫條件可以大大節省時間，樣品的出峰時間控制35 min內，并且峰型清晰，無拖尾現象。故最終確定“2.4.1”的色譜條件。

[1] 趙穎，談瑄忠，毛春芹，等.益坤寧顆粒的質量控制[J].中國醫院藥學雜志，2009，29（14）：1234-6.

[2] 劉豐賢.丹參調肝顆粒的薄層色譜法鑒定[J].湖南師范大學學報，2012，9（1）：84-6.

[3] 宋錦鋒，李娟.升清膠囊定性定量方法研究[J].中南藥學，2012，10（3）：192-5.

Quality Standard of Danju Mixture

PANG Peng,LI Wen
Nanjing Hospital of TCM,Nanjing 210001

Objective：To study and formulate the quality control index of Danju mixture.Methods：Qualitative analysis of Salvia Miltiorrhiza and Tangerine Peel in Danju mixture was made with thin-layer chromatography(TLC).And salvianolic acid and aurantiamarin in the Danju mixture were quantified with high performance liquid chromatography(HPLC).Results：The TLC spots were clear and no interference was found in the negative control.The good linear ranges of calibration curves for salvianolic acid and aurantiamarin were 0.19～0.75 μg and 0.16～0.13 μg,respectively,and the recovery rates were 98.28%and 97.91%,respectively.Conclusion：The process is convenient,specific and exact,and can be used as the basis of quality control for Danju mixture.

Danju mixture;TLC;HPLC;Salvianolic acid;Aurantiamarin

R927.11

A

1673-7806（2014）02-118-03

龐鵬，女，主管中藥師，主要研究方向：藥檢及臨床藥學 E-mail:njqly@163.com

*通訊作者 李文，女，主任中藥師，主要研究方向：中藥制劑及檢驗 E-mail:njzyyliwen@sohu.com

2013-10-21

2014-01-06