高效液相色譜法測定鹽酸阿考替胺片的含量

葛莉莉，丁洪亮

宜興市人民醫院，江蘇宜興 214200

高效液相色譜法測定鹽酸阿考替胺片的含量

葛莉莉，丁洪亮*

宜興市人民醫院，江蘇宜興 214200

目的：建立鹽酸阿考替胺片含量測定的高效液相色譜方法。方法：采用島津C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；以甲醇-磷酸鹽緩沖液（60∶40）為流動相；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：280 nm。結果：鹽酸阿考替胺的線性范圍為20～200 μg·mL-1，r=0.9999，平均回收率為99.8%，RSD為0.67%（n=9）。結論：該方法簡便靈敏、結果準確，適用于鹽酸阿考替胺片的質量控制。

鹽酸阿考替胺片；HPLC法；含量測定

鹽酸阿考替胺[1]（acotiamide，商品名Acofide）是全球首個功能性消化不良（FD）治療藥，臨床用于餐后飽脹、上腹脹痛、早期腹脹等功能性消化不良疾病的治療，2013年6月在日本率先上市。有關該藥的含量測定方法國內未見報道，本研究采用高效液相色譜法測定鹽酸阿考替胺片（結構式見圖1）含量，旨在為藥物的質量控制提供有效的檢測方法。

圖1 鹽酸阿考替安結構式

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津20AT高效液相色譜儀（SPD-20A紫外檢測器，LCsolution工作站）；島津UV-1800紫外可見分光光度計；賽多利斯BT125D電子天平。

1.2 試藥

鹽酸阿考替胺對照品（批號：20131101，純度：99.8%）,鹽酸阿考替胺片（批號：20140101、20140102、20140103，規格100mg），均為南京天翔醫藥科技有限公司提供；鹽酸阿考替胺片（批號：D135，規格：100 mg）為Astellas制藥與Zeria藥業生產。

甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shimadzu C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液（10 mmol·L-1磷酸二氫鈉溶液，用磷酸調節pH值至3.0）（60∶40）；檢測波長：280 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL·min-1；進樣量10 μL。

2.2 方法

取本品10片，稱定，研細，混合均勻，精密稱取細粉適量（相當于鹽酸阿考替胺10 mg），置100 mL量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取其10 μL注入色譜儀，記錄色譜圖。另取鹽酸阿考替胺對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋成濃度為每毫升含0.1 mg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算含量，見圖2。

圖2 鹽酸阿考替胺片HPLC色譜圖

2.3 輔料干擾試驗

按照處方比例稱取輔料適量，置100 mL量瓶中，加流動相至刻度，振搖，濾過，取續濾液10 μL注入色譜儀，記錄色譜圖。結果表明空白輔料不干擾鹽酸阿考替胺含量測定。

2.4 線性范圍考察

精密稱取鹽酸阿考替胺對照品20 mg，加流動相溶解,稀釋成每毫升含0.2 mg的溶液，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液1、2、4、6、8、10 mL，分別置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，在上述“色譜條件”下測定，分別精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以鹽酸阿考替胺峰面積（A）與濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程：A= 20583C-9113（r=0．9999）。結果表明，本品在20～200 μg·mL-1濃度范圍內線性關系良好。

2.5 進樣精密度試驗

精密量取鹽酸阿考替胺對照品儲備液5 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，重復進樣6次，結果以鹽酸阿考替胺峰面積計，RSD為0．23%。

2.6 重復性試驗

取20140101批樣品，配制6份供試品溶液，分別測定鹽酸阿考替胺的含量，平均標示量為99．6%，RSD為0．61%。

2.7 回收率試驗

取鹽酸阿考替胺對照品適量，精密稱定，并按處方比例分別加入適量的輔料，用流動相分別制成低、中、高3種濃度（含主成分分別為標示量的80%、100%、120%）各3份，照“樣品測定”項下的方法測定并計算回收率。平均回收率為99．8%，RSD為0．63%。

2.8 穩定性試驗

取20140101批樣品，配制供試品溶液，在室溫下分別放置0、2、4、6、8 h測定峰面積，結果RSD為0．45%（n=5），表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.9 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入色譜儀測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。結果見表1。

表1 樣品含量測定結果（n=3）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取本品加流動相制成每毫升約含20 μg的溶液，在200～400 nm波長范圍內進行掃描，繪制紫外吸收光譜圖，表明本品在280 nm處有最大吸收，因此選擇280 nm為樣品的檢測波長，見圖3。

圖3 鹽酸阿考替胺紫外吸收圖譜

3.2 流動相的選擇

選用甲醇-水、乙睛-水等體系，但效果均不理想，參考國外文獻[2-3]，對流動相進行篩選，最終選擇甲醇-磷酸鹽緩沖液（10 mmol·L-1磷酸二氫鈉溶液，用磷酸調節pH值至3．0）（60∶40）為流動相；該條件下，鹽酸阿考替胺峰形、柱效和分離度均良好。

[1] 陳琳萍．首個功能性消化不良治療藥阿考替胺的研究進展[J]．上海醫藥，2014，35（3）：55-7．

[2] Yoshii K,Hirayama M,Nakamura T,et al．Mechanism fordistributionofacotiamide,anovel gastroprokinetic agent for the treatment of functional dyspepsia,in rat stomach[J]．J Pharm Sci,2011,100(11): 4965-73．

[3] Kawachi M,Matsunaga Y,Tanaka T,et al．Acotiamide hydrochloride(Z-338)enhances gastric motility and emptying by inhibiting acetylcholinesterase activity in rats[J]．Eur J Pharmacol,666(2011):218-25．

Determination of the Content of Acofide Tablets by HPLC

GE Li-li,DING Hong-liang*
Yixing People's Hospital,Jiangsu Yixing 214200,Jiangsu,China

Objective：To establish an HPLC method for the determination of Acofide tablets．Methods：A Shimadzu C18column(150 mm×4．6 mm,5 μm)was selected．The mobile phase consisted of methanolphosphate buffered solution(60∶40)．The flow rate was 1．0 mL·min-1and the detection wavelength was 280 nm．Results：The calibration curve was linear in the range of 20～2000 μg·mL-1(r=0．9999)．The average recovery was 99．8%,RSD=0．67%(n=9)．Conclusion：The method is accurate and reliable,and can be used for quality control of Acofide tablets．．

Acotiamide Tablets;HPLC;Content Determination

R927.2

A

1673-7806（2014）06-514-02

葛莉莉，女，主管藥師 Tel:0510-87921293

*通訊作者 丁洪亮，男，主任藥師 Tel:0510-87921020

2014-08-07

2014-08-22