對《中國藥典》2010年版利巴韋林注射液有關物質檢查方法的探討

王麗，申蘭慧，陳國清

江蘇省無錫藥品檢驗所，無錫 214028

對《中國藥典》2010年版利巴韋林注射液有關物質檢查方法的探討

王麗，申蘭慧，陳國清

江蘇省無錫藥品檢驗所，無錫 214028

目的：對利巴韋林注射液有關物質檢查方法進行探討。方法：按照《中國藥典》2010年版二部利巴韋林注射液有關物質檢查的方法，對利巴韋林注射液進行破壞性試驗，同時對利巴韋林的降解產物進行考察。結果：利巴韋林雜質峰與氯化鈉峰難以分開。因此，利巴韋林注射液處方中如有氯化鈉的存在，將干擾利巴韋林注射液有關物質的檢查。結論：建議有關物質檢測時扣除氯化鈉峰的影響，或者企業在利巴韋林注射液的處方中標注氯化鈉的量或不加氯化鈉。

利巴韋林；有關物質；氯化鈉

利巴韋林（三氮唑核苷病毒唑，Ribavirin，結構式見圖1）是一種廣譜強效抗病毒藥物，廣泛用于治療呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎與支氣管炎、皮膚皰疹病毒感染[1]。《中國藥典》2010年版二部收載了利巴韋林原料及利巴韋林注射液，標準規定利巴韋林原料及其注射液中單個雜質的峰面積應不得大于對照溶液主峰面積的0.25倍（0.25%），各雜質峰面積的和應不得大于對照溶液的主峰面積（1.0%）[2]。但標準中沒有對利巴韋林注射液的處方進行規定。市售的利巴韋林注射液處方不一，處方中除主藥利巴韋林和溶劑注射用水外，有的廠家處方標示添加了氯化鈉，但未標明氯化鈉的濃度。筆者對有關廠家生產的利巴韋林注射液進行檢測,發現處方中若加有氯化鈉，因利巴韋林雜質峰與氯化鈉峰難以分開，對有關物質檢查干擾很大，故在有關物質檢測時應排除氯化鈉峰的影響，或者建議企業在利巴韋林注射液的處方中標注氯化鈉的量或不加氯化鈉以利于檢測。

圖1 利巴韋林化學結構

1 材料

1.1 藥品與試劑

利巴韋林注射液：①A廠，批號：120710；②B廠，批號：1303136411；③C廠，批號：1306016421；④D廠，批號：1201311；⑤E廠，批號：1308141；規格均為1 mL∶0.1 g，其中廠家D和廠家E的利巴韋林注射液標明處方中含有氯化鈉；其余試劑均為分析純；試驗用水為超純水。

1.2 儀器

安捷倫1200高效液相色譜儀，DAD檢測器（美國Agilent公司）；Milli-Q超純水器（美國Millopore公司）；Mettler AE 240電子天平（美國Mettler-Toledo公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：磺化交聯的苯乙烯二乙烯苯共聚物的氫型強陽離子交換樹脂柱（型號：Rezex，美國Phenomenex公司）；流動相：水（用稀硫酸調節pH值至2.5±0.1）；流速：0.6 mL·min-1；檢測波長：207 nm；柱溫：35℃；進樣量：20 μL。理論塔板數按利巴韋林峰計不得低于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液精密量取利巴韋林注射液1 mL，加流動相稀釋至250 mL，即得。

2.2.2 對照溶液精密量取供試品溶液1 mL，加流動相稀釋至250 mL，即得。

2.3 專屬性試驗

在“2.1”色譜條件下，取供試品溶液（廠家A）的未破壞樣品和破壞性樣品（酸破壞：加入1 mol·L-1鹽酸，振搖，室溫放置2 h后，用1 mol·L-1氫氧化鈉中和；堿破壞：加入1 mol·L-1氫氧化鈉，振搖，室溫放置2 h后，用1 mol·L-1鹽酸中和；高溫破壞：90℃水浴放置4 h后，放冷至室溫），分別注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。另取0.9%氯化鈉注射液1 mL，加流動相稀釋至250 mL，取20 μL注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。供試品溶液未破壞樣品主要有兩雜質峰即1和2，相對保留時間約為主峰的0.3與0.6。酸破壞后利巴韋林主峰面積顯著減小，雜質1的峰面積顯著增大，且峰形分裂為雙峰。堿破壞后利巴韋林主峰面積同樣顯著減小，雜質2峰面積顯著增大。高溫破壞后兩個雜質的峰面積也有所增大。同時發現，氯化鈉在利巴韋林的雜質1處，也出現吸收峰，且保留時間非常接近，難以分開。

圖2 有關物質檢查方法專屬性試驗色譜圖

2.4 有關物質檢查方法和結果

取各利巴韋林注射液對照溶液20 μL，分別注入色譜儀，調節儀器靈敏度，使主成分峰的峰高約為滿量程的25%。另取各供試品溶液20 μL，分別注入色譜儀，記錄供試品色譜圖至主成分峰保留時間的2倍，見圖3?？紤]到處方中含有氯化鈉的利巴韋林注射液未對氯化鈉的濃度進行標注，參照《中國藥典》2010年版二部葡萄糖氯化鈉注射液中氯化鈉含量測定的方法[3]，對廠家D和廠家E的利巴韋林注射液中氯化鈉的濃度進行測定，結果均為0.9%。因此，配制相應的氯化鈉溶液注入色譜儀，有關物質考察時扣除氯化鈉的峰面積后進行計算。采用不加校正因子的主成分自身對照法，供試品溶液中雜質A量、其他雜質量和雜質總量見表1。

結果廠家C的利巴韋林注射液的單個雜質的峰面積大于對照溶液主峰面積的0.25倍（0.25%），按照藥典規定可能判定有關物質檢查不符合規定。廠家D和E的利巴韋林注射液在扣除氯化鈉峰后，有關物質符合規定。

3 討論

圖3 利巴韋林注射液（廠家C）有關物質色譜圖

表1 不同廠家生產的利巴韋林注射液有關物質測定結果

3.1 利巴韋林在《歐洲藥典》5.0版中也有收載，采用同《中國藥典》2010年版二部利巴韋林檢查相同的色譜條件，對相對保留時間約為主峰0.3處的雜質峰進行了嚴格控制，限度為0.1%[4]。該雜質峰與《中國藥典》2010年版二部方法測定的利巴韋林雜質1的相對保留時間相同，故推測雜質1為利巴韋林的5-O-乙?；a物，是化學合成利巴韋林的中間產物[5]。

3.2 苯乙烯系強酸性陽離子交換樹脂，是通過在苯乙烯-二乙烯苯共聚物的苯環上引入磺酸基團制備的，適用于陽離子的分離。利巴韋林為三氮唑核苷，在pH 2．5的流動相條件下呈質子化堿，故可通過置換色譜柱上的氫離子而有所保留[6]。試驗發現，采用《中國藥典》2010年版二部規定的方法檢查利巴韋林注射液的有關物質時，對于加有氯化鈉的利巴韋林注射液而言，氯化鈉會在利巴韋林的雜質峰處同樣出現吸收峰。文獻報道，氯離子在200～220 nm范圍內有較弱的紫外吸收[7-8]，而且氯離子在磺酸型陽離子交換柱上存在離子排斥，故氯化鈉在色譜柱的接近死時間處出峰。從試驗結果可以看出，若不扣除氯化鈉色譜峰面積，有關物質檢查難以判定是否符合規定。同時，標準中未對處方中氯化鈉的濃度進行規定或考察，而氯化鈉的濃度的高低與峰面積大小直接相關，故含有氯化鈉的利巴韋林注射液應當對氯化鈉的含量進行標注。

3.3 考慮到《中國藥典》2010年版利巴韋林測定所使用的流動相中未加甲醇一類的有機相，具有不可調節、選擇性差等缺點，筆者曾嘗試減低流動相的流速或選擇水作為溶劑稀釋供試品溶液，但是氯化鈉色譜峰仍難以與雜質1的峰分開。有文獻采用常規C18柱，以水為流動相對利巴韋林注射液進行有關物質的檢查，氯化鈉同樣會干擾其有關物質的檢查[9]。故建議將《中國藥典》利巴韋林有關物質的規定進行修訂，判定結果描述為供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，扣除溶劑及輔料峰，單個雜質峰面積應不得大于對照溶液主峰面積的0．25倍（0．25%），各雜質峰面積的和應不得大于對照溶液的主峰面積（1．0%）。或建議企業在利巴韋林注射液處方中標注氯化鈉的量或不加氯化鈉。

[1] 吳宏富，劉放．反相高效液相色譜法測定利巴韋林注射液的有關物質[J]．藥物鑒定，2009，18（7）：17-8．

[2] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：二部[S]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：353-4．

[3] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：二部[S]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：929．

[4] Directorate for the quality of medicines of the council of Europe(EDQM)．European pharmacopoeia fifth edition[S]．2004:2364-5．

[5] 龍潭，湯芝平，廖洪，等．利巴韋林合成概述[J]．廣州化學，2008，33（3）：56-60．

[6] L．R．施奈德，J．L．格萊吉克．實用高效液相色譜方法的建立[M]．第2版：科學出版社，1998：360-1．

[7] 呂偉，吳介達．紫外光度檢測離子色譜法測定高濃度氯離子樣品中的痕量溴、碘離子[J]．色譜，1990，8（5）：333-5．

[8] 傅厚暾，趙俐敏，張艷麗．離子色譜法分析加碘食鹽中的微量碘[J]．分析化學研究簡報，1999，27（6）：684-6．

[9] 梁翠榮，畢同香，孫吉令．利巴韋林注射液中氯化鈉對有關物質檢查的影響[J]．2000，1（2）：24-5．

Discussion of Related Substance Test Method for Ribavirin Injection in Chinese Pharmacopoeia VolumeⅡ(2010 Edition)

WANG Li,SHEN Lan-hui,CHEN Guo-qing
Wuxi Institute for Food and Drug Control of Jiangsu Province,Wuxi 214028

Objective：To discuss the related substance test method for ribavirin injections．Methods：The related substance test method for ribavirin injections in Chinese Pharmacopoeia VolumeⅡ(2010 Edition)was employed to determine the related substances in ribavirin injections of different manufacturers．Meanwhile,ribavirin injections were subjected to forced degradation studies under different conditions,and the degradation products of ribavirin were detected．Results：The HPLC of this related substance test method could not effectively separate the degradation product of ribavirin from sodium chloride．Conclusion：It is suggested that the peak area of sodium chloride should be deducted in the related substance test for ribavirin injections．In addition,the content of sodium chloride should be described in the prescriptions of ribavirin injections,or sodium chloride should not be included in ribavirin injections．．

Ribavirion;Related substance;Sodium chloride

R927.11

A

1673-7806（2014）06-506-03

王麗（1984-），女，碩士，主管藥師，從事質量檢驗和標準的研究 E-mail:wangli1984121@163.com

2014-04-14

2014-05-07