miRNA—21在三陰性乳腺癌中的表達及臨床意義

[摘要] 目的 探討miRNA-21在三陰性乳腺癌中的表達及其臨床病理特征之間的相關性。方法 選取自2012年1月至2013年6月于我院乳腺外科手術治療并經過病理科免疫組化證實的30例三陰性乳腺癌及其癌旁組織，應用實時定量RT-PCR檢測miRNA-21在三陰性乳腺癌及其癌旁組織中的表達情況，并分析其臨床病理因素的相關性。結果 ①miRNA-21在三陰性乳腺癌中的表達明顯高于其癌旁組織；②miRNA-21的表達增高與TNM分期/淋巴結轉移成正相關。結論 miRNA-21在乳腺浸潤性導管三陰性乳腺癌中呈高表達，可作為乳腺癌診斷及判斷預后的指標。

[關鍵詞] 三陰性乳腺癌；miRNA-21；PCR；預后

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.03.150 文章編號：1004-7484（2014）-03-1337-02

乳腺癌是目前世界范圍內女性最常見的惡性腫瘤，嚴重的威脅著廣大婦女的生命和健康，雖然隨著早期診斷及規(guī)范化的治療使乳腺癌的死亡率有所下降，但在女性病人中仍屬于發(fā)病率和病死最高的惡性腫瘤率，預后并不理想。三陰性乳腺癌（TNBC）是最近幾年才被提出來的，是指雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）以及人類表皮生長因子受體2亞型（HER2）都是陰性的乳腺癌，約占乳腺癌的15%左右，好發(fā)于45歲以下的女性，具有特殊的臨床病理特征，具體表現為病情進展迅速，且易發(fā)生局部復發(fā)和遠處轉移，預后較其他類型乳腺癌差，內分泌治療和抗HER2靶向治療效果不理想。另外三陰性TNBC對內分泌治療及抗HER2靶向治療也不敏感，化療雖然有效，但因其復發(fā)早、進展快、生存期短而成為近年來關注的熱點。近年來，隨著醫(yī)學分子生物學技術的進展，逐漸認識到miRNA在乳腺腫瘤的發(fā)病及演進等多個過程中發(fā)揮著關鍵性的調控作用，作為早期診斷及預后評估的分子指標，已日益得到大家的重視。

資料顯示腫瘤組織大都具有特征性的miRNA表達譜，可以作為癌癥的生物學標志。有文獻報道三陰乳腺癌患者與microRNA-21密切相關.且與乳腺腫瘤的分級、分期、淋巴結轉移等臨床病理指數密切相關。因此對三陰乳腺癌miRNA-21的表達水平及與臨床病理因素的相關性研究，可以為三陰乳腺癌的早期診斷及治療提供依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取河南科技大學第一附屬醫(yī)院2012年1月至2013年6月在乳腺外科行手術治療并經我院病理科免疫組化證實的30例三陰性乳腺癌腫瘤組織及癌旁組織（癌旁組織距離腫瘤組織>2cm）。所選患者均有完整的臨床病理資料，術前均未接受任何治療，年齡范圍23-71歲，平均年齡為40.3歲。所選用的標本均有本科室研究生收集，保證在標本離體30分鐘內存入-80℃冰箱中，以減少組織RNA的降解。

1.2 所用儀器及試劑 超低溫冰箱（日本三洋）、ABI7500型PCR擴增儀（愛普拜斯公司）、RNA濃度檢測儀（美國伯樂儀器公司）、TGL-16高速冷凍離心機（湖南賽特湘儀器廠）、BSC-2生物安全柜（上海上凈凈化設備有限公司），本實驗所用的試劑盒、內參、及miRNA-21引物等均購于QIAGEN公司。

1.3 實驗步驟

1.3.1 RNA提取 從超低溫冰箱中取出所選的乳腺癌及癌旁組織，將標本加入液氮迅速碾成粉末狀，然后按所用的試劑盒說明書提取RNA，用RNA濃度檢測儀測出濃度后立即進行RNA反轉錄。

1.3.2 microRNA-21檢測及反轉錄 先算出RNA樣本需要量，按所購試劑盒說明書的操作步驟分別加入所需試劑，將其充分混勻離心即可檢測。

1.3.3 microRNA-21表達的定量分析 用熒光定量PCR法進行，每個標本各加3個板孔，以便進行對比，陰性對照組用實驗用水替代用于對照。

1.3.4 實驗數據處理及統(tǒng)計分析 熒光定量PCR數據統(tǒng)計分析采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件。microRNA-21計數資料用X2檢驗，（P<0.05）表示有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

microRNA-21在三陰性乳腺癌組織中呈顯著高表達，在相對應的癌旁組織中呈低表達。本實驗結果符合正態(tài)分布，另外microRNA-21在三陰性乳腺癌組織中的表達情況與乳腺腫瘤的分級、分期、淋巴結轉移、腫瘤大小等呈正相關。

3 討 論

microRNA-21是一類由大約22個核苷酸組成的單鏈非編碼小分子RNA，參與多個生理過程的調控，但是由于長度太短，一般難以檢測。大量研究表明microRNA-21作為一種新的腫瘤標志物，可在腫瘤的診斷治療和預后評估等方面發(fā)揮重要作用。通過本實驗我們可以發(fā)現，microRNA-21在乳腺癌組織中的表達水平顯著高于相對應的癌旁組織，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），另外microRNA-21的表達情況與三陰性乳腺癌患者的臨床病理因素呈正相關，具體表現為：①microRNA-21高表達高低與患者發(fā)病年齡呈負相關；②與患者腫瘤大小呈正相關；③與患者腫瘤分期呈正相關；④與淋巴結轉移也有著密切的關系。

相信隨著醫(yī)學分子生物學技術和理論的進展，不久的將來microRNA-21就可以作為鑒別乳腺良惡性腫瘤的新一個生物學指標，并能用于乳腺腫瘤的早期診斷以及判斷乳腺癌的預后，也有望成為乳腺癌的一個新的治療靶點，在未來乳腺腫瘤的診斷和治療中將會有很廣泛的價值及應用前景。

參考文獻

[1] 黃秀芳，邵建永，顏黎栩，等.乳腺癌差異表達的MicroRNA的篩選研究.中山大學學報（醫(yī)學科學版），2009，30：69-73.

[2] 劉晶晶，郝曉甍，劉艷，等.乳腺癌microRNA表達譜的初步研究.天津醫(yī)藥，2009，37：913-916.

[3] 曹志剛，邵志敏.microRNA在乳腺癌診斷及預后判斷中的作用.中國癌癥雜志，2012年第22卷第7期.

[4] Electrochemical based detection of microRNA，mir21 in breast cancer cells.Kilic T，Topkaya SN，Ozkan Ariksoysal D，Ozsoz M，Ballar P，Erac Y，Gozen O.Biosens Bioelectron，2012 Oct，38（1）：195-201.PMID：22776181.

[5] Expression analysis of MiR-21，MiR-205，and MiR-342 in breast cancer in Iran.Savad S，Mehdipour P，Miryounesi M，Shirkoohi R，Fereidooni F，Mansouri F，Modarressi MH.Asian Pac J Cancer Prev，2012，13（3）：873-7.PMID：22631664.

[6] Breast cancer signatures for invasiveness and prognosis defined by deep sequencing of microRNA.Volinia S，Galasso M，Sana ME，Wise TF，Palatini J，Huebner K，Croce CM.Proc Natl Acad Sci U S A，2012 Feb 21，109（8）：3024-9.PMID：22315424.