直接免疫熒光技術(shù)在自身免疫性大皰性皮膚病診斷中的價(jià)值分析

[摘要] 目的 探討直接免疫熒光檢查對(duì)自身免疫性大皰性皮膚病的診斷價(jià)值。方法 對(duì)26例自身免疫性大皰性皮膚病患者的皮損采用鼠抗人免疫球蛋白（IgG，IgM，IgA）及補(bǔ)體C3進(jìn)行直接免疫熒光檢查，對(duì)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 天皰瘡15例和大皰性類(lèi)天皰瘡11例。天皰瘡IgG沉積為100%；IgM和補(bǔ)體C3沉積較少，分別為20%及40%；IgA未見(jiàn)沉積。大皰性類(lèi)天皰瘡IgG和補(bǔ)體C3沉積分別為88%及70%；IgM罕見(jiàn)沉積，IgA未見(jiàn)沉積，免疫熒光具有特征性。結(jié)論 直接免疫熒光檢查對(duì)自身免疫性大皰性皮膚病的診斷、鑒別診斷、預(yù)后判斷具有重要的意義。

[關(guān)鍵詞] 直接免疫熒光檢查；自身免疫性大皰性皮膚病；診斷

文章編號(hào)：1004-7484（2014）-03-1259-02

在自身免疫性疾病中，本來(lái)用于對(duì)付體外侵入者（如感染）的免疫系統(tǒng)，錯(cuò)誤地對(duì)自身的正常組織起作用，引起皮膚損害。筆者探討了直接免疫熒光檢查對(duì)26例自身免疫性大皰性皮膚病患者診斷的臨床資料，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取我院2010年1月到2012年1月收治的2010年1月到2012年1月收治的26例自身免疫性大皰性皮膚病患者。其中男性19例，女性7例。年齡13-71歲，平均年齡49±1.6歲。天皰瘡15例和大皰性類(lèi)天皰瘡11例。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 日本櫻花OCT包埋劑，日本尼康熒光顯微鏡，上海鼎國(guó)生物FITC標(biāo)記的兔抗人IgG、IgA、IgM和補(bǔ)體C3。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 根據(jù)Foster的方法[1]行直接免疫熒光檢查：盡可能取早期完整水皰，OCT包埋，冰凍切片，滴加FITC標(biāo)記的兔抗人IgG、IgA、IgM和補(bǔ)體C3，孵育30min，緩沖液沖洗2次，熒光顯微鏡觀察。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS13.0版，組間計(jì)量數(shù)據(jù)采用（χ〖TX-*3〗±s）檢驗(yàn)，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)及卡方檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

26例自身免疫性大皰性皮膚病患者的DIF染色結(jié)果，見(jiàn)表1。

天皰瘡IgG沉積為100%；IgM和補(bǔ)體C3沉積較少，分別為20%及40%；IgA未見(jiàn)沉積。大皰性類(lèi)天皰瘡IgG和補(bǔ)體C3沉積分別為88%及70%；IgM罕見(jiàn)沉積，IgA未見(jiàn)沉積。

3 討 論

直接免疫熒光法：用以檢查病人的皮膚組織中有無(wú)免疫球蛋白或補(bǔ)體沉積，用特異熒光抗體直接滴加于待檢的標(biāo)本上，由熒光標(biāo)記的抗體與抗原發(fā)生特異結(jié)合。使之呈現(xiàn)熒光，根據(jù)熒光分布和形態(tài)確定抗原部位和性質(zhì)。此法用已知的抗體檢查未知的抗原，但一種標(biāo)記抗體只能查一種抗原，可直接采用病人的病變組織。如：天皰瘡、大皰性類(lèi)天皰瘡等作冰凍切片，熒光染色。此法簡(jiǎn)單、特異。文獻(xiàn)報(bào)道，DIF診斷天皰瘡及大皰性類(lèi)天皰瘡的敏感性分別為88%-100%和82%-100%[3]。

天皰瘡（pemphigus）為一組累及皮膚粘膜的自身免疫性表皮內(nèi)水皰大皰性皮膚病，血清中存在針對(duì)橋粒成分的抗體，與棘細(xì)胞橋粒結(jié)合，引起棘層松懈，產(chǎn)生表皮內(nèi)水皰，表現(xiàn)為薄壁水皰，尼氏征陽(yáng)性，是臨床診斷的重要依據(jù)。水皰常出現(xiàn)在口腔，不久破潰形成疼痛性潰瘍。接著出現(xiàn)更多的水皰和潰瘍，直到整個(gè)口腔粘膜受累。皮膚受累情況相似，水皰首先出現(xiàn)在正常皮膚，然后破裂、留下裸露、結(jié)痂的創(chuàng)面。水皰分布很廣，一旦破裂，很容易感染。其常見(jiàn)類(lèi)型是尋常型天皰瘡，其主要抗原為抗表皮（上皮）中橋粒芯糖蛋白（Dsg3）。大多數(shù)PV的早期病損首先出現(xiàn)在口腔，且口腔出現(xiàn)水皰很快破潰，臨床檢查時(shí)絕大多數(shù)僅見(jiàn)到范圍教大的糜爛面。直接免疫熒光（DIF）技術(shù)是診斷天皰瘡的一種可靠方法，被認(rèn)為是診斷金標(biāo)準(zhǔn)，其特異性強(qiáng)[2]。各型天皰瘡患者的水皰周?chē)筒∽儾课黄つw的棘層細(xì)胞間總是有IgG沉積，而IgM和lgA陽(yáng)性者只為25%。補(bǔ)體成分中C3總是陽(yáng)性。其他成分有C1q和C4，顯示補(bǔ)體活化主要是通過(guò)經(jīng)典途徑。免疫球蛋白和補(bǔ)體沉積位置與病變?cè)l(fā)部位相一致。在只有口腔黏膜損害、血清抗體尚為陰性而又不能做活體組織病理學(xué)檢查的病例，取損害黏膜涂片，進(jìn)行直接免疫熒光檢查，若為陽(yáng)性，有助于本病的診斷。

大皰性類(lèi)天皰瘡（bullous pemphigoid）是一種老年人常見(jiàn)皮膚病，它的特點(diǎn)是皮膚、粘膜上出現(xiàn)深在的水皰，一般的解釋是：大皰性類(lèi)天皰瘡是以在正常皮膚或紅斑基礎(chǔ)上發(fā)生緊張性表皮下大皰、免疫熒光試驗(yàn)可見(jiàn)沿基底膜有管狀或線狀免疫反應(yīng)沉積物（IgG，C3）為特征的一種慢性皰疹性自身免疫病。大多數(shù)患者血清中存在有抗基底膜帶的自身抗體，主要是IgG。免疫電鏡示這種抗體結(jié)合在基底膜帶的透明板。大皰性類(lèi)天皰瘡是由于基底膜帶透明板部位的抗原抗體反應(yīng)，在補(bǔ)體參與下，吸引白細(xì)胞釋放酶，導(dǎo)致表皮下水皰形成，偶爾因應(yīng)用呋塞米治療腎衰等疾病而誘發(fā)。大皰性類(lèi)天皰瘡也是以皮下大皰為特點(diǎn)的自身免疫性皮膚病，主要發(fā)病人群為中老年人，表現(xiàn)為紅斑和緊張的水皰。此類(lèi)患者的血清中可檢測(cè)到IgG基底膜（BMZ）抗體，損傷部位的基底膜可檢測(cè)到線性IgG或C3沉積。大量證據(jù)證明抗BP180IgG抗體與BP發(fā)病相關(guān)，且與病情相平行[4-5]。一項(xiàng)多中心前瞻性隊(duì)列研究認(rèn)為，BP180滴度和DIF陽(yáng)性可作為大皰性類(lèi)天皰瘡疾病復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)指標(biāo)[6]。

綜上所述，直接免疫熒光檢查對(duì)自身免疫性大皰性皮膚病的診斷、鑒別診斷、預(yù)后判斷具有重要的意義。

參考文獻(xiàn)

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