RP—HPLC法測定人血清中利福布汀的濃度

[摘要] 目的 建立測定人血清中利福布汀濃度的方法。方法 采用反相高效液相色譜法，HYPERSIL ODS（200×4.6mm，5.0μl）色譜柱，流動相：乙腈-0.04mol/L KH2PO4（PH2.5）（15：85，v/v）；流速1.0ml/min；檢測波長298nm；柱溫：35℃。結果 利福布汀在0.51-32μg/ml范圍內，峰面積對濃度呈良好的線性關系（r=0.9997），血清中藥物最低檢測濃度為0.2μg/ml（S/N=3），提取回收率為90%，血清中3種濃度回收率分別為104.95%、103.47%、99.38%，日內、日間RSD分別為3.2%、2.7%、1.6%及4.9%、3.6%、1.8%。結論 本法操作簡單、快速，方法靈敏度和準確度較高，適用于利福布汀的血藥濃度及生物利用度的測定。

[關鍵詞] 利福布汀；高效液相色譜法；血藥濃度

文章編號：1004-7484（2014）-03-1669-01

利福布汀（rifabutin）是新一代的利福霉素類抗結核藥，脂溶性高，體內分布良好。利福布汀臨床上應用廣泛，主要用于治療復治結核，耐多藥結核（MDR-TB），HIV/TB雙重感染，鳥-胞內分枝桿菌復合體（MAC）感染及其他非結核分枝桿菌感染等[1-2]。由于其作用廣泛，用藥時間長，個體差異大，因此建立利福布汀血藥濃度檢測的方法，對臨床用藥具有指導意義。本文建立了RP-HPLC色譜法測定血清利福布汀的方法。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 LC-10A高效液相色譜儀：HPLC系統（日本島津LC-10A配有SPD-10A紫外檢測器，CT0-10A柱箱，LC-10AD泵，C-R6A記錄儀），Force-7高速臺式離心機（美國丹法），利福布汀對照品，四川明欣藥業提供（批號：090902）乙腈（色譜純）山東禹王，

對氨基苯甲酸、磷酸二氫鉀、乙酸乙酯均為分析純；水為重蒸餾水。

1.2 血清樣品處理 取血清0.5ml，置1.5ml具塞離心管中，加入內標溶液（25μg/ml對氨基苯甲酸溶液）50μL，搖勻，加入乙酸乙酯液0.5ml，渦旋1min，離心10min（10000r.p.m），取上清液20μl進樣。

1.3 色譜條件 色譜柱LHYPERSIL ODS（200mm×4.6mm，5μl，大連依利特分析儀器有限公司）；流動相：乙腈-0.04mol/L KH2PO4（PH2.5）（15：85，v/v）；流速1.0ml/min；檢測波長298nm；柱溫35℃。靈敏度：0.005AUFS；進樣量20μl。空白血清及樣品色譜圖見圖1。

1.4 標準溶液配制 精密稱取利福布汀對照品并稀釋至刻度，配成161.60μg/ml的標準儲備液。精密吸取標準儲備液一定量，稀釋定容至2個50ml量瓶中，配成濃度為40.40μg/ml、10.10μg/ml標準溶液。

2 結 果

2.1 標準曲線制備 取空白血漿7份，加入利福布汀標準溶液適量，配制成利福布汀濃度為0.51、1.01、2.02、4.04、8.08、16.16、32.32μg/ml的標準血清樣品。按“2.1”項下方法操作，并進行色譜分析。以利福布汀對照品的峰面積與內標峰面積之比（Y）對相應的濃度（C）進行線性回歸，得標準回歸曲線方程Y=0.04625+4.668X，r=0.9997（N=5），線性范圍為0.51-32.32μg/ml。最低檢測限為0.2μg/ml（S/N=3）。

2.2 回收率實驗 取標準血清配制濃度為1.01、8.08、32.32μg/ml的利福布汀血清樣品，按“2.1”項下方法操作，結果見表1。

2.3 精密度考察 取標準血清配制濃度為1.01、8.08、32.32μg/ml的利福布汀血清樣品，按“2.1”項下方法操作，同一天內重復測定5次，同批血樣連續測定數日，結果見表2。

2.4 提取回收率考察 取標準血清配制濃度為1.01、8.08、32.32μg/ml的利福布汀血清樣品，進樣得利福布汀峰面積與內標面積之比A1，配制相同濃度的利福布汀對照品，進樣得利福布汀峰面積與內標面積之比A2，提取回取率=A1/A2×100%，3種樣品平均提取回收率為90%（n=5）。

3 討 論

利福布汀血清樣品濃度測定報道較少，有紫外法用于含量測定[3]，但不適用于血樣；邢貞建等[4]用液相法進行了利福布汀含量測定，但需要氮氣吹干，較為繁瑣；Yau等[5]使用的方法，利福布汀保留時間較長，不適用生物利用度等大樣品測定。而本方法操作簡單、快捷、準確、靈敏度高、重現性好，適用于利福布汀的質量控制和臨床血藥濃度的監測。

參考文獻

[1] 李朝旭，張錦楠，任爽，等.利福霉素衍生物Rifabutin的臨床用藥理研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學，2006，11（1）：1-9.

[2] 高麗，肖和平，胡忠義，等.耐多藥結核分枝桿菌對利福布汀和利福平的交差耐藥性分析[J].中華結核和呼吸雜志，2012，35（5）：333-335.

[3] 田治科，潘一斌.利福布汀膠囊溶出度測定[J].中國醫藥工業雜志，2004，35（10）：1324.

[4] 邢貞建，陶濤，李祥.高效液相色譜法測定利福布汀的含量[J].臨床合理用藥，2011，4（5C）：80-81.

[5] Yau YL，clenn DH，Barbara JC.Determination of rifabutin in human plasma by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection[J].Journal of Chromatography B，1999，728：233-239.