急性淋巴細(xì)胞白血病形態(tài)學(xué)與免疫學(xué)分型結(jié)果分析

摘要：目的探討急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）形態(tài)學(xué)與免疫學(xué)分型的關(guān)系，以提高對白血病的診斷水平。方法對我院2012年1月~2013年3月的24例ALL采用骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、骨髓細(xì)胞化學(xué)染色及免疫分型檢測，比較兩者在ALL分型上的異同。結(jié)果24例ALL患者，按照FAB分型15例L1、7例L2、2例L3，按照WHO免疫分型7例T-ALL、17例B-ALL。結(jié)論免疫學(xué)分型是診斷ALL的必要手段，是對形態(tài)學(xué)分型的補(bǔ)充和修正，它對診斷、治療和判斷預(yù)后具有重要的指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：急性淋巴細(xì)胞白血??；FAB分型；免疫學(xué)分型

Acute Lymphoblastic Leukemia Morphology and Immunophenotyping Results Analysis

LIN Jiang，ZHAO Hua

（Department of Clinical Laboratory，Affiliated Hospital of Luzhou Medical College，Luzhou 646000，Sichuan，China)

Abstract：ObjectiveTo explore the relationship between morphology and immunophenotyping of ALL and improve the level of diagnosis of leukemia. MethodsChoosing 24 cases of ALL in Affiliated Hospital of Luzhou Medical College from 2012 January to 2013 March ，and then taking their bone marrow for Morphology of bone marrow cells， bone marrow cytochemistry and immunophenotype detection .ResultsThere are L1 15 cases，L2 7 cases andL3 2 cases according to FAB classification. There are T-ALL 7 cases andB-ALL 17 cases according to Immunological classification.ConclusionImmunological classification is a necessary means to the diagnosis of ALL ，it cansupplement and correct morphological classification and have Important directive significance for diagnosis， treatment and prognosis of ALL.

Key words：Acute lymphocytic leukemia; FAB type;Immunological classification

急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL）是由于原始及幼稚淋巴細(xì)胞在造血組織異常增殖并可浸潤各組織臟器的一種造血系統(tǒng)惡性克隆性疾病。本病可發(fā)生在任何年齡，但多見于兒童及青壯年，嚴(yán)重威脅兒童的生命。1976年法（F）、美（A）、英（B）協(xié)作組提出FAB分型方案，主要依據(jù)形態(tài)學(xué)特佂來進(jìn)行白血病分類，但由于它存在一定的主觀性和局限性，近幾十年在此基礎(chǔ)上作了不斷的修改，隨著免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展WHO提出了更為全面的MICM（morphological，immunological，cytogenetical，molecular biology）分型方案[1]。細(xì)胞形態(tài)學(xué)靈敏度偏低，診斷準(zhǔn)確率約為60~80%，結(jié)合免疫學(xué)診斷率可提高到90%左右[2]?，F(xiàn)對我院24例ALL患者FAB分型和免疫分型結(jié)果進(jìn)行對比分析，探討細(xì)胞形態(tài)學(xué)與免疫學(xué)分型的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料2012年1月~2013年3月來我院就診的ALL患者24例，其中男14例，女10例，年齡0~40歲，中位年齡10歲。

1.2 儀器與試劑瑞吉染液為本實(shí)驗(yàn)室自制。細(xì)胞過氧化物酶染色（POX）、糖原染色（PAS）試劑盒（上海太陽生物技術(shù)有限公司）。OLYMPUS BX50顯微鏡，髓系細(xì)胞系（CD13、CD33）、B細(xì)胞系（CD10、CD19、CD20）、T細(xì)胞系（CD3、CD5、CD7）、干祖細(xì)胞（CD34、HLA-DR）相關(guān)單克隆抗體及FACSCanto Ⅱ型流式細(xì)胞儀（美國BD公司）。

1.3方法

1.3.1細(xì)胞形態(tài)學(xué)和組織化學(xué)染色采集患者骨髓及外周血標(biāo)本經(jīng)涂片和瑞吉染色后，油鏡下分類計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，按FAB分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型。再對骨髓標(biāo)本進(jìn)行POX、PAS染色，染色步驟及結(jié)果判斷見試劑盒。

1.3.2細(xì)胞免疫分型采集患者骨髓或靜脈血1~2ml，取100ul，分4管分別加10ul抗體CD45-Percp/CD13-FITC/CD33-PE;CD45-Percp/CD10-FITC/CD19-PE/CD20-APC;CD45-Percp/CD3-FITC/CD5-PE/CD7-FITC;CD45-Percp/CD34-FITC/HLA-DR-FITC。避光15~30min，加1~2ml 裂解液10min，PBS洗滌2次，留200ul上機(jī)。檢測步驟及陽性結(jié)果判斷參照儀器及試劑說明書。免疫分型結(jié)果判讀參考《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》第三版[3]。

2結(jié)果

2.1細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型按FAB分型標(biāo)準(zhǔn)，24例ALL患者，其中15例L1、7例L2、2例L3。

2.2組化染色骨髓片中原粒細(xì)胞POX染色可為陽性，但比例<3%；原、幼淋巴細(xì)胞PAS染色多為紅色顆?；驂K狀陽性反應(yīng)，圍繞核周呈環(huán)形排列，胞質(zhì)底色無紅色，少數(shù)急性淋巴細(xì)胞白血病的PAS染色為陰性。

2.3 細(xì)胞免疫分型24例經(jīng)免疫分型診斷為7例T-ALL和17例B-ALL。主要CD抗原表達(dá)見表1。由表可見，B淋巴系相關(guān)抗原以CD19和CD10在ALL中表達(dá)最高（83.3%和66.7%），其次是CD20（41.7%）；而T淋巴系相關(guān)抗原以CD5和CD7表達(dá)較高（均為29.2%）。髓系抗原在ALL中的表達(dá)以CD13和CD33最多見（29.2%和25%）。

2.4細(xì)胞形態(tài)學(xué)免疫學(xué)分型結(jié)果L1中有4例T-ALL 、11例B-ALL， L2中有3例T-ALL、4例B-ALL，L3 2例全為B-ALL。兩者比較見表2 。由表可見，ALL中以B-ALL免疫分型為主，占70.8%（17/24）。B-ALL分型中以L1為主，占64.7%（11/17）；T-ALL分型中也已L1為主，占57.1%（4/7）。

3討論

本文24例ALL患者FAB分型中15例L1、7例L2、2例L3，符合以L1型分布為主、L3型少見的特點(diǎn)。目前認(rèn)為，L1治療反應(yīng)較好、L2治療反應(yīng)相對較差、L3治療緩解率很低[3]。由表1可見，B淋巴系相關(guān)抗原以CD19和CD10在ALL中表達(dá)最高（83.3%和66.7%），而T淋巴系相關(guān)抗原以CD5、CD7表達(dá)較高(均為29.2%)。本文結(jié)果兩種方法分型的關(guān)系如下：15例L1，免疫分型T-ALL 4例、B-ALL 11例；7例L2，免疫分型T-ALL 3例、B-ALL 4例；2例L3免疫分型B-ALL 2例。

WHO分類認(rèn)為形態(tài)學(xué)的L1、L2亞型與免疫表型無明顯相關(guān)性，沒有必要繼續(xù)保留該分類。L3非常少見，與Burkitt淋巴瘤的白血病期相對應(yīng)，應(yīng)診斷為Burkitt淋巴瘤/白血病[3]。由于FAB的形態(tài)學(xué)分型簡便，對臨床有一定的指導(dǎo)意義，目前不少醫(yī)療機(jī)構(gòu)在診斷中保留了該形態(tài)學(xué)分型方案[4]。FAB分類通過骨髓細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞化學(xué)染色， 能確定大多數(shù)ALL的類型。但由于ALL的異質(zhì)性及其細(xì)胞形態(tài)的多樣性， 使臨床上僅憑細(xì)胞形態(tài)診斷ALL十分困難。ALL的診斷與分型正確與否直接關(guān)系到治療方案的選擇及預(yù)后。

免疫分型是繼FAB形態(tài)學(xué)分型后中的一種分型方法， 它除了對形態(tài)學(xué)分型補(bǔ)充外，對于認(rèn)識(shí)白血病原始細(xì)胞表面分化抗原的表達(dá)，及了解它們不同的分化狀態(tài)與臨床療效、預(yù)后之間的關(guān)系都有參考意義。應(yīng)用最早、最多、也最有意義是對ALL的診斷[4]。近年來，隨著單克隆技術(shù)的發(fā)展，免疫學(xué)技術(shù)越來越完善和成熟，它在某種程度上能夠彌補(bǔ)形態(tài)學(xué)的不足。ALL免疫學(xué)分型是應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測定白血病細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的免疫標(biāo)志， 對白血病進(jìn)行免疫學(xué)分型， 可以進(jìn)一步了解細(xì)胞的來源及其分化階段， 從而大大提高急性白血病診斷分型的準(zhǔn)確性， 并為臨床合理治療、判斷預(yù)后提供重要的依據(jù)[5]。

綜上所述，ALL的分型和預(yù)后判定不能簡單以某一種型別作為唯一指標(biāo)，需要綜合評定，用兩種分型方法對臨床的診斷、治療和預(yù)后更具有指導(dǎo)意義[6]。在有條件的情況下按WHO提出的MICM分型將使ALL的診斷分型更科學(xué)、更精確，對于指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療和判斷預(yù)后具有十分重要的意義。

參考文獻(xiàn):

[1]許文榮，王建中.臨床血液學(xué)檢驗(yàn)第五版[M].人民衛(wèi)生出版社. 2012：207-264.

[2]杜秀梅，陳英劍，胡成進(jìn)，等．59例急性白血病形態(tài)學(xué)分型與免疫分型結(jié)果對比分析[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012.09.33（17）：2162-2163.

[3]張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)第三版[M].科學(xué)出版社.2007：116-121.

[4]鐘國梁.血液形態(tài)學(xué)與免疫學(xué)分型在血液病診斷中的互補(bǔ)性[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（4）：291-293.

[5]史小安.急性白血病165例免疫學(xué)分型與FAB分型的關(guān)系探討[J].職業(yè)與健康，2011，27（5）：588-590.

[6]李代渝，趙華，王慶.急淋白血病免疫分型與FAB分型的關(guān)系和臨床意義[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1993，8（3）：167-168.

編輯/申磊