Survivin在口腔鱗狀細胞癌中的表達

摘要：目的 探討Survivin在OSCC中的表達及其意義。方法 采用免疫組織化學方法檢測40例OSCC組織 、15例癌旁組織及15例口腔正常組織的表達情況。結果 Survivin 蛋白在正常口腔黏膜、癌旁組織及OSCC 中的表達率分別為6.66% 、20.00% 、82.50%，三組相比，差異均有統計學意義（P＜0.05），OSCC中Survivin 表達與腫瘤淋巴結轉移相關（P＜0.05），與細胞分化程度無關（P＞0.05）。結論Survivin在OSCC的發生發展過程中可能起著重要作用。

關鍵詞：口腔鱗狀細胞癌；Survivin蛋白；免疫組化

中圖分類號:R739.85文獻標識碼:A

口腔鱗狀細胞癌 (Oral squamous cell carcinoma)發病率占口腔癌瘤的80％[1]，因頭頸部血供豐富，口腔頜面部腫瘤生長迅速，易發生轉移，其5年生存率為45％～50％。本研究采用免疫組織化學方法檢測Survivin的表達情況，以進一步揭示Survivin在口腔鱗狀細胞癌發生、發展的機制。

1資料與方法

1.1一般資料標本選自瀘州醫學院附屬口腔醫院2008～2012年未經任何治療的OSCC患者40例，其中男性22例，女性18例，年齡42~71歲，平均年齡53歲。發生部位：唇頰部9例，舌緣、舌腹及舌根部13例，口底13例，牙齦4例，咽旁1例。40例OSCC患者淋巴結轉移26例，無淋巴結轉移14例，病理分級：高分化19例，中、低分化21例。以唇裂修補術中切除的多余唇組織共15例作為正常對照組織。腫瘤臨床邊界周圍1cm，肉眼觀察大體正常的組織作為癌旁組織，共15例。

1.2主要實驗試劑及主要實驗儀器 Survivin 鼠抗人多克隆抗體(福州邁新生物科技有限公司)；即用型SP試劑盒(福州邁新生物科技有限公司)；光學顯微鏡(OLMPUS，JAPAN)；Image-Pro Plus6.0 (MEDIA CYBERNETICS專業圖像分析系統開發公司)。

1.3 免疫組化染色標本經10％中性甲醛溶液固定后常規石蠟包埋，4um厚連續切片。SP三步法檢測，微波抗原熱修復，DAB顯色，蘇木素復染，飽和碳酸鋰返藍，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4 結果判定Survivin表達的判斷以胞核（部分胞漿棕黃染色）中染成棕黃色為陽性 根據陽性細胞百分率判斷：沒有或僅有弱的染色或陽性細胞率10%的標本記為（-）；陽性細胞 10%～25%記為（+）；陽性細胞 25%～50%記為（+ +）；陽性細胞＞50%記為（+ + + ）；+、 + +、+ + +均視為陽性。

1.5 統計學處理PSS13.0軟件進行分析，采用x2檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2結果

2.1 Survivin在各組織中的表達Survivin陽性顆粒呈棕黃色， 主要定位于腫瘤細胞的胞漿， 胞核亦可見到。15例正常口腔組織標本中，Survivin 陽性表達率為 6.66%； 15 例癌旁組織標本中，Survivin陽性表達率為20.00%；40例OSCC組織標本中，Survivin陽性表達率為82.50%。 本研究顯示： OSCC 組織中Survivin表達陽性率明顯高于癌旁組織和正常組織（P＜0.05）。癌旁組織與正常組織間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2Survivin陽性表達與OSCC臨床病理參數的關系26例伴淋巴結轉移OSCC組織標本中，25例標本Survivin陽性表達，陽性率為96.15% （25/26），14例不伴淋巴結轉移OSCC 組織標本中，8例標本Survivin陽性表達，陽性率為57.14% （8/14），有淋巴結轉移組Survivin 在OSCC的表達高于無淋巴結轉移組(P< 0.05) 。16例高分化OSCC 組織標本中，12例標本Survivin陽性表達， 陽性率為75.00%（12/16）。24例中、 低分化OSCC組織標本中，16例Survivin陽性表達， 其陽性率為87.50%（21/24），Survivin 在OSCC的表達與腫瘤的病理學分級無明顯關系(P> 0.05) 。

3 討論

腫瘤的發生、發展是一個多階段、多步驟的漸進演化過程。由于細胞增殖與凋亡的正常平衡失控，細胞死亡減少，增殖增加，當增殖速度超過死亡時，則形成了腫瘤。 Survivin是凋亡抑制蛋白家族中新近被發現的成員，是迄今發現最強的凋亡抑制因子。Survivin蛋白主要通過以下兩種途徑抑制凋亡: ①Survivin可通過細胞周期依賴激酶調節凋亡， 通過促進CDK4釋放p21而抑制凋亡; ②Survivin可與激活的Caspase-3和Caspase-7結合，阻止由Caspase激活劑或凋亡誘導劑誘導的細胞DEVD-cleaving自殺酶的累積[2]。

Survivin 表達于胚胎、胎兒組織，但不表達或極低表達于終末分化的成人組織中（除胸腺 生殖腺外），而在絕大多數惡性腫瘤組織中均有表達，如胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、神經母細胞瘤、食管癌、直腸癌、子宮癌、卵巢癌、胰腺癌、黑色素瘤、軟組織肉瘤、白血病中等[3]。本實驗中口腔正常組織也存有 Survivin極低表達情況。并且Survivin在口腔頜面部腫瘤也有異常表達。例如腺樣囊性癌、口腔黏膜下纖維性變及涎腺腫瘤等。

OSCC的發生發展是一個復雜的過程，必然涉及到變異的積累和細胞正常周期的紊亂。Survivin的異常表達與OSCC的發生發展、淋巴轉移、惡性演變、預后等密切相關。Tanaka等[4]采用免疫組化方法檢測口腔正常黏膜、白斑(OLK)和OSCC中Survivin的表達發現：正常黏膜中未見Survivin表達；在異常增生的白斑(OLK) 組中，隨異常增生程度的增加，Survivin的表達逐漸增強；OSCC中Survivin表達隨細胞分化程度降低而表達增強。本研究中，Survivin 蛋白在正常口腔黏膜、癌旁組織及OSCC中的表達率分別為6.66% 、20.00% 、82.50%，可以推測出，Survivin表達后可能抑制正常細胞的凋亡，導致腫瘤細胞的出現，Survivin的表達失調可能是口腔鱗癌發生的機制之一，對Survivin表達的監測可能有助于OSCC的早期診斷。

本研究中Survivin在OSCC中表達率高，而在癌旁組織和正常組織中表達率低的特點。提示Survivin可能發生在OSCC的早期，Survivin在OSCC組織中的表達可能抑制了腫瘤細胞的凋亡，從而擾亂了腫瘤細胞的凋亡途徑。Survivin基因可能成為腫瘤基因治療的一個較為理想的靶點。可以通過抑制Survivin基因的表達，從而抑制腫瘤細胞的生長。劉世鋒等[5]采用小干擾RNA技術，通過干擾Survivin基因的表達來治療口腔鱗狀細胞癌，MTT法測定細胞活性發現，干擾Survivin基因可以降低口腔鱗狀細胞癌的細胞活性；tunnel和流式細胞術測定結果可見，干擾Survivin基因可以誘導癌細胞凋亡。

本研究表明：有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者(P <0.05) ，表明Survivin表達與OSCC淋巴結轉移有關， 提示Survivin可促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。 Survivin在OSCC組織、 癌旁組織、 正常口腔黏膜組織中表達逐漸降低，OSCC組織中Survivin表達陽性率明顯高于癌旁組織和正常組織（P＜0.05）。干擾Survivin可能是治療OSCC極有潛力的腫瘤標志和治療靶點。

參考文獻:

[1]張志愿，邱蔚六，孫堅，等.口腔頜面外科學[M].7版.北京:人民衛生出版社，2012：324.

[2] Suil，Dong Y ，OhnoM ，etal . Survivin expression and its correlation with cell

proliferation and prognosis in epithelial ovarian tumors[J].Int J Oncol ，2002， 21 ( 2) : 315-320.

[3]Pennati M， Folini M， Zaffaroni N. Targeting survivin in cancer therapy：Fulfilled promises and open questions[J].Carcinogenesis， 2007， 28（6）:1133-1139.

[4]Tanaka C ，Uzawa K ，Shibahara T ，et al.Expression of aninhibitor ofapoptosis，Survivin，in oral carcinogenesis [J] .J Dent Res，2003，82( 8 ):607-611.

[5]劉世鋒，梁新華，包崇云.采用RNA干擾技術沉默Survivin基因對口腔鱗狀細胞癌細胞凋亡的影響[J].華西口腔醫學雜志，2013，31( 4 ):345-352.