MiR—34a在鼻咽癌中的表達及其臨床意義

摘要：目的 研究miR-34a在鼻咽癌組織中的表達并探討其臨床意義。方法 收集鼻咽癌活檢組織標本30例，15例正常及慢性炎癥鼻咽粘膜活檢組織作為對照，采用qRT-PCR檢測鼻咽癌組織及對照組織中miR-34a的表達情況，分析miR-34a表達水平與鼻咽癌臨床病理參數之間的關系。結果 與對照鼻咽粘膜組織相比，miR-34a在鼻咽癌組織表達普遍下調。鼻咽癌組織中miR-34a平均表達量明顯低于對照鼻咽上皮組織，差異具有統計學意義（P<0.05），對照鼻咽粘膜組織中miR-34a平均表達量約為鼻咽癌的3.7倍。臨床Ⅲ/Ⅳ鼻咽癌miR-34a表達水平明顯低于臨床Ⅰ/Ⅱ鼻咽癌組織 （P<0.05）；有轉移的鼻咽癌組織顯著低于無淋巴結轉移的鼻咽癌（P<0.05）。結論 miR-34a與鼻咽癌的發生、臨床進展及預后密切相關，它可能是鼻咽癌新的潛在的治療靶點及診斷預后分子標志物。

關鍵詞：鼻咽癌；miR-34a；臨床進展

研究顯示，miR-34a在結直腸癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、膠質瘤等腫瘤組織和細胞中表達下調，且過表達miR-34a能抑制多種腫瘤的生長、侵襲與轉移，在腫瘤的發生發展發揮重要作用[1-3]。這些結果均表明miR-34a在一些腫瘤中是一個具有抑瘤功能的miRNA。但目前miR-34a在鼻咽癌的生物學功能并不清楚。本研究通過qRT-PCR技術檢測miR-34a在鼻咽癌組織與對照鼻咽粘膜組織（包括正常及炎癥粘膜組織）中表達情況，并探討miR-34a與鼻咽癌臨床分期、轉移等臨床參數之間的關系，從而為進一步揭示鼻咽癌發病機理和尋找新的診斷及預后分子標志物提供實驗依據。

1資料與方法

1.1標本收集 標本均取自于南華大學附屬二醫院醫院2006年7月～2013年10月鼻咽癌患者和正常及慢性炎癥鼻咽粘膜（對照）活檢組織標本，組織立即放于液氮或-80°冰箱保存。所有組織標本活檢后均經病理學診斷確認。其中鼻咽癌組織30例，正常及慢性鼻咽炎粘膜組織15例。

1.2 RNA提取、逆轉錄 常規Trizol試劑（Invitrogen公司）抽提總RNA，DEPC水溶解沉淀。紫外分光光度計測定RNA提取液的A260及A280吸光度值，檢測RNA純度和濃度。

逆轉錄反應按轉錄miRNA逆轉錄試劑盒（吉瑪生物公司）說明書進行。

1.3定量PCR檢測 采用SYBR方法，應用Biorad公司的定量PCR儀 IQ5進行定量PCR反應。miR-34a的相對表達量通過公式2-△Ct計算，其中， Ct=miR-34a平均Ct值-U6平均Ct值。

1.4統計學分析 采用統計軟件SPSS 16.0進行統計學分析，結果以x±s表示，兩組間比較采用t檢驗。P<0.05被認為差異具有統計學意義。

2結果

2.1鼻咽癌組織中miR-34a表達明顯下調 運用qRT-PCR檢測miR-34a鼻咽癌組織及對照鼻咽粘膜組織中的表達情況，結果顯示，與對照鼻咽上皮組織相比，miR-34a在鼻咽癌組織表達普遍下調。鼻咽癌組織中miR-34a平均表達量明顯低于對照鼻咽粘膜組織，分別為（1.07±0.13）、（3.81±0.52），差異具有統計學意義（P<0.01），對照鼻咽粘膜組織miR-34a平均表達量約為鼻咽癌組織中的3.7倍。

2.2 miR-34a表達水平與鼻咽癌臨床病理參數之間的關系 統計分析顯示，臨床Ⅲ/Ⅳ鼻咽癌miR-34a表達水平明顯低于臨床Ⅰ/Ⅱ鼻咽癌組織，差異有統計學意義（P<0.05）；有轉移的鼻咽癌組織明顯低于無淋巴結轉移的鼻咽癌 （P<0.05），表明miR-34a表達與鼻咽癌臨床進展及轉移呈負相關；此外，miR-34a的表達水平與鼻咽癌患者年齡及性別無關，差異無統計學意義。

3討論

近年來，miRNA成為分子生物學研究的焦點。miRNA是一類含量豐富且高度保守的非編碼內源性小RNA分子，通過與靶基因mRNA的3′非編碼區完全或不完全結合，抑制蛋白的合成或者誘導靶基因的降解，從而在轉錄后水平對靶基因的表達進行負性調控[4]。miRNA 調控細胞分裂、分化與調亡等重要生物學過程，并且，高通量miRNA芯片檢測證實其在惡性腫瘤中表達異常。研究表明，miRNA參與鼻咽癌的發生發展，起著癌基因或抑癌基因樣作用，與鼻咽癌診斷、預后和療效評估相關。

關于miR-34a已有很多研究，miR-34a可通過抑制CD44表達而抑制前列腺癌和前列腺癌干細胞的再生和轉移，從而起到治療前列腺癌的作用[5]。miR-34a可通過抑制c-Myc的表達從而抑制腎細胞癌的增殖[6]。Wu等報道miR-34a可通過抑制Fra-1的表達而抑制結腸癌的遷移和侵襲[1]。綜合這些研究可以看出miR-34a具有很強的抑癌效果。本文運用qRT-PCR首次檢測miR-34a在鼻咽癌組織中的表達情況，并分析其臨床意義。結果顯示與對照鼻咽上皮組織相比，miR-34a在鼻咽癌組織表達明顯下調（P<0.01）；miR-34a隨著鼻咽癌的臨床分期進展而表達降低，且有淋巴結轉移的鼻咽癌表達明顯低于無淋巴結轉移的鼻咽癌（P<0.05），表明miR-34a表達與鼻咽癌臨床進展及轉移呈負相關。

我們的結果顯示miR-34a在鼻咽癌與對照鼻咽上皮組織存在表達差異，具其表達水平與患者臨床進展及預后負相關，這表明miR-34a可能作為抑癌基因參與鼻咽癌的發生發展，并且可能成為鼻咽癌診斷和預后判斷新一代腫瘤分子標志物及鼻咽癌治療靶點。

參考文獻：

[1]Wu J， Wu G， Lv L， et al. MicroRNA-34a inhibits migration and invasion of gastric cancer cells via targeting to Fra-1 [J]. Carcinogenesis. 2012，33（3）：519-28.

[2]Liu C， Kelnar K， Liu B， et al. The microRNA miR-34a inhibits prostate cancer stem cells and metastasis by directly repressing CD44 [J]. Nat Med. 2011，17（2）：211-5.

[3]Yang P， Li QJ， Feng Y， et al. TGF-β-miR-34a-CCL22 signaling-induced Treg cell recruitment promotes venous metastases of HBV-positive hepatocellular carcinoma [J]. Cancer Cell. 2012，22（3）：291-303.

[4]Tang H， Deng M， Tang Y， et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression [J].Clin Cancer Res. 2013， 19（20）：5602-5612.

[5]Liu C， Kelnar K， Liu B， et al. The microRNA miR-34a inhibits prostate cancer stem cells and metastasis by directly repressing CD44 [J]. Nat Med. 2011，17（2）：211-5.

[6]Yang P， Li QJ， Feng Y， et al. TGF-β-miR-34a-CCL22 signaling-induced Treg cell recruitment promotes venous metastases of HBV-positive hepatocellular carcinoma [J]. Cancer Cell. 2012，22（3）：291-303.

編輯/申磊