克勞斯法測定纖維蛋白原的影響因素分析

摘要：目的 明確克勞斯法測定纖維蛋白原的影響因素有哪些。方法 分為觀察組和對照組，對90例（其中30例正常人血漿、24例正常參比血漿、36例異質(zhì)血漿）不同類型的血漿進行克勞斯法測定纖維蛋白原的實驗分析。結果 觀察組測定纖維蛋白原結果可靠，對照組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計學意義。結論 影響克勞斯法測定纖維蛋白原的因素有試劑因素、標本因素以及實驗操作因素。

關鍵詞：克勞斯法；纖維蛋白原；影響因素

克勞斯法測定纖維蛋白原法屬于功能型方法，具體是指將足量的凝血酶加到稀釋的血漿中去，根據(jù)其與纖維蛋白原的時間相關度得出相應的纖維蛋白原的含量與功能的結論，是目前世界各國醫(yī)學界測定纖維蛋白原的主要方法之一[1]?？藙谒狗y定纖維蛋白原結果的影響因素有很多，本文具體明確克勞斯法測定纖維蛋白原的影響因素為試劑、標本以及操作過程，同時給出關于與克勞斯法測定纖維蛋白原影響因素相關注意事項和有效結論。

1 資料與方法

1.1血漿 分別選取正常人血漿、異常血漿以及正常參比血漿。其中正常血漿取自獻血員和健康體檢人員，異常血漿取自取自臨床心血管疾病、血栓病、糖尿病、惡性腫瘤和術后抗凝治療的患者，正常參比血漿取自取多個獻血員抗凝血，按上述方法制備乏血小板血漿。見表1。

1.2方法 運用克勞斯法測定纖維蛋白原，文中所涉及的合格試劑貯存工具為Fibri-prest試劑盒，購自Diagnostica Stago公司 。數(shù)據(jù)分的統(tǒng)計學方法采用Excel 97統(tǒng)計學軟件。

1.2.1對克勞斯法測定纖維蛋白原的試劑影響因素分析 將正常人血漿分為觀察組15例和對照組15例進行不同試劑影響因素的分析，其中觀察組嚴格遵守檢測儀器的相關要求，嚴格選定試劑產(chǎn)品，杜絕試劑使用中出現(xiàn)的錯誤；對照組相對實驗程序不嚴謹。

1.2.2克勞斯法測定纖維蛋白原的標本因素 將正常參比血漿分為觀察組12例和對照組12例進行標本收集的不同實驗，在收集、運送和貯藏方面進行分析。見表2。

1.2.3克勞斯法測定纖維蛋白原的實驗操作因素 將異質(zhì)血漿分為觀察組18例和對照組18例，其中觀察組要求血漿預熱時間≤10min，試劑預熱時間≤30min，對照組血漿預熱時間為15min試劑預熱時間為35min。

2 結果

結果顯示，無論是在進行試劑影響因素實驗、標本影響因素實驗還是實驗操作影響因素實驗，對照組的實驗數(shù)據(jù)對于克勞斯法測定纖維蛋白原均沒有統(tǒng)計學意義，觀察組中共計45例血漿的測量結果都在（2.95±0.41）（這個范圍是克勞斯法測定纖維蛋白原的標準數(shù)據(jù)值）范圍內(nèi)。

3 討論

3.1克勞斯法測定纖維蛋白原的試劑因素 運用克勞斯法測定纖維蛋白原要求一方面注重試劑盒的質(zhì)量，另一方面在使用過程中嚴謹細致。試劑質(zhì)量的好壞是檢測結果是否準確的最重要影響條件之一，這就要求實驗者具備專業(yè)的鑒別試劑盒以及試劑的能力。具體可從3個方面明確試劑以及試劑盒鑒別中易出現(xiàn)的問題：①盡管檢測儀器有所不同，測定者還是進行相同的相應試劑選擇；②纖維蛋白原的標準品定值不準確；③試劑產(chǎn)品的選擇不慎重。在克勞斯法測定纖維蛋白原的過程中，試劑使用的細節(jié)決定整個測定結果的準確程度，這里具體明確一下在纖維蛋白原的測定過程試劑使用中最容易出現(xiàn)的9點錯誤：①進行試劑溶解時沒有嚴格按照試劑盒上的說明要求；②在進行試劑復溶時溶液量的劑量把握不得當；③正常情況下進行纖維蛋白原檢測時，要求要在使用前10min就對試劑進行溶解，很多實驗人員未遵循此要求；④沒有對溶解好的試劑進行分開裝放，造成試劑的多次使用，污染嚴重；⑤纖維蛋白原的復溶試劑儲存條件不合理，導致試劑失效；⑥試劑緩沖液的PH值不合理；⑦使用上次實驗中沒有用完的試劑；⑧混用不同成分的同種命名試劑；⑨使用過期的試劑。

因此測定者在進行試劑盒方面的鑒定和選擇時，一方面要根據(jù)檢測儀器的不同，進行不同的相應試劑選擇，同時還要保證纖維蛋白原的標準品定值的準確性；另一方面在進行試劑盒選擇的過程中要盡量選擇知名度高的試劑盒，要求試劑產(chǎn)品有國家的正式批號，并且經(jīng)過質(zhì)量檢測認證。并注意試劑的生產(chǎn)日期、應用范圍等多個因素。

3.2克勞斯法測定纖維蛋白原的標本因素 克勞斯法測定纖維蛋白的過程中無論是標本的收集、運送還是貯存，都要嚴格遵循相關的要求，做到每一步都科學有序，嚴謹沒有漏洞[2]。具體說來，克勞斯法測定纖維蛋白原的標本收集要做到以下幾點：①采血的器具要符合規(guī)定，不能應用玻璃注射器或者是玻璃試管，同時要求采血的器具不能夠含有去污劑、清洗劑等，嚴禁采血器具受到污染；②采血部位不能夠扎束的過緊或者是時間過長，另外在進行進針和抽血的過程中要保證速度勻速；③在進行抽血時，要求患者的情緒穩(wěn)定、平靜；④在測定過程中要采用規(guī)定的抗凝劑，同時抗凝劑的加量要適當有度，建議應用枸櫞酸鈉抗凝劑；⑤血液與抗凝劑要遵循一定的比例，最佳比例為血液與抗凝劑的比例為1：9；⑥要求取血量準確，取血量注入抗凝管的劑量合理。

在克勞斯法測定纖維蛋白原的標本運送方面要做到以下幾點：①要求血液與抗凝劑充分混合，只有這樣才能夠避免溶血、黃疸的現(xiàn)象發(fā)生，影響試驗的準確性；②要求在去血厚要盡快分離標本，并及時制成乏血血小板漿，同時還要及時將吸出的血漿放入相應器皿中，保證PH值的不發(fā)生變化；③從抽血到檢測的整個時間間斷不能超過2h，并且在標本的運送過程中不能夠有劇烈的震動或者是日光的直射。克勞斯法測定纖維蛋白原的貯藏方面也有一定的要求，其中最重要的2點：①要求將血漿標本冷凍保存，冷凍的時間要快，同時要注意融化的溫度控制在35°左右，一經(jīng)融化要立刻取出，嚴禁反復凍融；②纖維蛋白原具有異質(zhì)性，同時纖維蛋白原中存在FDPs等抗凝物，這些抗凝物在標本貯存的過程中會影響貯藏結果。

因此建議測定者能夠在測定的過程中嚴格遵循標本的收集步驟，在運送與貯存的過程中嚴謹細致，最終達到保證測定結果真實有效的目的[3]。

3.3克勞斯法測定纖維蛋白原的實驗操作因素 溫度、時間、試劑量，還是規(guī)范與否，都是實驗操作的重要影響因素，本部分系統(tǒng)介紹實驗操作中的具體注意事項。克勞斯法測定纖維蛋白原的整個實驗操作流程，要從以下幾點進行完善和改進：①首先要嚴格遵循實驗中所應用的試劑盒和儀器的說明說進行相應的操作，嚴格規(guī)范實驗者的每一個細節(jié)動作和環(huán)節(jié)，保證實驗成功的大前提；②實驗中標本與試劑的溫度方面有著嚴格的要求，具體按照相應實驗的要求來確定，但切記不能過高或者是過低；③血漿與試劑的預熱時間方面，要求血漿預熱時間≤10min，試劑預熱時間≤30min；④加熱試劑的同時要進行計時，要保證計時的科學和準確；⑤實驗對試劑順序有著嚴格的要求，要求實驗試劑加入順序有序；⑥實驗對血漿稀釋同樣有著相應的要求，要求血漿稀釋適度合理；⑦纖維蛋白原的含量高低，決定了整個實驗過程中血漿的凝固時間，通常在手工法的測定過程中，測定終點的明確由于血漿凝固時間的不確定而難以確定，這就要求測定者把握好實驗的測定終點；⑧要根據(jù)儀器的靈敏度和相關的操作要求，進行標準曲線繪制的多點選擇；⑨要定時檢查實驗條件，當實驗條件有一定的變動或者是改變時，要進行標準曲線的及時更改，重新繪制標準曲線。實驗操作環(huán)節(jié)是整個測定過程中的最核心部分，因此測定者在整個實驗操作的環(huán)節(jié)必須做到細致并且有序，保證準確無誤。

在整個測定的過程中，如果說試劑因素是測定過程的前提保障，那么標本的收集、運送和貯藏則是整個測定過程中的關鍵環(huán)節(jié)，而實驗操作過程無疑就是在前兩者基礎上整個測定過程的核心部分。需要我們掌握住克勞斯測定法中的每一個影響因素，注重細節(jié)，合理測定，掌控住整個測定流程。

綜上所述，克勞斯法測定纖維蛋白原是一個較為有效和前景看好的功能法。希望通過本文能夠使更多的相關方面工作者了解到克勞斯測定纖維蛋白原法，以及其在整個測定過程中的相關影響因素，并具體掌握在進行纖維蛋白測定過程中應注意的一些細小環(huán)節(jié)和注意事項，最終起到良好的指引效果，達到科學合理測定纖維蛋白原的目的。

參考文獻：

[1]張文.克勞斯法測定纖維蛋白原的常見誤差分析[J].中國誤診學雜志，2004，3：458-459.

[2]劉蕊.用國產(chǎn)凝血酶測定纖維蛋白原方法與評價[J].2000，18（1）：28-29.

[3]王希平.兩種纖維蛋白原的測定方法比較[J].實用醫(yī)技雜，2003，7（7）：750-751.

編輯/哈濤