頭孢西丁與苯唑西林檢測耐甲氧西林金葡菌的比較

摘要：目的 比較頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林金葡菌（ MRSA） 的可靠性。方法 分別采用頭孢西丁與苯唑西林紙片擴散法檢測臨床分離的132種金黃色葡萄菌株，采用mecA 基因方法為檢測標準，比較兩種方法的準確性。結果 頭孢西丁紙片擴散法與mecA基因檢測高度一致為100%，苯唑西林檢測的敏感性和特異性分別明顯低于頭孢西丁。結論 頭孢西丁紙片擴散法是篩選和確認MRSA 的一種可靠的試驗方法。

關鍵詞：耐甲氧西林金葡菌；頭孢西丁；紙片擴散法

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（ meticillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA） 是醫院感染和社區感染的主要病原菌， 其有效的治療和預防有賴于快速準確的實驗診斷，本研究以mecA基因為標準，對頭孢西丁和苯唑西林紙片擴散法檢測MRSA的結果進行了比較。

1資料與方法

1.1一般資料 129株臨床分離金黃色葡萄球菌株，耐甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌ATCC25923，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ATCC25923，30 μg頭孢西丁藥敏紙片、1 μg苯唑西林藥敏紙片、M-H瓊脂，mecA基因擴增引物：引物序列上游F：5-' AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC-3'引物序列下游R：5-' AGTTCTGCAGTACCGGATTT GC-3'。

1.2方法

1.2.1紙片擴散法 將臨床分離得到的金黃色葡萄球菌取經35℃孵育18～24 h的單個菌落，用無菌生理鹽水配制成0.5麥氏單位的菌懸液，分別涂布含有4% NaCl 的M-H 瓊脂表面上，將苯唑西林和頭孢西丁藥敏紙片放在瓊脂表面，35℃孵育24 h 后閱讀結果，執行NCCLS 2004[1]最新的標準：頭孢西丁紙片擴散法抑菌圈直徑≤19 mm為耐藥、≥20 mm為敏感；苯唑西林紙片擴散法抑菌圈直徑≤10 mm為耐藥、11～12 mm為中介、≥13 mm為敏感。

1.2.2 PCR反應檢測mecA基因 ①制備DNA模板 挑取平板上的的單個菌落，混懸于0.5 mL pH 8.0的T E中煮沸10 min，以7 000 r/min 的速度離心10 min后取上清液。②PCR擴增PCR反應總體積為50 μL其中引物1 μL，PCR 緩沖液5 μL，dNTP（200 μmol/μL） 1 μL，Mg2+0.5 mmol/L，Taq酶2.5 U，DNA 模板2 μL，雙蒸水35.5 μL。擴增條件為94℃初變性4 min，然后94℃變性30 s，退火溫度為52℃，時間為30 s，72℃延伸45 s，進行30個循環最后延伸10 min，PCR 產物在0.7% 的瓊脂糖凝膠中進行電泳后，用凝膠成像系統觀察結果[2]。

2結果

129株金黃色葡萄球菌中，mecA基因陽性有85株，陰性有47株。以mecA 基因檢測為標準方法，頭孢西丁紙片擴散法的敏感性和特異性為100%和100%，苯唑西林紙片擴散法的敏感性和特異性為98.4%和95.7%。頭孢西丁紙片擴散法檢測MRSA 的敏感性和特異性明顯高于苯唑西林紙片擴散法。

3討論

MRSA產生的一個原因是金黃色葡萄球菌獲得了mecA基因，能夠編碼產生低親和力的青霉素結合蛋白PBP2a[3]mecA或PBP2a因此被認為是檢測MRSA的金標準。

2004年NCCLS增加了一種檢測和確認MRSA的新方法即頭孢西丁紙片擴散法，根據這一標準，我們對臨床分離的132株金黃色葡萄球菌進行了分析發現，有3株mecA陽性的菌株，對苯唑西林表現為敏感，證明苯唑西林紙片法較難檢側出耐藥表現不均一的菌株，而使用30 μg頭抱西丁紙片法檢測甲氧西林金黃色葡萄球菌，其特異性和敏感性均達到100%，且敏感株抑菌圈直徑較大，易于判斷，研究推側可能是頭孢西丁比苯唑西林能更好誘導mecA 基因的表達。

頭孢西丁紙片擴散法操作簡便，敏感性和特異性高，結果與mecA 基因檢測一致，可作為臨床確證MRSA的可靠方法。

參考文獻：

[1]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S].Fourteenth inform ational supplement. NCCLS documentM100- S14.Wayne，Pennsylvania：NCCLS，2004.1-159.

[2]Louie L， Goodfellow J， Mathieu P， et al. Rapid detection of methicillin-resistant Staphy lococci from blood culture bottles by using a multiplex PCR assay[J].Clin Microbiol，2002，40：2786-2790.

[3]Annie F， Bernadette G， Philippe HL， et al. Evaluation of three techniques for detection of low-level methicillin-resistant Staphy lococcus aureus （MRSA）：a diffusion method with cefox itin and moxalactam，the Vitek2 system，and the MRSA-screen latex agglutinat iontest[J].J Clin Microbiol，2002，40：2766-2771.編輯/肖慧