VEGF/VEGFR2，Dll4/Notch1信號通路在基底細胞癌和脂溢性角化病中的表達及關(guān)系

摘要：目的 比較VEGF/VEGFR2，Dll4/Notch1信號通路在基底細胞癌和脂溢性角化病中的表達及關(guān)系。方法 采用免疫組化方法，對60例基底細胞癌和31例脂溢性角化病的石蠟包埋標本進行VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1水平的檢測，并進行相關(guān)性分析。結(jié)果 VEGF、VEGFR2在基底細胞癌中的陽性率分別為67.5%、43.2%，高于脂溢性角化病的37.4%、15.2%，也高于正常皮膚組織33.5%、13.1%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Dll4、Notch1在基底細胞癌中的陽性率分別為12.6%、11.9%，低于脂溢性角化病的19.3%、21.8%，也低于正常皮膚組織21.6%、24.7%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。VEGF、VEGFR2在脂溢性角化病的陽性率分別為37.4%、15.2%，高于正常皮膚組織33.5%、13.1%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Dll4、Notch1脂溢性角化病的陽性率分別為19.3%、21.8%，低于正常皮膚組織21.6%、24.7%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1與上皮源性皮膚腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后有關(guān)。

關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮生長因子；血管內(nèi)皮生長因子受體2；Dll4；Notch1；腫瘤，基底細胞；鮑溫病

基底細胞癌（basal cell carainoma，BCC）、脂溢性角化病（seborrheic keratoses，SK）分屬基底細胞癌和癌前病變。脂溢性角化病的某些生物行為與上皮細胞癌變有相似之處，但其癌變率及其轉(zhuǎn)移率均較低。基底細胞癌血管內(nèi)皮生長因子/血管內(nèi)皮生長因子受體2（vascular endothelial growth factor ，VEGF/ vascular endothelial growth factor recepter2，VEGFR2）、Dll4/Notch1（Delta-like ligand 4， Dll4/ Notch1）信號通路是調(diào)控血管生成和功能成熟的重要信號通路，與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移、預(yù)后均有重要聯(lián)系，研究基底細胞癌與脂溢性角化病組織中VEGF/VEGFR2，Dll4/Notch1信號通路的表達有助于進一步認識血管生成信號通路在上皮源性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用以及對評估早期皮膚病變的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸有臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 60例基底細胞癌（BCC組）、31例脂溢性角化病（BD組）10例正常皮膚組（NS組）的石蠟包埋標本均來自齊魯醫(yī)院病理科，所有標本均為手術(shù)切除獲得，術(shù)前未經(jīng)放療和化療，并且均經(jīng)過臨床和病理確診。各組標本的臨床資料如下：①基底細胞癌組（BCC組）60例，頭面部42例，軀干和四肢18例；②脂溢性角化病組（SK組）31例，頭面部14例，軀干和四肢17例；③正常皮膚組（NS組）10例，頭面部7例，軀干和四肢3例。

1.2試劑 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1兔抗人一抗VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1及顯色劑均購自武漢博士德公司。

1.3方法 采用免疫組織化學(xué)SP法.玻片預(yù)先經(jīng)防脫片處理，組織經(jīng)10%甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，切片經(jīng)常規(guī)脫蠟水化后，3%H2O2消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，檸檬酸熱修復(fù)后，分別加入一抗，工作濃度為 1：500； 4℃過夜，DAB顯色，顯微鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判斷以胞質(zhì)或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，每例組織隨機選取5個高倍視野（×400倍）計數(shù)陽性細胞并計算陽性率。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以（x±s）表示，P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1在基底細胞癌、脂溢性角化病與正常皮膚中表達比較（表1）：VEGF、VEGFR2在基底細胞癌中的陽性率分別為67.5%、43.2%，在脂溢性角化病中的陽性率37.4%、15.2%，高于正常皮膚組織20.5%、13.1%、差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Dll4、Notch1在基底細胞癌中的陽性率為12.6%、11.9%，在脂溢性角化病中的陽性率19.3%、21.8%，低于正常皮膚組織21.6%、24.7%，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1在基底細胞癌和脂溢性角化病中的蛋白表達（表2）：用顯微鏡圖像采集系統(tǒng)采集圖像，并用Leica Qwin V3圖像分析軟件進行灰度值的半定量分析。利用雙盲法測定VEGF、VEGFR2、Dll4及Notch1染色強度，每張切片隨機選取5個視野（×200）進行光學(xué)灰度值分析，數(shù)值在0～255之間，取其平均值即為該片的灰度值，灰度值越低，蛋白表達越高。

3 討論

VEGF是體內(nèi)最強，特異性最高的一種血管生長因子，與實體瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)特性密切相關(guān)[1]。VEGF與基底細胞癌的血管生成正相關(guān)[2]，在基底細胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用[3]。

Dll4-Notch1信號通路在多種皮膚腫瘤中均有異常表達，對部分皮膚腫瘤有抑制作用[4]。在Harrison等[5]在多種主要的人類腫瘤中都發(fā)現(xiàn)了Notch信號的活化。

基底細胞癌（BCC）是一種最為常見的皮膚惡性腫瘤。Panelos等[6]證實，Notch1在基底細胞癌中明顯表達，在皮膚鱗狀細胞癌中，暴露部位Notch1表達下降，而生殖器部位侵襲性鱗狀細胞癌Notch1表達明顯。

脂溢性角化病是一種常見老年皮膚病變，是由于局部的角朊細胞成熟受阻所引起的一種良性表皮內(nèi)腫瘤，其發(fā)病發(fā)病率與年齡高度相關(guān)。SK發(fā)生惡性腫瘤幾率較小，Lim[7]報道637例SK患者中只有27例并發(fā)BCC。SK臨床增殖情況與EGFR高表達有92%相關(guān)性。

本研究通過免疫組化發(fā)現(xiàn)，BCC組中促進血管生成因子表達明顯高于SK組，而調(diào)控因子表達低于SK組，提示血管生成可能與SK的癌變有關(guān)。BCC組和SK組血管生成相關(guān)因子高于對照組，而調(diào)控因子低于對照組，說明血管生成在基底細胞癌及脂溢性角化病的發(fā)生、發(fā)展中有一定作用。而其具體機制，以及VEGF/VEGFR2，Dll4/Notch1信號通路在基底細胞癌與脂溢性角化病的發(fā)生、發(fā)展、浸潤以及轉(zhuǎn)移中如何相互影響，仍有待進一步研究。

參考文獻：

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[3]陳用軍， 王建， 羅國良，等. STAT3與VEGF在脂溢性角化病和基底細胞癌中的表達及關(guān)系[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志， 2012， 6 （3）： 155-156.

[4]陳旭， 顧恒. 基底細胞癌中腫瘤相關(guān)信號通路研究進展[J]. 國際皮膚性病學(xué)雜志， 2011， 37（1）： 33-37.

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[6]Panelos J， Tarantini F， Paglierani M， et al. Photoexposotoin discriminates Notch1 expression in humon cutaneous squamous cell carcinoma[J]. Mod Pathol， 2008， 21（3）： 316-325.

[7]Lim C. Seborrheic keratosis with associated lesions：a rerrospective analysis of 85 lesions[J]. Australas J Dermatol， 2006， 47（2）： 109-113.

編輯/哈濤