ICU分離鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜形成能力與其耐藥性的相關(guān)研究

摘要：目的 對(duì)比分析鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株及耐藥株的產(chǎn)膜能力，以此總結(jié)生物膜與耐藥性之間的相關(guān)性，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法 選取2014年1月～6月惠東縣人民醫(yī)院ICU感染鮑曼不動(dòng)桿菌的分離株（200株），采用紙片擴(kuò)散法鑒定200株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)抗菌藥物的敏感性，結(jié)果按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）2013年標(biāo)準(zhǔn)判別，分為敏感株，多重耐藥株和泛耐藥株；采用黏附半定量法測(cè)量鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力，比較鮑曼不動(dòng)桿菌敏感株、多重耐藥株、泛耐藥株之間形成生物膜的差異，統(tǒng)計(jì)敏感株、多重耐藥株、泛耐藥株黏附OD值及生物膜形成的陽(yáng)性率；統(tǒng)計(jì)分析ICU不同標(biāo)本來(lái)源的鮑曼不動(dòng)桿菌分離株生物膜的生成情況。結(jié)果 ICU鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成的陽(yáng)性率為65.50%，其中，生物膜形成的陽(yáng)性率多重耐藥菌組最高，為83.36%，其次泛耐藥菌組為77.11%，敏感組最低，為22.00%。ICU 共收集200株鮑曼不動(dòng)桿菌，標(biāo)本主要來(lái)源于痰（86.0%），痰標(biāo)本172株鮑曼不動(dòng)桿菌有109株形成生物膜，陽(yáng)性率為63.37%；分泌物13株，其中9株產(chǎn)生生物膜，陽(yáng)性率為69.23%，介入物有15株13株產(chǎn)生生物膜，陽(yáng)性率為86.67%。結(jié)論 ICU鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性與其生物膜的形成有一定的聯(lián)系，臨床應(yīng)該做好鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜鑒別診斷，避免感染相關(guān)的危險(xiǎn)因素。

關(guān)鍵詞：鮑曼不動(dòng)桿菌；生物膜；耐藥性

鮑曼不動(dòng)桿菌是一種非發(fā)酵糖類的革蘭陰性球桿菌，廣泛存在于自然界和醫(yī)院環(huán)境中，是導(dǎo)致院內(nèi)感染的重要條件致病菌之一，可定植于人類呼吸道、尿道、皮膚、傷口、胃腸道等，其對(duì)外界適應(yīng)力極強(qiáng)，可在醫(yī)院干燥物體表面長(zhǎng)期存活，可引起呼吸機(jī)相關(guān)肺炎、尿路感染、繼發(fā)性腦膜炎、手術(shù)部位感染、菌血癥。近年，鮑曼不動(dòng)桿菌在醫(yī)院感染率逐年上升，對(duì)重癥患者及ICU病房的患者威脅極大。目前據(jù)統(tǒng)計(jì)，在ICU感染疾病中，鮑曼不動(dòng)桿菌檢出率最高，且其對(duì)氨基糖苷類，喹諾酮類及廣譜β內(nèi)酰胺酶等抗菌藥物產(chǎn)生多重耐藥現(xiàn)象日趨嚴(yán)重，尤其是泛耐藥株的產(chǎn)生，使得臨床抗感染治療面臨極大的挑戰(zhàn)。因此，研究鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制，避免其感染的相關(guān)危險(xiǎn)因素，顯得尤為重要。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1菌株來(lái)源 200例菌株株選取于2014年1月～6月惠東縣人民醫(yī)院ICU的病例，菌株采用PHOENIX-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀鑒定收集ICU不同樣本來(lái)源分離的敏感及耐藥菌株，標(biāo)本來(lái)源：痰標(biāo)本172株，支氣管分泌物12株，，靜脈插管9株，血液4株，尿液2株。質(zhì)控菌株：大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.1.2儀器與試劑 Versa trek血培養(yǎng)儀；PHOENIX-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀；酶標(biāo)儀；培養(yǎng)箱；LB培養(yǎng)基（胰蛋白胨，酵母提取物，氯化鈉）；96孔板；0.1%結(jié)晶紫；95%乙醇；藥敏紙片：環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、妥布霉素、美羅培南、亞胺培南、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林他唑巴坦、復(fù)方磺胺甲惡唑、為OXIOD產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1藥敏試驗(yàn) 采用紙片擴(kuò)散法，結(jié)果按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）2013年標(biāo)準(zhǔn)判別，分為敏感株，多重耐藥株和泛耐藥株，其中對(duì)三類或三類以上抗菌藥物耐藥為MDRAb（多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌），對(duì)臨床所有抗菌藥物耐藥為XDRAb（泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌），其余為敏感株。

1.2.2黏附半定量法測(cè)量生物膜形成水平 在96孔板內(nèi)加入定量LB培養(yǎng)基細(xì)菌懸浮液，然后將菌株在37℃，24h培養(yǎng)過(guò)夜，細(xì)菌在小孔內(nèi)壁上形成生物膜；將長(zhǎng)有生物膜的96孔中的液體小心吸走，以除去懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)的細(xì)菌，只留下附著于內(nèi)壁生長(zhǎng)的生物膜；取適量生理鹽水清洗2次，去除懸浮細(xì)胞；加入0.1%結(jié)晶紫染料，染色15min；再洗板；每孔加入95%乙醇200ul溶解結(jié)晶紫，在570nm處測(cè)定其OD值，其OD值反映的是附著在內(nèi)壁上生物膜的生物質(zhì)的量。以大腸埃希菌ATCC25922為陰性對(duì)照，判定生物膜生成，以O(shè)D值>=陰性對(duì)照OD+3SD判為產(chǎn)生生物膜。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，應(yīng)用SPSS11.5軟件，以方差檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的處理。

2結(jié)果

2.1鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥試驗(yàn)結(jié)果 統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)可得：200株鮑曼不動(dòng)桿菌敏感菌株50株對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢哌酮、哌拉西林、阿米卡星、妥布霉素、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、亞胺培南、美羅培南和復(fù)方磺胺甲惡唑耐藥率為0.00%；多重耐藥組67株除對(duì)亞胺培南和美羅培南敏感，對(duì) 其他抗菌藥物耐藥率>69%；泛耐藥組83株對(duì)上述抗菌藥物均耐藥。

2.2鮑曼不動(dòng)桿菌黏附OD值與生物膜陽(yáng)性率結(jié)果 大腸埃希菌（ATCC25922）OD值為0.061，加3SD（0.0528），即為0.1138，以分離株OD值>=陰性對(duì)照OD+3SD判為產(chǎn)生物膜陽(yáng)性，見(jiàn)表1，表2。

2.3不同樣本來(lái)源的鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成結(jié)果 ICU 共收集200株鮑曼不動(dòng)桿菌，標(biāo)本主要來(lái)源于痰（86.0%），痰標(biāo)本172株鮑曼不動(dòng)桿菌有109株形成生物膜，陽(yáng)性率為63.37%；分泌物13株，其中9株產(chǎn)生生物膜，陽(yáng)性率為69.23%，介入物有15株13株產(chǎn)生生物膜，陽(yáng)性率為86.67%。

3討論

鮑曼不動(dòng)桿菌是臨床常見(jiàn)的條件致病菌，廣泛存在于目然界和醫(yī)院環(huán)境中。近年來(lái)，隨著廣譜抗生素的應(yīng)用，該菌的感染率呈上升趨勢(shì)，成為重要的醫(yī)院感染致病菌之一，其耐藥問(wèn)題給臨床治療帶來(lái)了極大的困難，已成為臨床抗感染治療函待解決的難題。鮑曼不動(dòng)桿菌作為一種條件致病菌，常常感染免疫力嚴(yán)重低下、置管及重癥的ICU病患，在感染早期用藥效果往往不佳，多表現(xiàn)為多重耐藥性。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)抗生素使用、置管等是引起鮑曼不動(dòng)桿菌感染和高耐藥的主要危 因素，另外細(xì)菌生物膜形成引發(fā)菌群對(duì)多種抗生素發(fā)生耐藥，這也是隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，其耐藥現(xiàn)象 益加重的主要原因細(xì)菌生物膜形成猶如一道屏障，阻礙各種抗生素的滲透，同時(shí)胞膜的泵出或泵入效應(yīng)就此受到制約。因此，生物膜形成機(jī)制的研究已成為抗菌感染研究的重要問(wèn)題。

通過(guò)本研究的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可見(jiàn)，ICU鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成的陽(yáng)性率為65.50%，說(shuō)明臨床上絕大多數(shù)鮑曼不動(dòng)桿菌能夠生成生物被膜。其中，生物膜形成的陽(yáng)性率多重耐藥菌組最高，為83.36%，其次泛耐藥菌組為77.11%，敏感組最低，為22.00%。多重耐藥組及泛耐藥組的生物膜陽(yáng)性率明顯高于敏感組，表明鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制與其生物被膜的形成有一定的聯(lián)系，菌株生物膜生成在一定條件下可以改變菌株的耐藥性，生成生物被膜的菌株耐藥性更強(qiáng)。ICU 共收集200株鮑曼不動(dòng)桿菌，標(biāo)本主要來(lái)源于痰（86.0%），痰標(biāo)本172株鮑曼不動(dòng)桿菌有109株形成生物膜，陽(yáng)性率為63.37%；分泌物13株，其中9株產(chǎn)生生物膜，陽(yáng)性率為69.23%，介入物有15株13株產(chǎn)生生物膜，陽(yáng)性率為86.67%。生物膜是細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中為適應(yīng)生存環(huán)境而吸附于惰性或者活性實(shí)體表面的一種與浮游菌相對(duì)應(yīng)的生長(zhǎng)方式?？墒辜?xì)菌牢固地黏附在人體上皮黏膜或者各種醫(yī)療設(shè)備表面，同時(shí)能夠保護(hù)其內(nèi)部的細(xì)菌不受抗菌藥物和消毒劑的殺滅作用。因此，介人治療存在高風(fēng)險(xiǎn)的鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜產(chǎn)生，應(yīng)引起高度重視。

綜上所述，臨床鑒定的鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜產(chǎn)生的狀況值得警覺(jué)，抗生素使用前最好先界定該菌是否產(chǎn)生生物膜，臨床床檢驗(yàn)者應(yīng)規(guī)范標(biāo)本的前處理，菌群的分離應(yīng)制定合理的操作規(guī)范，耐藥性分析應(yīng)結(jié)合患者的具體情況，采取多種干預(yù)措施來(lái)預(yù)防該菌生物膜產(chǎn)生后耐藥菌株的出現(xiàn)。總之，細(xì)菌生物膜檢測(cè)水平的提高將有助于鮑曼不動(dòng)桿菌的鑒別診斷及臨床治療。

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