液相色譜法和液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中多菌靈等15種農(nóng)藥殘留量的研究

摘要 [目的]建立蔬菜中多菌靈等15種農(nóng)藥殘留檢測方法。[方法]分別采用高效液相色譜法（HPLC）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC/MS/MS）對不同蔬菜中多菌靈等15種農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測。[結(jié)果]2種試驗(yàn)檢測方法，多菌靈等部分農(nóng)藥殘留量檢測結(jié)果存在一定差異，這是蔬菜樣品基質(zhì)干擾所致。[結(jié)論]LC/MS/MS方法質(zhì)譜抗干擾能力強(qiáng)、穩(wěn)定、可靠，使用簡便快速、分析時(shí)間短；HPLC方法需要更好的方法優(yōu)化才能得到更可靠的檢測結(jié)果。

關(guān)鍵詞 HPLC；LC/MS/MS；農(nóng)藥殘留；多菌靈

中圖分類號(hào) S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）25-08593-05

Abstract [Objective] The aim was to establish determination methods for 15 kinds of pesticides residues in vegetables. [Method] The residues of 15 kinds of pesticides in vegetables were determined by HPLC and LC/MS/MS. [Result] Through the two kinds of different analysis methods， there were obvious differences in several pesticide residue detection results， such as avermectins， which should be caused by different vegetable sample matrixs interference by HPLC method. [Conclusion] HPLC method needed better methods to optimize in order to get more reliable results， while LC/MS/MS method was simple and quick， had short analysis time with strong antiinterference ability by mass spectrometry， and so it was known as a stable and reliable detection method.

Key words HPLC； LC/MS/MS； Pesticide residue； Carbendazim

隨著食品事件頻發(fā)，食品安全受到高度關(guān)注，政府各級(jí)部門加強(qiáng)對食品監(jiān)管，針對不同食品開展檢測項(xiàng)目。目前，蔬菜、水果、茶葉等初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留開展最普遍。農(nóng)藥殘留檢測工作是一項(xiàng)操作性很強(qiáng)的技術(shù)工作，現(xiàn)階段農(nóng)藥殘留檢測主要采用氣相色譜議、液相色譜議、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜議、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜議。同一農(nóng)藥參數(shù)有時(shí)可以多種方法與儀器進(jìn)行檢測，但不同樣品基質(zhì)、不同人員、不同儀器造成結(jié)果往往存在一定偏差。鑒于此，筆者結(jié)合農(nóng)業(yè)部開展的全國農(nóng)產(chǎn)品安全例行監(jiān)測和廣東省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測工作，采用HPLC和LC/MS/MS 2種方法對不同蔬菜中多菌靈等15種農(nóng)藥殘留進(jìn)行了檢測，旨在為相關(guān)部門開展農(nóng)藥殘留檢測工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器。美國Agilent 1200高效液相色譜儀（HPLC），配有紫外和熒火檢測器，并配有柱后衍生系統(tǒng)；1200RRLC/6410BQQQESI液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC/MS/MS）。

1.1.2 試劑。SPE小柱（500 mg/6ml氨基柱）；乙腈、甲醇、二氯甲烷等試劑均為色譜純。

1.1.3 藥劑。涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、多菌靈、三羥基克百威、吡蟲啉、啶蟲脒、涕滅威、克百威、甲萘威、除蟲脲、滅幼脲、氟蟲腈、辛硫磷、阿維菌素15種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（濃度為1 000 mg/L）均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（天津）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。

1.2.1.1 單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制。

稱取一定量某農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇逐一稀釋，配制成15種農(nóng)藥100 mg/L的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，貯存在-18 ℃以下冰箱中。使用時(shí)吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，稀釋配成所需標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.1.2 農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。

逐一吸取一定體積的單一農(nóng)藥儲(chǔ)備溶液分別注入同一容瓶中，用甲醇稀釋至刻度。

1.2.2 提取。

稱取20.0 g樣品于100 ml離心管中，加入40.0 ml乙腈，勻漿1 min，加入5.0 g氯化鈉，再勻漿1 min，于8 000 r/min下離心3 min。

1.2.3 凈化。

1.2.3.1

HPLC。取“1.2.2”上清液10.0 ml于70 ℃水浴氮吹儀上氮吹至近干，加入2 ml甲醇+二氯甲烷（1+99），待凈化。將氨基柱用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）預(yù)洗，當(dāng)溶液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即加入上述待凈化樣品，用2.0 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）洗刻度離心管后過柱，并重復(fù)1次。將刻度離心管置于50 ℃水浴氮吹儀上氮吹至近干，用甲醇定容至2.5 ml，混勻，經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后，待測。

1.2.3.2 LC/MS/MS。取“1.2.2”上清液1.0 ml置于裝有0.2 g無水硫酸鎂和0.1 g N丙基乙二胺（PSA）的10 ml離心管中，8 000 r/min離心3 min。將凈化提取液轉(zhuǎn)移至帶有刻度離心中并標(biāo)記刻度，于70 ℃水浴氮吹儀上氮吹至少于0.3 ml，用甲醇+水（1+1）定容至標(biāo)記刻度，經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后，待測。

1.2.4 色譜測定方法。

1.2.4.1 HPLC。分別吸取20.0 μl標(biāo)準(zhǔn)溶液、按“1.2.3”凈化后的樣品溶液注入Agilent 1200 HPLC中，采用外標(biāo)法以樣品溶液峰面積比較定量。

1.2.4.2 LC/MS/MS。分別吸取5.0 μl標(biāo)準(zhǔn)溶液、按“1.2.3”凈化后的樣品溶液注入Agilent 1200 RRLC/6410 BQQQESI LC/MS/MS中，以保留時(shí)間、離子對比例定性，采用外標(biāo)法以樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液定量離子峰面積比較定量。

1.2.5 儀器分析條件。

1.2.5.1 HPLC分析條件。滅多威等7種氨基甲酸類農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物儀器測定條件：Agilent HPLC1200熒光檢測器，柱后衍生系統(tǒng)；Agilent SBC18（250 mm×4.6 mm×5 μm）；分析時(shí)間：30 min；流速：1.0 ml/min；波長：λex330 nm，λex465 nm；柱后衍生：0.05 mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，流速0.2 ml/min，OPA試劑，流速0.2 ml/min；水解溫度：100 ℃；衍生溫度：室溫；流動(dòng)相見表1。

多菌靈等8種農(nóng)藥儀器測定條件：Agilent HPLC1200 紫外檢測器；Waters XBridge C18（250.0 mm×4.6 mm×5 μm）；分析時(shí)間：35 min；流速：1.0 ml/min；流動(dòng)相見表2。

1.2.5.2 LC/MS/MS分析條件。Agilent 1200RRLC/6410BQQQESI；色譜柱：ZORBAX SBC18（3.0×150 mm 1.8Micron）；柱溫：30 ℃；流速：0.3 ml/min；電離源模式：ESI；霧化氣：氮?dú)猓混F化氣壓力：40 Psi；離子噴霧電壓：3 000 V；干燥氣溫度：350 ℃；干燥氣流量：10.0 L/min。各農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)見表3，流動(dòng)相見表4。

3 討論

隨著人民生活水平不斷提高，對生活質(zhì)量要求也越來越

高，食品質(zhì)量安全意識(shí)和要求也在不斷提高。近年來，食品安全事故頻發(fā)，更加引起人民和社會(huì)的關(guān)注。特別是農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的問題越來越引起普遍關(guān)注并呼喚農(nóng)藥殘毒的監(jiān)控檢測。為了保證人民安全，擴(kuò)大農(nóng)產(chǎn)品出口貿(mào)易，各級(jí)政府高度重視農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留問題，加強(qiáng)農(nóng)藥殘留檢測完善監(jiān)控體系，全國各地都在積極組織開展農(nóng)藥殘留監(jiān)測工作，目前已取得一定成效。

HPLC檢測易造成基質(zhì)干擾嚴(yán)重，在日常監(jiān)測工作中易出現(xiàn)以下幾方面問題：檢測結(jié)果誤判；造成個(gè)別農(nóng)藥重現(xiàn)性不好（如多菌靈、阿維菌素、除蟲脲）；干擾嚴(yán)重?zé)o法進(jìn)行定量；多數(shù)回收率偏高[1]。而該研究中HPLC試驗(yàn)條件已經(jīng)證驗(yàn)，可確保各農(nóng)藥組分得到較好的靈敏度和分離效果。

目前大多數(shù)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，特別是基屋農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，都認(rèn)為采用HPLC很難開展多種農(nóng)藥殘留檢測，在未能爭取配置LC/MS的情況下，對開展農(nóng)藥殘留檢測工作采取消極態(tài)度。但LC/MS或LC/MS/MS等儀器設(shè)備均為進(jìn)口儀器，價(jià)格昂貴且儀器使用和維護(hù)成本高，當(dāng)前縣（市）一級(jí)基層農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機(jī)構(gòu)的使用頻率也不高，容易造成浪費(fèi)。從目前的實(shí)際情況來看，HPLC和LC/MS/MS檢測農(nóng)藥殘留量時(shí)，所得結(jié)果在個(gè)別農(nóng)藥品種上可能存在較大差異，這主要是試驗(yàn)方法未能進(jìn)行良好優(yōu)化所造成的。因此，在利用HPLC進(jìn)行蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測時(shí)，要深入研究各種蔬菜基質(zhì)干擾效應(yīng)，充分優(yōu)化檢測方法前處理方法和配置檢測儀器具體的分離測定條件。

參考文獻(xiàn)

[1] 江燕玲，成秀娟，魏燕秋，等.有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢測過程中基質(zhì)效應(yīng)研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2012，33（2）：25-29.