生鮮乳金黃色葡萄球菌污染來(lái)源調(diào)查及其耐藥性

摘 要：為考察貴陽(yáng)市生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染環(huán)節(jié)及其對(duì)藥物的敏感性，采集貴陽(yáng)市周邊5個(gè)大型奶牛場(chǎng)及一個(gè)牛奶加工廠的乳區(qū)棉簽拭子75份和各生產(chǎn)環(huán)節(jié)奶樣310份，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 4789.10—2010）分離鑒定金黃色葡萄球菌，并測(cè)定其對(duì)9種常用抗菌藥物的敏感性。結(jié)果表明：生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染主要來(lái)源于牛乳頭內(nèi)；傳統(tǒng)的“棄前三把奶”工藝對(duì)降低生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染的作用不明顯；規(guī)范的乳區(qū)消毒可以有效地降低乳頭外環(huán)境金黃色葡萄球菌對(duì)生鮮乳安全的影響；所調(diào)查奶牛場(chǎng)的金黃色葡萄球菌對(duì)磺胺類、β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類藥物的耐藥水平較高。

關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌；污染；檢出率；耐藥性；多重耐藥

中圖分類號(hào)：S855.1+ 2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.05.023

金黃色葡萄球菌是奶牛乳房炎最主要的傳染性致病菌，也是影響生鮮乳質(zhì)量的重要因素[1]。近年來(lái)， 由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒越來(lái)越多，而中毒食品以乳和乳制品為主[2]。我國(guó)也常發(fā)生金黃色葡萄球菌食物中毒，是衛(wèi)生防疫部門重點(diǎn)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目[3]。我國(guó)最新國(guó)標(biāo)規(guī)定生鮮乳中不得檢出金黃色葡萄球菌。乳源金葡菌耐藥性不僅會(huì)影響牛乳房炎的治療而且也影響乳生產(chǎn)企業(yè)的效益，其耐藥性也會(huì)通過乳傳遞給人，增加人在相關(guān)感染時(shí)治療失敗的風(fēng)險(xiǎn)。從貴陽(yáng)市周邊5個(gè)大型奶牛場(chǎng)和一個(gè)牛奶加工廠的各生產(chǎn)環(huán)節(jié)采集乳樣，進(jìn)行生鮮乳金黃色葡萄球菌的污染來(lái)源及其耐藥性研究，以期為生鮮乳生產(chǎn)質(zhì)量控制和被調(diào)查奶牛場(chǎng)乳房炎治療提供幫助。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 試劑 7.5%氯化鈉肉湯，金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，貝爾德-帕克氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)，亞碲酸鹽卵黃增菌液，60%甘油，16種葡萄菌生化鑒定管，MH肉湯。

1.1.2 藥 物 青霉素、紅霉素、阿莫西林、頭孢噻呋、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、土霉素、氟苯尼考、磺胺二甲嘧啶。

1.1.3 質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌質(zhì)控菌株ATCC25923，購(gòu)買自中國(guó)菌種資源保藏中心。

1.1.4 主要設(shè)備 超凈工作臺(tái)，高壓滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫干燥箱，電子天平等。

1.2 方 法

1.2.1 樣品的采集 乳區(qū)棉簽拭子采集：牛乳區(qū)溫水洗滌熱敷、按摩，聚維酮碘消毒，滅菌后棉簽擦拭乳頭，置入亞碲酸鹽卵黃增菌液內(nèi)保存；其余為第1把奶、第4把奶、牛場(chǎng)集奶罐、運(yùn)奶車、加工車間貯奶罐、半成品和成品奶樣，共計(jì)385份（表1）。

1.2.2 金黃色葡萄球菌的分離鑒定 參照GB4789.10—2010 ，進(jìn)行分離鑒定。

1.2.3 藥物敏感性試驗(yàn) 采用微量肉湯稀釋法測(cè)定金黃色葡萄球菌對(duì)常用10種抗菌藥物的最小抑菌濃度（MIC），按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）2009版推薦的判定標(biāo)準(zhǔn)及中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行耐藥性統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 金黃色葡萄球菌分離鑒定結(jié)果

在總計(jì)為385份的樣品中，共分離鑒定出金黃色葡萄球菌88株，分離率為22.86%。金黃色葡萄球菌的檢出率高低依次為第1把奶、第4把奶、奶牛場(chǎng)的集奶罐、運(yùn)奶車、加工車間貯奶罐；加工車間的成品和半成品奶均未查到金黃色葡萄球菌，乳區(qū)棉簽拭子的檢出率低于奶樣品。

2.2 生鮮乳中金黃色葡萄球菌耐藥性檢測(cè)結(jié)果

分離到的88株金黃色葡萄球菌對(duì)9種常用抗菌藥物都具有不同程度的耐藥，其耐藥順序?yàn)椋夯前范奏奏ぁ⑶嗝顾亍?qiáng)力霉素、土霉素、頭孢噻呋、氟苯尼考、恩諾沙星和環(huán)丙沙星。這表明分離菌對(duì)磺胺類、β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類藥物的敏感性較低。

2.3 金色葡萄球菌的多重耐藥情況

本次試驗(yàn)中分離的88株金黃色葡萄球菌均表現(xiàn)為多重耐藥，最少的為3重，占總菌株數(shù)的11.36%；最高的為7重，占總菌株數(shù)的4.55%；多重耐藥譜主要集中在4重（39.77%）和5重（34.09%）之間（圖1）。

3 結(jié)論與討論

（1）本試驗(yàn)總計(jì)385份樣品，共分離出金黃色葡萄球菌88株，檢出率為22.86%。該菌在不同國(guó)家及地區(qū)的生鮮乳中檢出率為12%～79%[6-7]。我國(guó)生鮮乳中金葡菌的檢出率主要在15%～38%[8-9]。金黃色葡萄球菌的檢出率高低順序說明：該菌在牛乳腺內(nèi)定植較為普遍，正常狀態(tài)下，約3成牛乳頭內(nèi)有金黃色葡萄球菌的存在。隨著奶量的不斷匯集，牛場(chǎng)集奶罐、運(yùn)奶車、加工廠貯奶罐的檢出率逐漸降低，說明生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染主要來(lái)源于牛乳頭內(nèi)。

（2）為降低生鮮乳中細(xì)菌污染，傳統(tǒng)工藝為棄前三把奶，然后才收集鮮奶，試驗(yàn)結(jié)果表明：棄前三把奶對(duì)降低生鮮乳中金黃色葡萄球菌污染作用不明顯（10%左右），實(shí)際意義不大，卻增加了棄奶時(shí)人手對(duì)乳頭污染的機(jī)會(huì)，故“棄前三把奶”工藝有待進(jìn)一步研究和評(píng)估。

（3）乳區(qū)棉簽拭子的檢出率明顯低于其他奶樣，說明規(guī)范的乳區(qū)消毒可以有效地降低乳頭外環(huán)境致病菌對(duì)生鮮乳安全的影響。但是，在使用聚維酮碘消毒時(shí)奶牛出現(xiàn)明顯的刺激性疼痛反應(yīng)，此疼痛應(yīng)激反應(yīng)對(duì)奶牛產(chǎn)量的影響和消毒藥在鮮奶中殘留的風(fēng)險(xiǎn)有待進(jìn)一步研究。生鮮乳在經(jīng)過加工車間加工后，無(wú)論成品或半成品中均沒有檢出金黃色葡萄球菌，說明該加工廠的奶消毒工藝可靠。

（4）本次調(diào)查結(jié)果中，5種藥物的耐藥率高于85%，其中磺胺二甲嘧啶耐藥率達(dá)到100%，青霉素耐藥率也高達(dá)95.45%，頭孢噻呋、強(qiáng)力霉素和土霉素的耐藥率也均在85%以上，說明所調(diào)查的奶牛場(chǎng)對(duì)磺胺類、β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類藥物的耐藥水平較高，與王冰等[10]、燕霞等[11]報(bào)道的結(jié)果相似。建議奶牛場(chǎng)建立細(xì)菌藥敏動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)庫(kù)，根據(jù)藥物敏感性，實(shí)時(shí)調(diào)整抗感染藥物的使用方案，以提高療效、降低用藥成本、減少治療性棄奶量和減少乳中藥物殘留的可能。

參考文獻(xiàn)：

[1] 曹立亭，胡松華.奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分布[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2010， 38（34）：19 541-19 542.

[2] 黃丹，殷文政，劉曉川，等. 呼和浩特地區(qū)乳中金黃色葡萄球菌的分離鑒定及藥敏性試驗(yàn)研究[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工，2007（12）：72-74.

[3] 史紅. 金黃色葡萄球菌耐藥性及腸毒素分型研究[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（6）：87-90.

[4] 呂素玲.南寧市生牛奶金黃色葡萄球菌污染狀況及其耐藥性和腸毒素基因檢測(cè)[J].應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2001，16（5）：271-274.

[5] Levy S B. Antibiotic resistance：an ecological imbalance[C]//Chad-wick D J， Goode J. Antibiotic resistance：origin，evolution，selection，and spread，ciba foundation symposium 207. Chichester： John Wiley Sons，1997：1-14.

[6] 徐勤，巢國(guó)祥.生牛奶中金黃色葡萄球菌污染狀況及耐藥性狀研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，15（8）： 972-973.

[7] 黃冰，鄧志愛，譚銘雄，等.食品中金黃色葡萄球菌污染狀況、產(chǎn)腸毒素特性及耐藥性研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（6）： 1 380-1 382.

[8] 閆軍，遇曉杰，蘇華，等. 原料乳中金黃色葡萄球菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估基礎(chǔ)研究[J].中國(guó)公共衛(wèi)生管理，2010，26（1）： 39-40.

[9] 薛秀恒，孫茂忠，王菊花，等.安徽不同地區(qū)奶站牛奶中金黃色葡萄球菌及其腸毒素污染狀況評(píng)估[J]. 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2012，24（4）：302-307.

[10] 王冰，劉明春，吳聰明，等.呼和浩特地區(qū)奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌的耐藥性調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2007， 43 （3）：30-32.

[11] 燕霞，陳儉，張麗佳，等.浙江省主要奶牛養(yǎng)殖區(qū)乳房炎致病菌金黃色葡萄球菌的耐藥性[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，41（6）：633-636.