國內真菌臨床檢驗技術的研究進展

【摘要】真菌感染是近年來新出現(xiàn)的一種新型的臨床常見疾病。由于近幾年來醫(yī)學方面的研究力度逐漸增大，同時研制出很多的新型的治療方法，其中真菌治療便是具有代表性的一種。然而，隨著真菌治療使用的廣泛普及，真菌引起的感染疾病也越來越多，這一現(xiàn)象引起了很多人的極度關注。

【關鍵詞】真菌感染；臨床檢驗；生化檢驗

【中圖分類號】R446.5 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）05-0703-01

前言：真菌感染疾病的臨床治療手段比較單一、缺乏有效藥物，因此早期診斷、及時檢出對提高治愈率、降低死亡率至關重要。而最重要的是，真菌感染的臨床治療是醫(yī)院臨床檢驗中最薄弱的一個環(huán)節(jié)，并且它得到的重視程度遠遠不夠，專業(yè)從事這個行業(yè)的專業(yè)人員又少，所以導致現(xiàn)如今真菌感染疾病臨床治療手段不夠完善的局面，因此，我們應當更加重視真菌感染疾病的臨床治療。

1臨床致病真菌的分類

臨床致病真菌按形態(tài)學主要分為3大類群：酵母菌、霉菌以及雙相型真菌。這些真菌按致病部位可以分為淺部真菌和深部真菌。引起淺部感染的多為霉菌，引起深部感染的多為酵母菌和雙相型真菌，也有少數(shù)霉菌（如曲霉菌、毛霉菌、青霉菌等）。

2我國真菌感染疾病的臨床治療技術的現(xiàn)狀

目前臨床常用的真菌檢驗方法習慣上分為培養(yǎng)法和非培養(yǎng)法兩種，主要包括形態(tài)學觀查、生化指標檢測以及分子生物學測試等。有關真菌臨床檢驗的一般方法以及國外在相關生化、分子生物學檢驗方面的研究進展，已有數(shù)篇簡短的綜述。

由于受到工作條件、研究條件和人員素質等多方面的限制，國內對于臨床真菌檢驗方法學的研究相對薄弱，但國內同仁從來沒有停止對相關領域的探索。尤其值得指出的是，由于國內研究完全基于我國現(xiàn)有的臨床檢驗條件，因而工作的開展更有針對性，結果也更有借鑒意義。

3近幾年專家研究出的臨床治療手段

3.1臨床治療技術之一——形態(tài)學觀察

形態(tài)學觀察法主要包括直接鏡檢法和培養(yǎng)法兩種最經(jīng)典的檢驗方法。直接鏡檢法包括濕片鏡檢和干片鏡檢兩種方法，是一項簡易快速有效的方法。在皮膚科檢查、婦科檢查、排泄物檢查及胸腹水、腦脊液等危重病患者醫(yī)院內感染的深部真菌病的監(jiān)測中是快速作出初步診斷的重要手段，但常規(guī)檢查法檢出率甚低，造成診斷上的困難。采用多次制片、重復檢測的方法，可以彌補方法學上的不足，大大提高真菌檢出率。

培養(yǎng)法是金標準，分為大培養(yǎng)法和小培養(yǎng)法，可提供真菌的耐藥特征，相對簡單易普及，是目前應用最廣的方法。大培養(yǎng)適用于血液、骨髓、腦脊液、胸腹水等無菌部位的體液的真菌培養(yǎng)，主要的培養(yǎng)基有液體沙氏培養(yǎng)基，腦心浸液培養(yǎng)基及各類商品的血液培養(yǎng)儀專用的培養(yǎng)基；小培養(yǎng)主要用于痰、膿液、組織、糞便、毛發(fā)，口、咽、耳、陰道等部位各類型的標本，有沙氏平斜面、改良沙氏培養(yǎng)基，TYC沙堡羅培養(yǎng)基、CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基，及用于真菌分離的蔡氏培養(yǎng)基（用于曲霉菌、青霉菌、毛霉菌）、麥芽浸膏培養(yǎng)基（用于毛霉菌）、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（用于暗色孢科）、以及用于雙相型真菌轉相試驗的腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基等。培養(yǎng)法有陽性檢出率高、結果準確可靠的優(yōu)點，但操作繁瑣、耗時長，不利于快速作出診斷。使用CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基在真菌分離培養(yǎng)的同時即可鑒定，可縮短檢測時間24～48 h，還可同時檢測到念珠菌的混合感染，其真菌類型分離的陽性率與傳統(tǒng)的沙保弱培養(yǎng)基相同；但有一些念珠菌使用YBC卡能夠鑒定至種，而在CHROMagar顯色培養(yǎng)基中無法做到，同時，CHROMagar顯色培養(yǎng)基對細菌的抑制率（1.2 %）明顯低于沙堡弱培養(yǎng)基（9.9%）。培養(yǎng)法中使用的YBC卡、MicroScan鑒定板及CANDIFAST試劑盒等，是基于不同真菌代謝過程中產(chǎn)生的不同代謝產(chǎn)物和特異性酶制作的成品顯色試劑盒用于鑒定培養(yǎng)得到的真菌種類。從這個意義上來說，培養(yǎng)法也可以歸類于生化檢測法的范疇中。

將培養(yǎng)法與標本片制備相結合，在無菌載玻片上用一滴培養(yǎng)基作小培養(yǎng)，在觀察到樣本培養(yǎng)基中有菌絲或孢子出現(xiàn)后，立即干燥并用阿拉伯樹膠固封于蓋玻片的四周，可以得到能夠長期保存的樣品標本，直接進行鏡檢，是一種改良的小培養(yǎng)法。有研究表明，對于來自鱗屑、指（趾）甲、毛發(fā)等標本的淺部真菌的臨床檢測，運用馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）、沙堡氏瓊脂及玉米粉葡萄糖瓊脂培養(yǎng)得到的真菌陽性率（61.44 %）明顯高于10%KOH涂片鏡檢法的陽性率（51.42 %）。在對直接鏡檢呈陰性的標本進行培養(yǎng)時，仍然得到21.08%的陽性率。因此，直接鏡檢為陰性的臨床標本仍需謹慎對待。

3.2臨床治療技術之一——生化檢測法

前面已經(jīng)提到，真菌生長過程中會產(chǎn)生大量不同種類代謝產(chǎn)物和特異性酶。應用生化手段直接檢測體液中相關物質的含量對臨床真菌感染特別是深部真菌感染的早期發(fā)現(xiàn)具有重要意義，該法易于標準化操作，快捷可靠、系統(tǒng)誤差小，具有良好的市場前景。我國科研工作者在這方面進行了許多有益的嘗試和探索。

有研究表明，所有真菌細胞膜上都含有1-3-B-D葡聚糖，而其他微生物、動物及人體的細胞和細胞外液中均不含有這種成分，因此，人體體液中1-3-B-D葡聚糖的含量測試可以作為深部真菌感染的診斷依據(jù)。應用MB-80微生物動態(tài)快速檢測系統(tǒng)對35例深部真菌感染患者和30例健康人群血液中1-3-B-D葡聚糖的含量測定對比研究顯示，健康人群血漿中1-3-B-D葡聚糖的含量最高值為7.29 g/L，最低值為0.45 g/L，均值為（2.83？2.57）g/L；而真菌感染患者血漿中1-3-B-D葡聚糖的含量最高值為168.90 g/L，最低值為14.93 g/L，均值為（54.06？36.13）g/L，對照組遠遠低于患病組，二者差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。因此，血清葡聚糖含量的測定完全可以作為一種真菌感染的早期診斷方法。該方法的局限在于無法確定感染真菌的種類，這也是所有生化測定方法共同存在的問題。

3.3臨床治療技術之一——分子生物學檢測法

分子生物學的飛速發(fā)展及其在在技術上的日趨成熟，使之迅速介入到醫(yī)學、藥學、微生物學等諸多生命科學相關領域，越來越多的影響和改變著人們的思維方式和科研行為。分子生物學在真菌臨床檢驗的應用主要有2個方面，首先是真菌菌種的鑒定，特別是形態(tài)學上難以確定的新種，可以通過分子生物學的方法得到完全確定；當然，應用分子生物學的手段也可以直接檢測人體中真菌的感染情況。

利用真菌通用引物rDNA ITS，通過常規(guī)聚合酶鏈反應（PCR）擴增技術，可以準確地鑒定不同種致病性真菌的種類，對于種類繁多、分類學上有局限性的菌種的鑒定尤為適合，通過對其18S亞基同源序列的比較，可以準確地歸屬其種群類別。

結束語：我國對于激素和抗菌藥物的依賴性特別大，但是，我國目前的醫(yī)療水平還相當落后，所以導致了真菌感染疾病的臨床治療技術如此落后。因此，我們應當加大研究力度，爭取將真菌感染疾病的臨床志教授段提高一個檔次，使得更多的人可以受惠，不用再受疾病的困擾。

參考文獻

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