HPLC法測定新生化顆粒中益母草堿的含量

摘要：

目的：建立新生化顆粒中鹽酸益母草堿含量測定的方法。方法：色譜柱為Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液（26：74）為流動相；流速1.0mL/min；檢測波長277nm；柱溫25℃。結果：鹽酸益母草堿在5.4～86.4μg/ml范圍內呈良好的線性關系（r=0.9995），加樣回收率為98.80%，RSD為0.72（n=6）；結論：本方法簡便、準確、重復性好，可用于新生化顆粒的質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜法；新生化顆粒；益母草堿

【中圖分類號】

R453 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）08-0046-02

新生化顆粒由當歸、川芎、桃仁、益母草等組成，具有活血、去淤、止痛的功效。處方中益母草其主要有效成分為丁香酸、益母草堿等。益母草堿具有活血化淤、利水消腫的作用。筆者采用高效液相色譜法測定該成分的含量[1-4]。該方法簡單、準確、重復性好，可用于新生化顆粒的質量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀；Sartorius-ME235S電子天平；鹽酸益母草堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號111823-201202，含量94.7%）；新生化顆粒（云南白藥集團股份有限公司，批號分別為ZLB1301，ZLB1302，ZLB1304）。乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液（26：74）；流速1.0mL/min；檢測波長277nm；柱溫25℃。進樣量：10μL。

2.2 溶液制備：

取鹽酸益母草堿對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml含30μg的溶液，即得對照品溶液。 取本品，研細，精密稱取約4.0g，置錐形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，稱定重量，加熱回流2小時，放冷，再稱定重量，用 70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。取續濾液，即得供試品溶液。按新生化顆粒劑制備工藝，制備缺益母草的陰性樣品，照供品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察：

系統適用性試驗取22項下3種溶液，擬定的色譜條件進行測定。結果陰性對照品溶液在與對照品溶液色譜峰相應保留時間位置上未出現吸收峰，說明處方中其他成分對測定無干擾。見圖1。

圖1高效液相色譜圖（1）陰性對照品溶液（2）對照品溶液（3）供試品溶液

線性關系考察：精密稱取鹽酸益母草堿對照品（含量94.7%計）10.8mg，70%乙醇溶液定容于100mL容量瓶中，得質量濃度約為108μg/ml作為母液，分別精密吸取母液0.5；1.0；2.0；4.0；8.0ml；分別定容于10ml的容量瓶中，得質量濃度分別為5.4；10.8；21.6；43.2；86.4μg/ml鹽酸益母草對照品溶液，分別取上述溶液10μl注入液相色譜儀，以質量濃度為橫坐標（x），峰面積為縱坐標（y），線性回歸得回歸方程為：y=17x+20.23，r=0.9995，表明鹽酸益母草堿質量濃度在5.4～86.4μg/ml范圍內線性關系良好。

精密度試驗：取21制備的對照品溶液，按23色譜條件重復進樣6次，結果峰面積的RSD為0.71%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：精密稱取同一批號樣品（批號為ZLB1304），按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，分別測定，結果峰面積的RSD為0.97%（n=6），表明方法重現性好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，于制備后0，2，4，8，12，24h進樣。結果峰面積的RSD為1.17%、（n=6），表明供試品溶液在24h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號ZLB1304）6份，精密加入鹽酸益母草堿對照品（濃度為0.108mg/ml）適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定，計算回收率，結果鹽酸益母草堿平均回收率為98.80%，RSD%為0.72%；結果見表1。

表1 鹽酸益母草堿加樣回收實驗結果（n=6）

3 討論

照《中國藥典》2010年版一部“益母草”項下的含量測定方法，故選擇用70%乙醇加熱回流提取，為保證被測成分的完全提取，實驗中考察了回流1、2、3小時不同提取時間對提取效率的影響，結果表明回流2小時后供試品中鹽酸益母草堿的含量基本穩定不變，故將提取時間定為加熱回流2小時。曾試用水、70%甲醇、70%乙醇提取，結果發現，用70%乙醇作為提取溶劑效果最優。

本實驗采用的處理方法簡便易行，結果準確可靠，專屬性強，重現性好，可用于該制劑的質量控制。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].中國醫藥科技出版，2010.141-142.

[2]瞿京紅，劉菁，吳進，高效液相色譜法測定益母草軟膠囊中益母草堿的含量，[J]中國醫藥導報，2011，13（9）：1631-1632.

[3]陳喆，宋康，李曉娟，等.HPLC測定益母草顆粒和益母草膏中益母草堿含量，[J]中國中藥雜志，2009，34（12）：1509-1511.

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