高效液相色譜法測定降逆化積口服液中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量

摘要：目的： 建立高效液相色譜法測定降逆化積口服液中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量。 方法： 色譜柱：Phenomenex C18柱，流動相：乙腈―0.085%磷酸溶液（15：85），流速為1.0mL·min-1，柱溫：室溫，檢測波長：225nm。 結果： 木香烴內酯、去氫木香內酯進樣量分別在1.581μg·mL-1～15.81μg·mL-1（r=0.9998），2.25μg·mL-1～22.5μg·mL-1 （r=0.9996），范圍內線性關系良好，平均加樣回收率（n=9）分別為98.78%、98.81%、。 結論： 建立了HPLC測定木香烴內酯、去氫木香內酯的含量，提供了更好的控制該藥質量的方法。

關鍵詞： 高效液相色譜法 ；降逆化積口服液；木香烴內酯

【中圖分類號】R286 【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-3763（2014）04-0013-02

Simultaneous Determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid by HPLC

Abstract： Objective ： To establish an HPLC method for the Simultaneous determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid Methods The column C18 was used with CAN-0.085%H3PO4 mobile phase， the flow rate was 1.0ml.min-1， the column temperature was Room Temperature and the detection wavelength was at 225 nm. Results The calibration curves were linear within the range of 1.581μg·mL-1～15.81μg·mL-1（r=0.9998）fo Costunolide ； 2.25μg·mL-1～22.5μg·mL-1 （r=0.9996）for Dehydrocostuslactone； The average recovery（n=9）of the three components in JiangNiHuaJi Oral liquid were98.78% and 98.81% .Conclusion The mothod is specific， accurate and reproducible， and it can be used for the quality control.

Key words： HPLC； JiangNiHuaJi Oral liquid； Costunolide

降逆化積口服液是由木香、枳殼、檳榔、陳皮等七味藥材制成的中藥制劑。具有順氣降逆，消積止痛的功效。主用于中老年氣滯、食積證、癥見脘腹脹滿、腹痛、便秘及手術后腹脹等癥。原有質量標準為《醫院自制制劑注冊質量標準》，無主藥木香的含量測定，本實驗參照中國藥典2010年版一部[1]采用高效液相色譜法同時測定處方君藥木香中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量，樣品不需要特殊處理，具有簡便、準確、無干擾的特點。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20ATVP高效液相色譜儀；CBL9960A超聲波清洗器。對照品：木香烴內酯（批號：111524-200503）、去氫木香內酯（批號：111525-200505），降逆化積口服液（批號：130220，130511，130925，140218）；乙腈、磷酸為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：

色譜柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈―0.085%磷酸溶液（15：85）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫；檢測波長：225nm；進樣量：10μL。按木香烴內酯、去氫木香內酯計算，理論板數均不低于2000[2]。

2.2 對照品溶液制備：

精密稱取經減壓干燥（真空度0.075MPa，溫度20℃，干燥劑五氧化二磷）24h的木香烴內酯15.81mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成木香烴內酯質量濃度為158.1μg·mL-1對照品溶液①；另精密稱取經減壓干燥（真空度0.075MPa，溫度20℃，干燥劑五氧化二磷）24h的去氫木香內酯對照品11.25mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成去氫木香內酯質量濃度為225.0μg·mL-1混合對照品溶液②[3]。分別精密量取上述對照品溶液①②各5ml，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成木香烴內酯質量濃度為15.81μg·mL-1 ，去氫木香內酯質量濃度為22.5μg·mL-1對照品混合溶液③。

2.3 供試品溶液制備：

精密量取本品5ml，置25mL容量瓶中，加甲醇適量，分2次超聲處理（功率250W，頻率33kHz），每次時間為20min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得[4]。

2.4 陰性對照溶液的制備：

取缺木香的陰性制劑適量（約相當于供試品的量），按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.5 線性關系考察：

精密吸取上述對照品混合溶液③1.0、2.0、4.0、6.0、8.0，10.0mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各取 10μL分別注入液相色譜儀測定，記錄峰面積，以峰面積為縱座標，以進樣量為橫座標，繪制標準曲線。結果見表1。

2.6 精密度試驗：

按2.1項下的色譜條件，用同一供試品溶液連續進樣6次，每次10μL，分別測得各次峰面積。結果木香烴內酯、去氫木香內酯RSD值分別為0.84%，0.80%。

2.7 穩定性試驗：

取同一對照品混合溶液在0，2，4，8，10，12，15， 18， 24h分別進樣10μL，結果6次進樣木香烴內酯峰面積的RSD為0.90%；去氫木香內酯峰面積的RSD為0.83%，結果表明供試品溶液在24h內是穩定的。

2.8 陰性對照實驗：

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，按2.1項下的色譜條件分別進樣測定，記錄色譜圖。結果顯示，陰性對照溶液對測定結果無干擾。見圖1C。

2.9 重復性試驗：

取同一批樣品（批號：130925），按2.3項下的供試品溶液制備方法，平行制備6份，依法測定，木香烴內酯含量均值為28.2μg·ml-1，RSD=0.84%；去氫木香內酯含量均值為47.8μg·ml-1，RSD=0.93%，結果表明該方法的重復性好。

2.10 回收試驗：

取本品（批號：130925，含量：木香烴內酯28.2μg·ml-1；去氫木香內酯47.8μg·ml-1）5ml，共9份，置25mL容量瓶中，分別精密加入濃度為158.1μg·mL-1的木香烴內酯對照品溶液①、225.0μg·mL-1去氫木香內酯對照品溶液②0.8，0.8，0.8，1.0，1.0，1.0，1.2，1.2，1.2mL，加入甲醇適量，分兩次超聲處理，每次20min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取濾液按2.1項下的色譜條件進行含量測定并計算回收率。結果見表2。

2.11 樣品的測定：

取4批樣品，按2.3項下的供試品溶液制備方法制備，精密吸取10μL，注入液相色譜儀測定，以外標法計算樣品中木香烴內酯、去氫木香內酯的含量（見表3）。

表3 樣品含量測定結果表（mg·片-1，n=3）

3 討論

流動相的優化 在研究試驗過程中以甲醇—水（25：75）為流動相系統時，發現色譜峰出峰時間長，柱效低，分離效果差且色譜峰拖尾，改用乙腈—0.085%磷酸溶液（15：85）系統時出峰時間適中，色譜峰較尖銳，上述問題得到改善，柱效及分離度均達到要求。

本試驗建立的測定含量的方法可有效控制降逆化積口服液的產品質量，具有簡便、靈敏、準確且專屬性較強的優點，對制劑質量進行更好的控制，具一定的實際意義。

參考文獻：

[1]中國藥典2005年版.（一部）[S] 2005：附錄57.

[2]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標準操作規范[M]. 北京：中國醫藥科技出版社， 2005： 79-95.

[3]劉曉哲.多波長RP-HPLC法同法測定肥兒丸中木香烴內酯、去氫木香內酯、去氫二異丁香酚的含量[J].中成藥，2014， 36（1） ： 98-102

[4]包桂花，包同力噶.高效液相色譜法測定蒙藥壯西六味散中中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量[J].中國醫院藥學雜志，2013，33（22）：1900-1903.