淺析血脂檢驗的現狀及標本的采集與處理

嚴君潔

血脂檢驗對于臨床高脂血癥和異常脂蛋白血癥的診斷及動脈粥樣硬化﹙AS﹚性心血管﹙如冠心病﹚的危險評估和防治具有重要意義，并已經滲透應用于其它諸多臨床相關專業疾病的研究。我國血脂、脂蛋白及其與AS關系的研究雖然起步較晚，但改革開放的20多年以來，在血脂的基礎與臨床研究等方面發展迅速。血脂檢驗及其臨床應用已越來越受到臨床各學科的重視。本文旨在探討血脂檢驗的方法學，試劑的選擇原則與血脂測定的技術指標，分析前的變異對血脂檢驗結果的影響進行淺析。

1 血脂檢驗的方法學

臨床血脂檢驗主要包括血清總膽固醇﹙TC﹚、甘油三酯﹙TG﹚、高密度脂蛋白膽固醇﹙HDL-C﹚、低密度脂蛋白膽固醇﹙LDL-C﹚、載脂蛋白A1、載脂蛋白B、脂蛋白﹙a﹚測定。

1.1血清TC測定 血清TC測定一般可分為化學法和酶法兩大類。目前國內建議酶法如膽固醇氧化酶-過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法作為臨床實驗室測定TC的常規方法。

1.2血清TG測定 二氯甲烷-硅酸-變色酸法是美國疾病預防與疾控中心﹙CDC﹚測定TG采用的參考方法。建議酶法〔如甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶-4氨基安替比林和酚法〕作為臨床實驗室血清TG的常規方法。

1.3血清 HDL-C測定 超速離心結合ALBK法為HDL-C測定的參考方法。建議勻相測定法作為臨床實驗室測定血清HDL-C的常規方法。

1.4血清HDL-C測定 超速離心結合ALBK法為LDL-C測定的參考方法。建議勻相測定法作為臨床實驗室測定血清LDL-C的常規方法。

1.5血清apoA1和apoB測定 目前尚無公認的血清apoA1和apoB測定的參考方法。建議免疫濁度法作為臨床實驗室測定血清的常規方法。

1.6血清Lp﹙a﹚測定 目前尚無公認的血清Lp﹙a﹚測定的參考方法。建議免疫濁度法作為臨床實驗室測定血清Lp﹙a﹚的常規方法。

2 血脂檢驗試劑的選擇原則與測定的技術指標

2.1不精密度與不準確度 各實驗室進行血脂檢驗并非要求統一的測定方法，而是要求對同一批標本血脂測定值取得基本一致，衛生部檢驗中心及各省檢驗中心均要求各縣級醫療單位實驗室參加其組織的室間質評活動。要求測定值在可允許的"不精密度"﹙用變異系數CV表示﹚及不準確度﹙用偏差表示﹚范圍內。對于TC、TG、HDC-C和LDCL-C 4項，建議不精密度應分別不大于3%、5%、4%、4%，不準確度應盡量分別不大于±3%、±5%。±5%、±4%。對于apoA1、apoB和Lp﹙a﹚3項，建議不精密度應分別不大于3%、3%和4%，不準確度應分別不大于±5%、±5%和±10%。

2.2靈敏度 酶法測定血清TC顯色劑用酚時，TC5.17mmoL∕L時的吸光度約0.30～0.35，故A500nm=0.005時的TC濃度約0.08nmol/L.酶法測定TG靈敏度為2mmol/LTG的吸光度A500nm≧0.2.勻相測定法測定HDL-C、LDL-C時，最小檢測水平至少為0.01mmol/L。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB檢測下限至少為0.5g/L，Lp﹙a﹚至少為5mg/L。

2.3可檢測上線 酶法測定血清TC血清與酶試劑用量之比為1：100時，測定上線為13mmol/L。酶法測定TG線性至少應達11.3mmol/L。勻相測定法測定HDL-C、LDL-C時線性至少分別應達2.59mm/L和7.77mmol/L。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB線性至少不低于2.0g/L，Lp﹙a﹚至少應達800mg/L。

2.4干擾因素 酶法測定TC時，血紅蛋白高于2g/L會引起正干擾，膽紅素﹥0.1g/L時有明顯負干擾。酶法測定TG干擾因素與膽固醇測定類同。膽紅素﹥100umol/L時出現負干擾。血紅蛋白的干擾是復雜的。它本身的紅色會引起正干擾，溶血后，紅細胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油產生負干擾。當Hb﹤1g/L時反映為負干擾，Hb﹥1g/L時反映出正干擾，但Hb≤2g/L時干擾不顯著。明顯溶血標本不宜作TG測定。TG﹤5.65mmol/L、膽紅素﹤513umol/L、Hb﹤5g/L時，對勻相測定法測定HDL-C、LDL-C，免疫濁度法測定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚測定結果基本無干擾。

2.5試劑穩定性 干粉試劑未開瓶2～8℃應至少穩定1年。復溶后的膽固醇和TG酶試劑在2～8℃應至少穩定兩天。在此期間出現肉眼可辨的粉紅色建議不要使用。液體試劑未開封的試劑盒在2～8℃應至少穩定6個月，開封后應至少可保存1個月。

2.6反應速度 酶法測定血清TC反應到達終點37℃不應超過5min。酶法測定TG37℃不應超過10min.勻相測定法測定HDL-C和LDL-C反應到達終點時間37℃不應超過10min。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚可根據自動分析儀反應曲線確定讀取終點時間，一般以8～10min為宜。

3 樣本的采集與處理

3.1受檢者的準備 除TC測定不一定用空腹血外，測定TG、Lp與apoA1、apoB時受檢者﹙體檢對象或患者﹚應在禁食﹙可少量飲水﹚至少12h后抽血。24h內不飲酒，以免影響TG水平。對于體檢對象抽血前應有兩周時間保持平時的飲食習慣，近期內體重穩定，無急性病、外傷、手術等意外情況。妊娠后期各項血脂指標都會增高，應在產后終止哺乳后3個月檢查才能反映其基本血脂水平。

3.2靜脈采血 除非是臥床的患者，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，影響血脂水平。例如站立5min可使血脂濃度提高5%，15min提高16%，故在抽血前至少應靜坐5min。靜脈穿刺過程止血帶使用不應超過1min。靜止阻滯5min可使TC增高10%～15%。

3.3抗凝劑 我國生化實驗室多用血清作血脂分析。如用血漿，多主張用EDTA.2Na抗凝劑﹙1mg/ml血﹚，EDTA抗凝血漿中的TC和TG水平比血清約低3%。EDTA濃度越高血漿中TC和TG偏低越明顯。

3.4標本處理 血標本應盡快送往檢驗科，室溫下放置30～45min后離心，放置時間不得超過3h。血清必須吸出，轉移至有蓋小試管中﹙或有封口膜防止水分揮發﹚，如不能當天測定，可暫存4℃冰箱，至少可穩定4d。如需長期保存，用作TC測定者-20℃已足夠，用作TG、Lp、apo測定者標本最好保存在-70℃，不要反復冰凍與融化。編輯/劉小燕