不同血液保存抗凝劑對采集紅細胞影響的實驗研究

李大鵬　呂丹　李震等

摘要：目的 設計添加谷氨酰胺的血液保存抗凝劑及探討對紅細胞的影響，總結其臨床意義。方法 選取標本分實驗組A和對照組B，每組均為相對應的1～10管，A組抗凝劑為標準枸櫞酸鈉溶液和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液，B組抗凝劑為標準枸櫞酸鈉液，比較兩組標本在采血后第3、6、9、12d的血K+檢測結果，并予以統計分析。結果 兩組標本第3、6、9、12d血K+均高于正常值，A與B組內比較均有顯著性差異（P<0.05）；A與B組間比較，第3d檢測值有顯著性差異（P<0.05）。結論標準枸櫞酸鈉溶液加入丙氨酰谷氨酰胺注射液制成新型血液保存抗凝劑，對紅細胞抗凝及保護作用優于標準枸櫞酸鈉溶液。

關鍵詞：血液；抗凝劑；丙氨酰谷氨酰胺；谷氨酰胺；枸櫞酸鈉

枸櫞酸鈉為常用的血液抗凝劑，枸櫞酸鈉、枸櫞酸、無水葡萄糖可制成常用的ACD配方血液保存液。血液抗凝劑是影響采集存儲紅細胞的主要因素[1-2]，為提高血液抗凝及紅細胞保存效果，筆者選擇添加谷氨酰胺（glutamine，Gln）方式制成新型血液保存抗凝劑，并通過采集存儲血液中血K+指標研究不同抗凝劑對采集紅細胞影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1新型抗凝劑制備 由于Gln較難溶于水，且丙氨酰谷氨酰胺在血液中可迅速分解為丙氨酸和Gln，故添加Gln方式選取丙氨酰谷氨酰胺注射液（四川科倫，50ml：10g），加入0.9%氯化鈉注射液50ml稀釋。

按丙氨酰谷氨酰胺使用時其在與載體溶液混合液中最大濃度不能超過3.5%的要求，丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液按1：2比例加入標準枸櫞酸鈉溶液制成新型血液保存抗凝劑。新型抗凝劑按其中標準枸櫞酸鈉溶液與全血1：9體積比進行采血，4℃～6℃條件下保存。

1.2新型抗凝劑評價

1.2.1方法 選擇添加與未添加Gln的血液保存抗凝劑采集血液并進行對照比較。

選20只試管均分為A、B組。A組為實驗組，1～10管中分別加入3.8%枸櫞酸鈉溶液0.2ml和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液0.1ml；B組為對照組，1～10管分別加入3.8%枸櫞酸鈉溶液0.2ml。采集10名男性無償獻血官兵未抗凝靜脈血，分別對應加入A、B兩組1～10試管中，均加入1.8ml，充分搖勻并放置到4℃～6℃冰箱中保存待檢。

采血后第3、6、9、12d，應用OlympusPu-2400全自動生化分析儀及其配套試劑，按操作規程進行標本血K+測定，正常范圍3.5～5.5mmol/L。

1.2.2統計學方法 檢驗數據以均數±標準差（x±s）表示。選擇SPSS13.0統計學軟件進行處理，組間及組內比較采用均數t檢驗，P<0.05為具有顯著性差異。

2 結果

采血后第3、6、9、12d檢測血K+，A、B兩組標本血K+均高于正常范圍。

A、B兩組組內不同時間檢測數據均分為①～④組，以（x±s）表示。組內均按時間進行①②、②③、③④比較，均存在顯著性差異（P<0.05）（見表1），提示血K+隨標本放置時間延長而不斷升高。

A、B兩組組間均按①～④分別采用兩樣本t檢驗（見表1）：①t=3.088、P<0.05，有顯著性差異；②t=0.792、P<0.5，無顯著性差異；③t=0.168、P<0.5，無顯著性差異；④t=0.331、P<0.5，無顯著性差異。提示2種抗凝劑在采集血液3d內對紅細胞影響存在顯著性。

A、B兩組紅細胞外觀檢測：采血后第16dB組發生肉眼可見溶血，第19dA組發生肉眼可見溶血。見表1。

3 討論

枸櫞酸鈉是國際上最通用的抗凝劑，是血液保存液中基本抗凝物質，具有抗凝及阻止溶血發生作用，應用十分廣泛[3-4]。科學改良現有血液保存抗凝劑，提高臨床輸血及檢驗工作質量，成為當前重要研究課題[1，5]。

Gln可減少和對抗自由基對機體組織器官的損傷，提高血漿中谷胱甘肽水平及機體抗氧化水平[6，7]，其被酶解產生NH4增加紅細胞膜的流動性及對機械壓的抗性，減少自由基對紅細胞膜的損傷而產生保護作用。為此，本文設計添加Gln的新型抗凝劑并選擇紅細胞外血K+作為評價指標，研究不同抗凝劑對采集存儲紅細胞的影響。

血液保存液是影響血液采集存儲的主要因素，紅細胞膜是最易受自由基攻擊的目標。隨血液存儲時間延長，血液中自由基明顯增多，導致細胞膜脂質過氧化，紅細胞膜過氧化脂質顯著增高，紅細胞膜Na+K+-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶活性顯著下降[8]，使 Na+、Ca2+等轉運失常，紅細胞內Na+、Ca2+含量升高和鉀離子外流，紅細胞內鉀離子降低，其膜上脂蛋白和脂質逐漸喪失，紅細胞內2.3二磷酸甘油酸也逐漸降低，紅細胞逐漸變形且脆性增加易發生溶血[9-10]，細胞外血K+成為反映紅細胞膜穩定及代謝程度的重要標志，本文A、B兩組組內不同時間檢測血K+結果證明了這一點。

本文血液采集3d內A、B2組組間比較存在顯著性差異（P<0.05），表明新型血液抗凝劑和標準枸櫞酸鈉溶液對紅細胞保護作用存在顯著性，新型抗凝劑對紅細胞保護作用優于傳統抗凝劑；采血后第6、9、12d兩組組間數據比較均無顯著性差異（P<0.5），可能與2種抗凝劑均未加入葡萄糖有關，因保存期內全血紅細胞代謝所需能量主要由葡萄糖提供[11]。

參考文獻：

[1]戴小輝.兩種抗凝劑測定紅細胞沉降率的結果對比[J].華西醫學，2009，24（11）：3024-3025.

[2]彭春花，王秀華，陳元媛.血凝試驗檢驗結果的影響因素分析[J].檢驗醫學與臨床，2010，7（16）：1733-1735.

[3]聶成，江榕，王聯群，等.枸櫞酸局部抗凝在血液濾過治療中的應用研究[J].江西醫藥，2010，46（2）：153-155.

[4]張微，徐國美，劉青寧.不同配方洗滌液對濃縮血小板的洗滌效果研究[J].中國輸血雜志，2010，23（11）：944-946.

[5]陳云慶.血液保存液II在高危出血患者血液透析封管中的應用體會[J].吉林醫學，2011，32（32）：6773-6774.

[6]熊正英，程春鳳，戰旗.谷氨酰胺及運動訓練對大鼠血液某些生化指標的影響[J].西安體育學院學報，2003，20（3）：48-50.

[7]郭永軍，孔媛媛，關永東，等.外源性補充谷氨酰胺對危重病患者的影響[J].中華全科醫學，2012，10（1）：49，97.

[8]王繹，張斌，李邦翅，等.間歇性低氧及運動隊大鼠紅細胞膜Na+K+-ATP和Ca2+Mg2+-ATP酶活性的影響[J].武警醫學院學報，2009，18（7）：597-600.

[9]劉海波.游離血紅蛋白指標在懸浮紅細胞質量控制中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2012，33（21）：2639，2667.

[10]王殿昌，王秀英，張秀俊.CPD血液保養液保存全血的生化指標動態觀察[J].實用藥物與臨床，2005，8（2）：55-56.

[11]崔瑩，吳春雪，楊龍，等.丙氨酰谷氨酰胺對急性肺損傷患者的保護作用及其機制初探[J].臨床薈萃，2012，27（4）：298-301.編輯/哈濤