不同產地煙草中1—脫氧1—L—脯氨酸—D—果糖化合物含量分析

陳修紅　王葉　王軍

摘要[目的] 分析比較不同產地煙葉中1脫氧1L脯氨酸D果糖（ProFru）化合物含量的差異。[方法] 以水為溶劑，在超聲輔助條件下提取煙葉樣品中的ProFru物質，經過C18SPE固相萃取柱分離后利用高效液相色譜串聯三重四級桿質譜對國內5個產地的30個煙草樣品進行定量分析。[結果] HPLCMS/MS方法適用于煙葉中ProFru化合物的準確分析，測定煙草樣品中ProFru化合物的含量在3～7 mg/g。四川、云南地區的煙葉樣品中ProFru化合物的含量相對最為豐富。[結論]研究可為了解各煙葉性質，科學選用煙葉進行配方提供參考依據。

關鍵詞煙草；1脫氧1L脯氨酸D果糖；液相色譜質譜串聯；產地

中圖分類號S572文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07557-02

是氨基酸與葡萄糖通過美拉德反應生成的關鍵中間產物之一，在煙草烤制、陳化、加工及燃吸等過程中均有不同程度的產生與積累[1]。這類化合物是重要的非揮發性香味前體物質，對卷煙的煙氣質量有重要影響[2]，也是評價煙草感官質量和煙草加香研究的重要目標物之一[3-5]。我國煙草分布廣泛，煙草種質資源豐富[6]，不同產地和品種的煙葉經過烘烤和醇化后其中的香味物質含量有較大區別，通過分析其中香味物質前體Amadori化合物的含量，對了解煙葉風味品質，選擇煙葉提高煙葉配方科學性具有一定的借鑒意義。

烤煙型煙葉中的Amadori化合物以1脫氧1L脯氨酸D果糖（ProFru）含量最為豐富，其含量約占Amadori化合物總含量一半以上，該物質對煙葉吸味具有積極貢獻[7]，對評價煙葉質量具有參考價值。筆者采用高效液相串聯質譜技術[8]對5個產地的30個樣品中1脫氧1L脯氨酸D果糖化合物進行定量分析，比較該化合物在這批不同產地煙葉中的含量，以期為了解各煙葉性質，科學選用煙葉進行配方提供參考依據。

1材料與方法

1.1材料原材料：來自四川、云南、安徽、山東、河南5個產地，共30個烤煙單料煙葉樣品。主要試劑：超純水，去離子水經過MilliQ超純水儀制得，18.2 MΩ·cm；甲醇，色譜級，北京百靈威科技有限公司；甲酸，純度99%，Acros公司；ProFru物質，自制[9]。

主要儀器：Agilent 1260液相色譜儀，配置在線脫氣機、二元泵、自動進樣器、柱溫箱、可變波長紫外檢測器，美國Agilent公司；Agilent 6460QQQ質譜儀，美國Agilent公司；ZORBAX SBC18色譜柱（3.5 μm，2.1×150 mm），美國Agilent公司；ProElut C18SPE固相萃取小柱（100 mg/1 ml），DIKMA公司；ASE12固相萃取儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；KQ300型超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；FA1104B萬分之一電子天平，上海越平科學儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1固相萃取小柱活化處理。用5 ml甲醇淋洗小柱，再用5 ml超純水淋洗，控制流速在2滴/s。

1.2.2樣品處理。煙葉樣品冷凍干燥后磨成60目粉末，分別稱取300 mg左右（精確到0.1 mg）的煙草粉末，定量加入200 ml超純水，室溫超聲20 min，定容到250 ml，振蕩5 min后再靜置5 min。取上清液用0.45 μm微孔水系濾膜過濾，再取2 ml濾液用C18SPE固相萃取柱純化，取中間流出的1 ml液體作為樣液，分析備用。

1.2.3標準液制備。準確稱取33.4 mg ProFru 化合物用超純水溶解，定容于25 ml容量瓶中，配制成濃度為1.336 mg/ml標準品儲備液，4 ℃冰箱保存備用。稀釋成濃度為200.4 μg/ml的標準品母液，分別取50、100、200、300、500 μl標準品母液于5 ml容量瓶中，用超純水定容成不同濃度的標準液。

1.2.4液質聯用條件。ZORBAX SBC18為色譜柱，柱溫30 ℃，流動相為含0.3%甲酸的甲醇：含0.3%甲酸的水以65∶35（V∶V）等度洗脫，流速為0.3 ml/ min，進樣量20 μl；三重四級桿質譜采用多反應檢測（MRM）模式，電噴霧正離子模式（ESI+）為離子化條件，毛細管噴霧電壓為3 500 V，干燥氣溫度300 ℃，干燥氣流量10 L/min，離子源霧化氣壓力310 kPa，鞘氣溫度250 ℃，鞘氣流量11 L/min。

2結果與分析