腸炎沙門氏菌SDA—瓊脂糖凝膠電泳檢測技術研究

尼秀媚　魏曉棠

摘要[目的] 建立腸炎沙門氏菌的SDA快速檢測方法。[方法] 根據腸炎沙門氏菌invA基因片段設計鏈置換擴增（SDA）引物， 建立腸炎沙門氏菌的SDA快速檢測方法， 并對設計的引物的靈敏度和特異性進行研究。[結果] 成功建立了腸炎沙門氏菌的SDA快速檢測方法，SDA反應成功擴增了目標序列。建立的SDA檢測技術對腸炎沙門氏菌的檢測靈敏度達到7.0×103 cfu/ml，且特異性良好。[結論] 試驗選取的序列和引物具有較高的特異性，可用于腸炎沙門氏菌的特異性檢測。

關鍵詞 腸炎沙門氏菌；鏈置換擴增；瓊脂糖凝膠電泳

中圖分類號S852.6文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07443-02

人類腸炎沙門氏菌發病率持續增高，已引起了人們的廣泛關注，并成為農業生產和食品安全的重要研究課題之一[1]。沙門氏菌食物中毒約占細菌性食物中毒的42.6%～60%，世界貿易組織（WTO）已將沙門氏菌列為具有中等危害和嚴重危害的食物傳播性病原[2]，而經蛋傳播是腸炎沙門氏菌感染癥的最重要傳播途徑之一。雞蛋是老百姓餐桌上必不可少的食物之一，因此對腸炎沙門氏菌的檢測就顯得尤為重要[3]。

目前，腸炎沙門氏菌的檢測方法有PCR技術、ELISA方法、LAMP方法等，各種方法既有優點，也有缺點。鏈替代擴增技術（SDA）最早是由Walker等于1992年開發，這是一種基于酶促反應的DNA 體外等溫擴增技術，主要利用限制性內切酶剪切DNA 識別位點的能力和DNA 聚合酶在切口處向3延伸并置換下游序列的能力，在等溫條件下進行擴增。整個過程由準備單鏈DNA 模板、生成兩端帶酶切位點的目的DNA 片段、SDA 循環擴增3 個步驟組成[4]。SDA 技術的突出優點是擴增效率高，反應時間短，目標基因能在15 min 內擴增109～1010倍[5]。筆者采用SDA方法[6-7]用2對引物對腸炎沙門氏菌進行檢測，建立腸炎沙門氏菌的SDA快速檢測方法。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 菌株。試驗所用的7株腸炎沙門氏菌及其近緣菌株購自中國普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC），具體見表1；標準菌株分別購自美國典型菌種保藏中心（ATCC）和中國醫學細菌保藏管理中心（CMCC）。

1.1.2培養基。LB培養基：10 g/L蛋白胨、5 g/L酵母提取物、10 g/L NaCl；LB固體培養基：在LB培養基中加入15 g瓊脂粉。