ASE—SPE—HPLC—MS/MS檢測水產品中阿維菌素類藥物殘留

周秀錦　周向陽　邵宏宏　顏建波　傅謐妮

摘要[目的]建立水產品中阿維菌素、伊維菌素、莫西菌素、愛普利諾菌素、多拉菌素5種阿維菌素類藥物殘留量的快速溶劑萃取-液相色譜-串聯質譜（ASESPEHPLC/MS/MS） 測定方法。[方法]樣品采用快速溶劑萃取，乙腈為提取液，提取液濃縮后經C18小柱凈化；經SHISEIDO CAPCELL PAK C18 MG S5質譜柱分離，乙腈 2.5 mmol/L乙酸銨水（0.1%乙酸）溶液為流動相，在電噴霧電離負離子（ESI-）、多反應監測模式（ MRM ）下測定5種阿維菌素類藥物殘留，基質標準曲線外標法定量。[結果]5種阿維菌素類藥物在2.0～50.0 μg/kg范圍內線性關系良好，相關系數大于0.997，莫西菌素在5.0、10.0、20.0 μg/kg，其他4種化合物在2.0、5.0、10.0 μg/kg加標水平的平均回收率為81.7%～93.5%，相對標準偏差為7.54%～13.26%。[結論]該方法提取效率高、凈化較徹底，適合水產品中阿維菌素多藥物殘留量的測定。

關鍵詞快速溶劑萃取；液相色譜串聯質譜；阿維菌素類藥物殘留

中圖分類號S481+.8文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07406-03

阿維菌素類藥物（AVMs）是一種大環內酯雙糖類化合物，是一種高效廣譜的生物源性驅蟲藥，其結構新穎，作用機理獨特，廣泛應用于作物種植、動物養殖中[1]。AVMs包括阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素、莫西菌素、愛普利諾菌素等，按世界衛生組織（WHO）五級分級標準，AVMs屬高度化合物，對環境或生物直接造成影響，日本《肯定列表制度》規定鰻魚中阿維菌素和多拉菌素的限量為5.0 μg/kg。阿維菌素類藥物的檢測方法主要有免疫化學法[2-3]、高效液相色譜法[4-6]、液相色譜-串聯質譜法[7-10]等。免疫化學法由于方法繁瑣且檢出限達不到要求而不能應用于實際批量檢測；液相色譜法檢出限較高，可能造成假陰性的出現；而高效液相色譜-串聯質譜法則具有較高靈敏度，能夠滿足水產品中對阿維菌素類藥物最低檢出限的要求，目前存在的問題是回收率不高。ASE技術是一種快速、簡單、安全、重復性好、樣品實用性強的前處理方法，該方法利用提高溫度和增加壓力來提高萃取的效率，使用常規的溶劑對固體或半固體樣品進行萃取。筆者采用ASE和SPE技術進行樣品前處理，結合液質聯用技術進行檢測，建立了水產品中阿維菌素、伊維菌素、莫西菌素、多拉菌素和愛普利諾菌素的檢測方法，旨在為水產品中阿維菌素類藥物殘留的快速檢測提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑。三氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、乙酸銨、甲酸均為優級純；乙腈、甲醇均為色譜純；硅藻土；其他試劑均為分析純；水為超純水。固相萃取柱：Varian C18（500 mg，6 ml），或相當者，使用前依次用15 ml甲醇和10 ml水活化。0.22 μm有機系濾膜。

1.1.2藥劑。阿維菌素類藥物標準品：阿維菌素，CAS.No：71751412，Lot：21204，97.0%；愛普利諾菌素，CAS.No：123997262，Lot：20516，92.5%；莫西菌素，CAS.No：113507065，Lot：20827，87.0%；伊維菌素，CAS.No：70288867，Lot：10506，96.0%；多拉菌素，CAS.No：117704253，Lot：30516，96.0%。標準儲備液：準確稱取阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素、莫西菌素、愛普利諾菌素標準品各10.0 mg，用乙腈溶解并定容至100.0 ml，配制成100.0 mg/L，4 ℃避光保存。標準工作液：臨用前根據需要用乙腈稀釋成適當的標準系列工作液。

1.1.3主要儀器。高效液相色譜串聯質譜儀（API4000QTRAP）、ASE200快速溶劑萃取儀（美國戴安公司）和真空固相萃取裝置。