HPLC—UV法測定黃芪干燥根中黃芪甲苷的含量

姜麗麗　張傳領(lǐng)　蘇麗娟　王秀娟　牛麗麗　溫建勛

摘要[目的]建立黃芪干根中HPLC-UV法測定黃芪甲苷的方法，同時比較蒙古黃芪、野生黃芪和膜莢黃芪3種不同來源樣本的黃芪甲苷含量。[方法]采用HPLC-UV法，色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm），流動相為乙腈∶水（32∶68），流速1.0 ml/min，檢測波長203 nm。[結(jié)果]黃芪甲苷在0.05～0.50 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（ r=0.999），平均回收率為98.216%（RSD=2.85%） ；不同來源黃芪甲苷含量比較結(jié)果為野生>膜莢≈蒙古。[結(jié)論]建立的HPLC-UV法測定黃芪甲苷含量相對穩(wěn)定，方法簡便，為今后黃芪干根中黃芪甲苷含量的測定提供了方法參考。

關(guān)鍵詞HPLC-UV；黃芪甲苷；含量；干燥根

中圖分類號S567文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07381-03

30黃芪為常用的中藥材之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，我國歷版藥典均有收載。黃芪是豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus（Fisch.） Bge.var.mongholicus（Bge.） Hsiao]或膜莢黃芪[Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.]的干燥根，味甘性微溫，具有補氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌之功效[1]。黃芪中主要成分為皂苷類、黃酮類、多糖類等， 其中的黃芪甲苷是黃芪藥材中的重要活性成分，具有抗腫瘤、抗炎、清除自由基、增強免疫力、降糖和改善心血管疾病等作用[2-4]。黃芪甲苷的含量是評價黃芪及其制劑質(zhì)量的重要指標，且許多中成藥也以黃芪甲苷作為該品種的指示成分，在《中國藥典》中黃芪甲苷被作為黃芪質(zhì)量檢測的標志物。筆者在前人研究[5-6]的基礎(chǔ)上，試用HPLC-UV法測定黃芪干燥根中的黃芪甲苷含量，同時對野生、膜莢、蒙古3種不同來源的黃芪樣本進行了黃芪甲苷含量比較。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料。人工栽培樣本為2年生的來自內(nèi)蒙古興和、達茂旗、赤峰（蒙古黃芪）、興安盟（膜莢黃芪）的黃芪干燥根以及來自甘肅的黃芪干根切片（成品）；野生黃芪為采自內(nèi)蒙古武川縣的多年生黃芪。

1.1.2 試劑。黃芪甲苷對照品（購于中國藥品生物制品檢定所，批號：110781-200613），D101型大孔吸附樹脂（購自滄州寶吸附材料有限公司），色譜級甲醇、色譜級乙腈、水飽和正丁醇、氨水溶液、去離子純水、無水乙醇。

1.1.3儀器及耗材。TL2010高通量組織研磨儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RV10）、島津高效液相色譜儀（LC20A型，紫外檢測器）、電子天平、水浴鍋、超聲波清洗器、索式提取器、玻璃層析柱、圓底燒瓶、分液漏斗、0.45 μm慮器等。

1.2 試驗方法

1.2.1 黃芪甲苷的制備。研磨后精密稱取4 g黃芪粉末于索式提取器中，按藥典[1]的方法提取，用5 ml色譜級甲醇定容，最后用0.45 μm濾器過濾于棕色樣品瓶中，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 對照品溶液制備。精密稱取黃芪甲苷0.002 5 g，加甲醇定容至5 ml容量瓶中，搖勻。用0.45 μm濾器過濾后，轉(zhuǎn)至棕色瓶中4 ℃保存。

1.2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性。 色譜柱為Kromail C18柱（250 mm×4.6 mm），流動相為乙腈-水（32∶68），流速為1.0 ml/min，檢測波長為203 mm，柱溫箱35 ℃。

1.2.4 測定法。自動進樣器吸取對照溶液和供試品溶液各20 μl上樣，進入高效液相色譜儀，測定，記錄色譜峰面積，以外標一點法計算含量。

1.2.5方法學的建立。從線性范圍、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率5個方面對HPLC-UV法測定黃芪甲苷含量進行方法學考察。

1.2.6 樣品含量測定。用上述建立的方法，對不同地區(qū)及來源的黃芪樣品進行甲苷含量測定，進一步比較其含量差異。

2結(jié)果與分析

2.1線性范圍 精密稱取黃芪甲苷標準品，適量，加甲醇制成對照品溶液（相當于每1 ml含0.5 mg黃芪甲苷），精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml分別置于10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液各20 μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以黃芪甲苷峰面積為縱坐標Y、溶液濃度為橫坐標X，得到回歸方程為y=2×106X-5 940，R2=0.999（n=5），結(jié)果表明，在0.05～0.50 mg/ml，范圍內(nèi)，黃芪甲苷對照品濃度與色譜峰面積值呈良好的線性關(guān)系（圖1）。