HPLC—DAD測定大茶樹和小茶樹的西湖龍井茶中EGCG的含量

蒲首丞　潘立新　葉玲仙　陸方明

摘要[目的] 采用HPLCDAD對西湖龍井茶中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯（ EGCG） 的含量變化進行分析。[方法] 采用Agilent C18色譜柱（4.6 mm ×150 mm， 5 μm），流動相：甲醇∶水（2%乙酸）15∶85；流速：1.0 ml/min；檢測波長：276 nm；柱溫：35 ℃。[結果] EGCG線性范圍為0.152～3.040 μg，相關系數r為1，平均回收率97.61%，RSD為6.61%。[結論] 該方法精密度、準確度良好，穩定性高，能簡便、快速地測定大小茶樹的西湖龍井茶中的EGCG含量。

關鍵詞HPLCDAD；西湖龍井茶；表沒食子兒茶素沒食子酸酯；含量

中圖分類號S571文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）12-03714-02

基金項目浙江省教育廳項目（Y200908478）。

作者簡介蒲首丞（1978-），男，浙江杭州人，講師，博士，從事天然產物化學研究。

龍井茶位列我國十大名茶之一，具有1 200多年歷史。西湖龍井茶產于浙江杭州西湖區[1]。兒茶素作為西湖龍井主要的生物活性成分之一，主要化合物包括表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG） 和表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）等[2-3]。EGCG是西湖龍井中含量較高的兒茶素，現代研究表明，EGCG具有顯著的抗氧化、抗腫瘤、抗突變和心血管疾病等作用，能夠提高人體免疫功能，抑制腫瘤的生長，抑制肝脂和膽固醇的增長，對金黃色葡萄球菌等細菌有極強的抑制作用[4-5]。西湖龍井的明前開山茶一直都是研究人員和茶葉加工企業關注的焦點，而且明前開山茶價格也十分昂貴。該研究采摘的西湖龍井茶為杭州西湖龍井茶原產地龍塢保護區的明前開山茶。目前對EGCG的分離提取及功效研究的文獻較多，但對明前西湖龍井茶青葉中EGCG含量的研究鮮有文獻報道。筆者通過對龍塢同一保護區的大茶樹和小茶樹的西湖龍井茶EGCG含量測定，為人們的實際需要提供參考，為以茶葉加工企業提供試驗依據。

1材料與方法

1.1材料研究對象：西湖龍井茶青葉，杭州龍塢明前采集。主要試劑：表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG），上海源葉公司，含量98%；甲醇為色譜純試劑；其他試劑均為分析純；試驗用水為艾柯超純水。主要儀器：Agilent1260型高效液相色譜儀，Agilent公司，包括DAD 檢測器，Agilent chem工作站；電子分析天平，賽多利斯；恒溫水浴鍋，精宏公司；真空干燥箱，天呈；RA25AA旋轉蒸發儀，上海亞榮。

1.2 方法

1.2.1色譜條件。色譜柱為Agilent C18色譜柱（4.6 mm ×150 mm，5 μm），流動相：甲醇∶水（2%乙酸）15∶85；流速：1.0 ml/min；檢測波長：276 nm；柱溫：35 ℃。

1.2.2 對照品溶液的制備。精密稱取經真空干燥24 h處理后的15.2 mg表沒食子兒茶素沒食子酸酯對照品，置于100 ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液，于冰箱中低溫保存備用。表沒食子兒茶素沒食子酸酯濃度為152 μg/ml。

1.2.3 供試品溶液的制備。分別準確稱取樣品約1.0 g，置于500 ml平底燒瓶中，加入100 ml 80 ℃水，置85 ℃的水浴中加熱回流1 h，共水浴加熱回流2次，經過濾收集濾液，最后減壓濃縮濾液，定容至50 ml容量瓶中，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液待測。

2結果與分析

2.1目標組分的確定 按照“1.2”項色譜條件下，對照品溶液和供試品溶液分別進樣10 μl，DAD檢測器檢測分析，在波長為276 nm下是EGCG的最大吸收，DAD檢測器檢測記錄儲存200～400 nm的所有色譜，對照品與樣品茶的EGCG的保留時間都在8.3 min（圖1）。

2.2流動相的選擇 測定EGCG含量，流動相為甲醇∶水系統和甲醇∶水（2%乙酸）系統，進行對比試驗發現，2個系統都能使EGCG分離開來（分離度R>1.5），甲醇∶水系統中EGCG嚴重拖尾，而甲醇∶水（2%乙酸）系統中EGCG峰形比較好，故選擇甲醇∶水（2%乙酸）15∶85為該測定方法的流動相系統。

2.3線性關系試驗 精密吸取上述對照品溶液分析，進樣量分別為2、4、6、8、10、12、16、20 μl，測其峰面積，以標準溶液的進樣量X為橫坐標，以峰面積Y為縱坐標作圖，得到線性回歸方程為Y=774.33X-10.585，相關系數為r為1，表明EGCG在0.152～3.040 μg范圍內與峰面積之間線性關系良好。

2.4精密度試驗 精密吸取“1.2.2”項配制的對照品溶液10 μl進樣，依上述色譜條件測定，重復進樣5次，測定EGCG峰面積，RSD為0.38%，結果表明，儀器具有較好的精密度。

2.5穩定性試驗 分別取“1.2.3”項制備的大茶樹青葉、小茶樹青葉2種供試樣品溶液10 μl，于0、2、4、6、8、10 h進樣測定，各重復進樣6次，測定目標組分的含量，以考察供試品溶液的穩定性，10 h大茶樹茶和小茶樹樣品EGCG組分RSD分別為2.8%、3.1%。結果表明，供試品溶液在10 h內基本穩定。

2.6加樣回收試驗 精密稱取已知含量的茶樣品6份，分別精密加入一定量EGCG對照品，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，依上述色譜條件測定含量。結果顯示，該方法具有較高的準確度（表1）。注：A.對照品；B.大茶樹；C.小茶樹；1.EGCG。

2.7樣品中EGCG含量的測定 按照“1.2.3”項制備3個大茶樹和3個小茶樹西湖龍井茶葉供試品溶液，按“1.2.1”項色譜條件進樣測定，每樣重復進樣3次，求峰面積均值，按外標法計算其含量。大茶樹中EGCG 的含量為：14.151 mg/g（RSD 0.56%），15.534 mg/g（RSD 0.66%），13.526 mg/g（RSD 0.75%），平均含量14.404 mg/g；小茶樹中EGCG 的含量為：8.645 mg/g（RSD 0.56%），9.326 mg/g（RSD 0.59%），8957 mg/g（RSD 0.63%），平均含量8.976 mg/g。

3結論

采用HPLCDAD 法對大茶樹和小茶樹的西湖龍井茶中的EGCG 進行了含量分析，試驗結果表明，大茶樹西湖龍井茶青葉中EGCG平均含量為14.404 mg/g，含量較高；小茶樹西湖龍井茶青葉中EGCG平均含量為8.976 mg/g，比大茶樹含量低。該試驗為人們選擇茶葉原料提供參考，為企業對原料等級劃分提供了試驗依據。該測定茶中EGCG含量的方法操作簡單、重現性好、分析結果準確可靠，可用于原料茶的質量控制。

參考文獻

[1] 張龍，王飛娟，潘家榮，等.近紅外光譜和模式識別技術在西湖龍井與浙江龍井茶葉鑒別中的應用[J].紅外，2012，33（3）：44-48.

[2] 盧濤，蘭先秋，朱斌，等.不同茶多酚中兒茶素的測定及柱層析法提取EGCG的比較[J].化工進展，2008，27（5）：746-752.

[3] 王霞，高麗娟，林炳昌.表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）的分離與制備[J].食品科學，2005，26（9）：242-245.

[4] 梁曉嵐，陳春林.茶多酚的研究進展[J].茶葉科學技術，1994（1）：6-8.

[5] 張瑜，鄒國林，彭少君.表沒食子兒茶素沒食子酸酯研究進展[J].氨基酸和生物資源，1998，20（4）：51-54.