青海不同產(chǎn)區(qū)大黃的HPLC指紋圖譜的對比研究

摘要[目的]建立青海不同地區(qū)大黃的HPLC指紋圖譜。[方法]采用HPLC法測定青海地區(qū)唐古特大黃和掌葉大黃的HPLC指紋圖譜，并對其進(jìn)行相似度比較。[結(jié)果]青海不同采集地唐古特大黃和掌葉大黃的平均相似度都在90%以上，說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，它們之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別。[結(jié)論]采用HPLC法可以鑒別青海的不同大黃，方法簡便，圖譜重復(fù)性好。

關(guān)鍵詞青海；唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）；掌葉大黃（Rheum palmatum L.）；HPLC；指紋圖譜；相似度

中圖分類號S188文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）12-03477-02

作者簡介王寧芳（1964- ），女，陜西華縣人，教授，從事有機(jī)合成及分析研究。

大黃系蓼科多年生高大草本植物，又名火參、金木、破門、綿紋。藏語叫“君木扎”。青海大黃生長于海拔2 000～3 500 m的高寒地帶，在高山灌叢和山坡草地常見。大黃（RADIX ET RHIZOMA RHEI ）是一味十分重要的中藥，同時也是藏醫(yī)、蒙醫(yī)常用的良藥。其有效成分主要是蒽醌類衍生物，如大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素和大黃素甲醚等，具有瀉熱通腸、涼血解毒和逐淤通經(jīng)等功能[1]。筆者采用高效液相色譜法測定青海不同產(chǎn)地大黃的指紋圖譜，并對其進(jìn)行相似度比較，以期為不同大黃的鑒別和質(zhì)量評價提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對象。不同產(chǎn)地的唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）和掌葉大黃（Rheum palmatum L.），見表1～2。

1.1.2主要儀器。美國Waters2695 高效液相色譜儀，購自美國Waters公司；HH26 數(shù)顯恒溫水浴鍋、二極管陣列檢測器和電子天平，均購自常州國華電器有限公司。

1.1.3主要試劑。無水甲醇為色譜純，購自山東禹王公司；冰醋酸為分析純，購自北京化工廠；重蒸去離子水，實驗室自制。

1.2方法

1.2.1色譜分析條件。Inertsil ODS3分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），濃度1%HAcH2O與濃度1%HAcCH3CN梯度洗脫；流速為1 ml/min；柱溫為30 ℃；檢測波長為280 nm；參比波長為380 nm。

1.2.2大黃待測液的制備[2]。將唐古特大黃粉粹，粉末過20目篩，精密稱量0.500 g分別加40 ml無水甲醇，水浴加熱回流1 h，過濾；殘渣中加40 ml無水甲醇，繼續(xù)水浴加熱回流1 h，過濾，合并2次濾液。在蒸發(fā)皿中，水浴蒸發(fā)溶劑至干，殘渣中加無水甲醇溶解并定容至25 ml，搖勻，通過孔徑為045 μm 、的微孔濾膜過濾，所得濾液為唐古特大黃待檢測液。同法，可得掌葉大黃待檢測液。

1.2.3樣品的測定。取供試品溶液適量，在“1.2.1”色譜條件下進(jìn)樣進(jìn)行分析，記錄色譜圖。

2結(jié)果與分析

2.1唐古特大黃的HPLC指紋圖譜圖1表明，唐古特大黃藥材指紋圖譜具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，5批唐古特大黃藥材樣品指紋圖譜的特征性和專屬性很強(qiáng)，共有峰穩(wěn)定性很良好，較全面地反映唐古特大黃的化學(xué)信息，可作為唐古特大黃藥材的專屬性指紋圖譜[3]，為青海地區(qū)不同海拔唐古特大黃藥材品質(zhì)提供有效、穩(wěn)定的質(zhì)量評估依據(jù)。

圖1唐古特大黃的指紋圖譜2.2掌葉大黃的HPLC指紋圖譜從指紋圖譜的峰差異評價及整體性評價可以看出，各地掌葉大黃之間相似度較高，它們之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別（圖2）。

圖2掌葉大黃指紋圖譜特征峰2.3大黃樣品相似度比較由表3可知，不同產(chǎn)地、不同采集時間的樣品的指紋圖譜的相似度都在90 %以上，說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性；采用AFLP分析唐古特大黃掌葉大黃間的親緣關(guān)系，發(fā)現(xiàn)不同種大黃和不同來源的大黃樣品間除了具有共有帶外，還有一些特異帶，說明種間甚至不同來源的樣品間都有一定程度的特異性[4]。

2.4唐古特大黃、掌葉大黃樣品與大黃對照藥材之間的相似度比較由表3可知，青海不同采集地唐古特大黃和掌葉大黃的平均相似度都在90%以上，說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，它們之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別。

由于陸生植物在生長過程中，一方面從大氣中吸收所需物質(zhì)，另一方面也必須從土壤中吸收礦物元素，由于土壤中所含有的元素成分的差異以及植物本身對元素吸收選擇力的不同，植物對礦質(zhì)養(yǎng)分的吸收具有選擇性、累積性、基因型差異[ 5]，使得青海不同種大黃中各種礦物質(zhì)元素含量具有明顯的差異性[6]；青海主要生長于海拔2 000～4 200 m的林緣、林下、溝谷灌叢及草地，大黃的生長因海拔增高、紫外線強(qiáng)烈、晝夜溫差大而生長緩慢，但主要成分的積累相對增高而質(zhì)量偏好；相反，低海拔地區(qū)因環(huán)境優(yōu)異，生長快，主要成分積累都相對偏低而質(zhì)量偏差[7]。

3討論

從大黃樣品的高效液相色譜指紋圖譜中可以看到，不同產(chǎn)地、不同采集時間的樣品的指紋圖譜的相似度都在90%以上，這說明大黃指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性；從指紋圖譜的峰差異評價及整體性評價可以看出，各地樣品之間相似度較高，2種大黃樣品之間既有較好的相關(guān)性，又有區(qū)別。采用HPLC法測定青海不同產(chǎn)地的不同大黃，方法簡便，圖譜重復(fù)性好，為青海大黃藥材質(zhì)量控制提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1] 曹緯國，劉志勤，紹斌，等.青海省道地藥材唐古特大黃中4 種蒽醌衍生物的含量測定[J].西北植物學(xué)報，2004，24（11），2140-2142.

[2] 陳斌 ，蔡寶昌，潘揚，等.不同產(chǎn)地掌葉大黃HPLC指紋圖譜的比較[J].中草藥，2003，34（5）：457-460.

[3] 李錦萍 ，陳桂琛 ，紀(jì)蘭菊，等.青海地區(qū)唐古特大黃藥材HPLC 指紋圖譜研究[J].中草藥，2006，37（5）：762-765.