氣相色譜法測定魚油保健品中EPA和DHA

王紅梅 劉曉嵐 張軼華

【摘 要】建立了氣相色譜法測定市場上不同廠家魚油制品中EPA和DHA含量的方法。采用皂化反應-甲酯化反應對樣品進行前處理，用外標法進行定量測定。EPA和DHA在0.03mg/ml～0.5mg/ml范圍內線性關系良好（γ=0.9996，0.9991），回收率在98.6%～99.8%之間。該方法操作簡單、快速，結果可靠，重現性好，可作為魚油制品質量評價的參考依據。

【關鍵詞】氣相色譜法；EPA；DHA；皂化反應-甲酯化反應

【文獻標識碼】B 【文章編號】1004-7484（2014）02-0722-01

長鏈多不飽和脂肪酸（LC-PUFA），是細胞膜的重要組成材料，對中樞神經和視網膜的發育及維持其正常生理功能具有相當重要的作用。魚油中富含LC-PUFA，尤其是其中所含的二十碳五烯酸（C20：5ω3， EPA）和二十二碳六烯酸（C22：6ω3， DHA）被稱為腦黃金，是在其它油脂中難以見到的。EPA和DHA的含量是決定魚油保健品價格的主要因素，因此研究測定EPA和DHA的測定方法十分必要。已有文獻報道EPA和DHA的測定方法[1]，本文對樣品進行皂化反應-甲酯化反應，建立了簡便，快速準確的GC檢測方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 6890（美國）；標準品：EPA甲酯（貨號：C100MGU-99-M），DHA甲酯（貨號：C100MGU-84-M）；正己烷，甲醇均為色譜純（德國Merck公司）；水為二次蒸餾水。

標準儲備液：準確稱取EPA甲酯和DHA甲酯各0.1g置100ml容量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度。

1.2 分析條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：HP-FFAP彈性石英毛細管柱（30mⅹ0.53mmⅹ1.00μm）；柱溫：200℃；進樣口溫度：230℃；檢測器溫度：230℃。載氣及流速：高純氮氣，純度≥99.999%，6.0ml/min；分流比：5：1；進樣量：1μl。

1.2.2 樣品處理

取樣品5-10粒，內容物混勻，精密稱取約0.2g適量置100ml容量瓶中，加適量正己烷溶解，加入2mol/L氫氧化鈉-甲醇溶液2ml，充分震蕩10min，放入60℃的水浴中加熱2min，冷卻至室溫，再加入2mol/L鹽酸-甲醇溶液4ml，充分震蕩10min，放入60℃的水浴中加熱2min，棄去下層溶液，再加2ml蒸餾水洗凈并去除水層，吸出正己烷至裝有無水硫酸鈉的漏斗中脫水，將脫水后的溶液定溶至100ml容量瓶中，作為供試品溶液。

2 結果與討論

2.1 樣品處理方法的優化

在對油脂中的EPA和DHA分析過程中發現，油脂中的脂肪酸以脂肪酸甘油酯的形式存在，但其沸點很高，不利于色譜分析。由于脂肪酸甲酯的揮發性較高能夠保證優良的色譜峰形，便于色譜分析，因此采用甲酯化方法將甘油酯轉化為甲酯。酯化方法的選擇對于分析結果的影響使明顯的，有文獻報道對魚油制品直接測定或用氫氧化鉀-甲醇直接甲酯化[2，3]，試驗發現這兩種方法的測定結果偏低且回收率低。先用氫氧化鈉-甲醇溶液進行皂化反應，再用鹽酸-甲醇溶液進行甲酯化反應，測定結果較高，用水凈化并用無水硫酸鈉脫水后，溶液pH接近中性，可延長色譜柱的壽命，且能避免色譜峰拖尾。樣品圖譜見圖1.

2.2 色譜條件的優化

試驗發現柱溫對EPA甲酯和DHA甲酯的保留時間影響很大，當柱溫設為220℃，保留時間依次為4.2min和7.8min，但與相鄰雜質峰均不能完全分開；柱溫設為200℃時，EPA甲酯和DHA甲酯均與相鄰雜質峰完全分開。

2.3 線性范圍及檢出限

取1.1項下標準儲備液，依次量取0.3ml，1ml，3ml和5ml置10ml容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，分別進樣1μl，繪制標準曲線。以峰面積對質量濃度進行線性回歸，EPA甲酯和DHA甲酯線性方程依次為A=5847.4C-46.358，γ=0.9996；A=5011.8C+24.364，γ=0.9991，表明在0.03mg/ml～0.5mg/ml范圍內線性關系良好。根據3倍信噪比計算檢出限依次為0.3μg/ml和0.4μg/ml。

2.4 重復性和穩定性

按2.1項下方法處理樣品（×××牌魚油軟膠囊），平行處理6份，計算EPA和DHA的含量，RSD依次為1.0%和1.2%，說明色譜系統重復性良好。取重復性試驗的同一份供試品溶液，常溫下放置0，2，4，8h進樣分析，記錄峰面積，RSD為2.1%，表明供試品溶液穩定性良好。

2.5 回收率

以加標回收率試驗考察方法的準確性。按2.1項下方法處理樣品（×××牌魚油軟膠囊），分別加入標準溶液適量，用外標法以2.3項下的回歸方程計算各成分的含量，并計算回收率，結果顯示回收率為98.6%～99.8%，RSD均小于3.0%，符合含量測定的準確性要求。

2.6 樣品測定

以建立的方法測定11批次不同廠家魚油制品的EPA和DHA的含量，結果見表2。從表2可以看出市場上的魚油制品的質量良莠不齊，亟待建立有效的測定方法，以保證保健品的質量。

3 結論

建立了氣相色譜法測定魚油制品中的EPA和DHA含量。用皂化反應-甲酯化反應對樣品進行前處理，方法簡單、快速，結果可靠，重現性好，可應用于測定市場上不同廠家的魚油制品。樣品結果顯示，魚油制品中EPA和DHA的含量差異較大，提示保健品質量有待規范。

參考文獻：

[1] Mu Z C， Sun J W. Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine. （牟志春，孫建武.中國國境衛生檢疫雜志），1998，21（6）：328

[2] Zhuang J Y， Feng Z Q ， Xie Z Y. Modern Food Science and Technology （莊俊鈺，馮志強，謝忠陽.現代食品科技），2009，25（11）：1363

[3] Mu J， Qu Z W. Food Science. （牟峻，曲忠文. 食品科學），2001，22（10）：76