MMP—9、TIMP—1對(duì)冠心病患者斑塊穩(wěn)定性的診斷價(jià)值探討

李璇 王海曙 林憲如 王守東 吳娜

【摘 要】目的：探討基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-9、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子（TIMP）-1在診斷不穩(wěn)定性冠脈病變中的價(jià)值。方法：采用夾心酶聯(lián)免疫法測(cè)定42例急性冠脈綜合征（ACS）患者和29例穩(wěn)定性心絞痛（SAP）患者血清MMP-9、TIMP-1水平進(jìn)行對(duì)比分析，對(duì)ACS中的不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）亞組及SAP組患者血清MMP-9及TIMP-1水平與冠脈病變Califf危險(xiǎn)積分作相關(guān)分析，計(jì)算MMP-9及TIMP-1設(shè)定值診斷急性冠脈綜合征的敏感性及特異性。結(jié)果： ACS組患者M(jìn)MP-9較SAP組明顯增高（P<0.01），而TIMP-1則較SAP組顯著降低（P<0.01）；UAP組和SAP組患者血清MMP-9與冠脈病變積分均呈明顯正相關(guān)（P<0.01），兩組患者血清TIMP-1與冠脈病變積分均呈明顯負(fù)相關(guān)（P<0.01）；若以MMP-9>500ng/ml或TIMP-1<200ng/ml作為診斷ACS的指標(biāo)，則診斷的敏感性均為85.7%，特異性均為82.8%。結(jié)論：MMP-9、TIMP-1與急性冠脈綜合征有關(guān)，可作為鑒別冠心病患者斑塊是否穩(wěn)定的診斷指標(biāo)之一。

【關(guān)鍵詞】基質(zhì)金屬蛋白酶-9；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1；急性冠脈綜合征；穩(wěn)定性心絞痛；不穩(wěn)定斑塊

【中圖分類號(hào)】R541.4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）02-0560-02

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一組鋅離子依賴性的蛋白水解酶家族，是細(xì)胞外基質(zhì)降解及重構(gòu)的重要介質(zhì)。初步研究表明，MMPs與動(dòng)脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)[1，2]。本文探討MMP-9及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）與急性冠脈綜合征患者冠脈病變的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象：包括急性冠脈綜合征（ACS）組和穩(wěn)定性心絞痛（SAP）組，所有病例均符合2000年AHA/ACC急性冠脈綜合征指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.1.1 ACS組：選擇收住我院心內(nèi)科的ACS患者42例，男性27例，女性15例，年齡33～78歲，平均年齡63.7±12.1歲。其中不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）亞組患者21例，男性13例，女性8例，年齡33～75歲，平均年齡62.1±12.6歲。

1.1.2SAP組：為同期收住我科的SAP患者，計(jì)29例，男性18例，女性11例，年齡36～76歲，平均年齡61.3±13.3歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)本采集 所有患者入院后次日清晨（24小時(shí)內(nèi)）抽取外周靜脈血4ml，注入標(biāo)有基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1 （TIMP-1）的試管中，30分鐘內(nèi)送標(biāo)本至實(shí)驗(yàn)室，以1000x g離心15分鐘，抽取血漿置-20℃低溫冰箱統(tǒng)一編號(hào)保存，血標(biāo)本收集成批后同一測(cè)定MMP-9及TIMP-1的水平。

1.2.2標(biāo)本測(cè)定：MMP-9、TIMP-1測(cè)定：均采用夾心酶聯(lián)免疫法測(cè)定，測(cè)定步驟為：⑴預(yù)先分別于兩測(cè)定管內(nèi)加入MMP-9、TIMP-1測(cè)定稀釋液100μl；⑵分別于兩測(cè)定管內(nèi)加MMP-9、 TIMP-1樣品血清和標(biāo)準(zhǔn)品各100μl，在振板上室溫下孵育2小時(shí)；⑶分別用400μl緩沖液沖4遍；⑷分別加MMP-9 HRP多抗、TIMP-1抗體對(duì)照品200μl，在振板上室溫孵育1小時(shí)；⑸400μl緩沖液沖4遍；⑹分別加顯色劑200μl，在benchtop上室溫孵育30分鐘（避光）；⑺分別加終止液50μl，30分鐘內(nèi)，450nm讀數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS11.0軟件，各組數(shù)據(jù)以x±s表示，用t檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用直線相關(guān)，P<0.05為差異有顯著性，P<0.01為差異有極顯著性。

2 結(jié)果

2.1 ACS組與SAP患者吸煙率、糖尿病患病率、高血壓患病率及各項(xiàng)血脂指標(biāo)比較差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2血清MMP-9及TIMP-1水平與冠心病類型的關(guān)系：見表2。由表中可見，ACS組MMP-9較SAP組明顯增高（P<0.01），而TIMP-1則較SAP組顯著降低（P<0.01）。

MMP-9是明膠酶中的一種，是MMPs中最常見的酶之一。實(shí)驗(yàn)證明，粥樣斑塊中的巨噬細(xì)胞可分泌多種MMPs，如MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-12、MMP-13等[5， 6]。不僅如此，巨噬細(xì)胞還分泌多種細(xì)胞因子，如IL-1β、TNF–α，以自分泌和旁分泌形式作用于內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞。循環(huán)中的單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附，在血管壁中遷移、吞噬脂質(zhì)衍化為巨噬泡沫細(xì)胞的過程中可分泌大量的MMPs。病理研究顯示人冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊MMP-1、MMP-2、MMP-3及MMP-9表達(dá)均有增加[5]。TIMP-1是一種糖基化蛋白，主要與MMP-1、MMP-9結(jié)合形成1：1化學(xué)復(fù)合物[7]，從而阻斷纖維帽的降解。本研究采用美國R&D Systems公司的MMP-9、TIMP-1試劑盒及夾心酶聯(lián)免疫法作為測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)ACS組與SAP組不但MMP-9、TIMP-1水平明顯不同，且兩組重疊極少、有分開趨勢(shì)，因而認(rèn)為，確定某一MMP-9及TIMP-1界限值作為區(qū)分ACS與SAP病變是可行的。本研究中，選擇MMP-9>500ng/ml或TIMP-1<200ng/ml作為診斷冠脈病變不穩(wěn)定性的指標(biāo)，則診斷的敏感性均為85.7%，特異性均為82.8%。由于這兩項(xiàng)指標(biāo)的診斷敏感性和特異性均較高，我們認(rèn)為，可將其作為臨床診斷不穩(wěn)定性斑塊的指標(biāo)，以增加臨床對(duì)不穩(wěn)定性斑塊的檢出率。

參考文獻(xiàn)：

[1] Hojo Y， Ikeda U， Ueno S， et al. Expression of matrix metalloproteinases in patients with acute myocardial infaction. Jpn Circ J， 2001， 65： 71-75

[2] Jiang X， Zeng HS， Guo Y， et al. The expression of matrix metalloproteinases-9， transforming growth factor-β1 and transforming growth factor-β receptor Ⅰ in human atherosclerotic plaque and their relationship with plaque stability. Chinese Medical Journal， 2004， 117（12）： 1825-1829

[3] Gibbons RJ， Abrams J， Chatterjee K， et al. ACC/AHA 2002 Guideline Update for the Management of patients With chronic Stable Angina. Circulation， 2003， 107： 149-158.

[4] Califf HR， Phillips HR， Hindman MC. Prognostic value of a coronary artery jeopardy score. J Am Coll Cardiol， 1985， 5： 1055～1063.

[5] Galis ZS ， Sukhova GK， Lark MW， et al. Increased expression of matrix metalloproteinase and matrix degrading activity in vulnerable regions of human atherosc lerotic plaques. J Clin Invest 1994， 94（6）： 2493-2503

[6] Crisby M， Nordin-Frednksson G， Shah PK， et al. Pravastatin treatment increases collagen content and decreasea lipid content， inflammation， metalloproteinases， and cell death in human carotid plaquea： implications of plaque stabilization. Circulation， 2001， 103： 926-933

[7] Visse R， Hideaki N. Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases structure， function， and biochrmistry. CircRes， 2003， 92： 827-831