不同外植體及冷藏處理對(duì)華中枸骨組織培養(yǎng)的影響

范淑芳

摘要[目的]研究不同外植體及冷藏處理對(duì)華中枸骨組織培養(yǎng)的影響。[方法]以華中枸骨帶芽新梢莖段為外植體，考察外植體的取材時(shí)間、部位以及4 ℃冷藏處理對(duì)其初代培養(yǎng)的影響。[結(jié)果]華中枸骨以帶芽的新梢莖段作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，以春季采取植株中上部枝條為宜，其中春季萌條的芽增殖倍數(shù)可達(dá)到4，中上部萌條的芽萌動(dòng)率可達(dá)到45%。適當(dāng)?shù)睦洳靥幚韺?duì)外植體的消毒以及芽的萌動(dòng)有利，4 ℃冷藏處理14 h后的消毒成功率最高，可達(dá)到92%；冷藏處理22 h的芽萌動(dòng)率最高，可達(dá)到18%。[結(jié)論]華中枸骨組織培養(yǎng)中外植體最好于春季選取植株中上部萌發(fā)的新梢頂芽；華中枸骨芽的萌動(dòng)率隨冷藏時(shí)間的增加呈線性增長(zhǎng)，可能與低溫打破休眠有關(guān)。

關(guān)鍵詞華中枸骨（Ilex centrochinensis）；組織培養(yǎng)；外植體；冷藏處理

中圖分類號(hào)S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）07-02000-02

（Ilex）植物，又稱針齒冬青、小果冬青，因其形態(tài)特征及其功用又被形象地稱為苦荊茶[1]。該植物枝葉繁茂，碧綠常青，黃花紅果，是一種優(yōu)良的園林綠化植物；同時(shí)，該植物富含多種營(yíng)養(yǎng)元素，可以藥茶兩用，具有較高的保健功能。該植物資源稀少，種子繁殖困難，扦插繁殖也難生根，關(guān)于其組培快繁的研究鮮有報(bào)道。筆者主要針對(duì)帶芽新梢莖段的取材季節(jié)、部位以及外植體冷藏處理展開系統(tǒng)地試驗(yàn)，以期找到最佳的取材方法和處理技術(shù)，提高初代培養(yǎng)的成功率，為其組培快繁服務(wù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1 研究對(duì)象。華中枸骨，經(jīng)鑒定為為冬青科（Aquifoliaceae）冬青屬（Ilex）植物華中枸骨（Ilex centrochinensis）。

1.1.2 主要試劑。所用試劑均為國產(chǎn)分析純，市售。

1.2方法

1.2.1 不同時(shí)間外植體的采集[2]。華中枸骨每年春季和秋季均會(huì)萌發(fā)新梢，分別于4月初和9月末采取植株中上部長(zhǎng)約5～10 cm、未木質(zhì)化的新梢作為外植體，采取相同的消毒方法和培養(yǎng)方法，在繼代培養(yǎng)中分春季萌條和秋季萌條進(jìn)行后期生長(zhǎng)對(duì)比，每處理10瓶，每瓶3芽，重復(fù)3次。

1.2.2 不同部位外植體的采集[2]。于4月初采取外植體時(shí)分別從植株基部和中上部獲得，進(jìn)行相同的處理后接種培養(yǎng)。基部莖段每處理約20瓶，每瓶1芽，重復(fù)3次。中上部莖段每處理約30瓶，每瓶1芽，重復(fù)3次。

1.2.3 外植體的冷藏[3-4]。于4月初采取外植體時(shí)，將所采取的新梢培養(yǎng)于蒸餾水中，置于4 ℃冰箱中冷藏處理，根據(jù)試驗(yàn)進(jìn)程分別冷藏處理0、5、7、14、20、22和25 h，每處理約接種30瓶，每瓶1芽，重復(fù)3次。

2結(jié)果與分析

2.1采集時(shí)間對(duì)外植體后期生長(zhǎng)的影響 春季萌條與秋季萌條分別繼代培養(yǎng)若干代后對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)對(duì)比，周期為30 d。由表1可知，在春季萌條的繼代培養(yǎng)過程中，芽高、直徑、葉數(shù)以及芽的增殖倍數(shù)均較秋季萌條高。圖1表明，同樣的處理在初培中春季萌條較秋季萌條芽的誘導(dǎo)較為容易，生長(zhǎng)也較好，且春季萌條誘導(dǎo)的芽、葉多呈紅色，生長(zhǎng)幼嫩；在繼代中較多的春季萌條與秋季萌條芽的生長(zhǎng)差異較顯著（P<0.05），多數(shù)老化被淘汰。綜合考慮其生長(zhǎng)狀況，確定春季為華中枸骨較好的外植體取材時(shí)間。