乳清蛋白質粉免疫調節作用實驗研究

李彬 覃光球 張潔宏 何勵 黃瀟瀟

【摘 要】目的：評價乳清蛋白質粉的免疫調節作用。方法：以3334、1667、834 mg／kg?BW 三個劑量組的乳清蛋白質粉對小鼠連續灌胃30天，進行抗體生成細胞、碳廓清、NK細胞活性等7項免疫指標的測定。結果：樣品對小鼠的體重增長、臟體重比值和NK細胞活性無明顯影響；樣品能促進小鼠的脾淋巴細胞增殖轉化作用、遲發型變態反應和抗體生成細胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促進小鼠的單核-巨噬細胞的吞噬功能。結論：乳清蛋白質粉具有增強免疫力功能。

【關鍵詞】乳清蛋白質；免疫調節

【中圖分類號】R151.2 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）03-01106-02

近年來，牛奶中的特定成分由于具有較直觀的保健效果而逐漸受到人們的重視，甚至被開發成保健食品[1]。乳清蛋白是生產奶酪和凝乳過程中的副產品，再被認清其營養和保健作用之前，一度被人們當成垃圾產物。牛奶中主要含有兩類蛋白質，一類是酪蛋白，另一類是乳清蛋白。乳清蛋白質含有一系列具有提高免疫力功效的生物活性物質，包括乳鐵傳遞蛋白、?-乳球蛋白、?-乳白蛋白、糖聚肽和免疫球蛋白，等[2]。除此之外，乳清蛋白還具有抗氧化、抗高血壓、抗腫瘤、降血脂、抗病毒、抗細菌等方面的作用[3]。乳清蛋白已經被用于臨床上對癌癥、艾滋病、乙肝、心血管疾病、骨質疏松癥等疾病的輔助治療試驗之中，并收到了一定的療效[3]。本文通過脾淋巴細胞轉化、遲發型變態反應、抗體生成細胞、血清溶血素、碳廓清、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞、NK細胞活性等7項小鼠免疫指標的測定，研究以乳清濃縮蛋白為主要成分的乳清蛋白質粉對小鼠免疫功能的影響，為評價其免疫調節作用提供試驗依據。

1 材料和方法

1.1 材料

本試驗受試物為廣州某公司送檢的乳清蛋白質粉，受試物為乳黃色粉末，主要成分為乳清濃縮蛋白。生產批號為20090301，成人口服推薦劑量為167 mg/Kg?BW。試驗前，用純凈水配制成所需濃度溶液。

1.2 實驗動物及實驗環境

實驗動物選用廣西醫科大學實驗動物中心提供的清潔級健康昆明種小鼠，實驗動物生產許可證號為SCXK(桂)2009-0002，實驗動物質量合格證號為NO.0001254。實驗動物室溫度為22～25℃，相對濕度為55%～70%。

1.3實驗方法

1.3.1 分組和劑量設置 實驗動物240只，體重18-22 g，分5組，每組48只小鼠。其中，第一組進行ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗、NK細胞活性測定，第二組進行進行遲發型變態反應實驗，第三組進行臟/體比值、血清溶血素和抗體生成細胞數測定，第四組進行碳廓清實驗，第五組進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗。設3334、1667、834 mg/Kg?BW（分別相當于成人口服推薦用量的20、l0和5倍)三個劑量組和1個陰性對照組，每組12只小鼠。以0.1 ml/10 g?BW的體積給予相應劑量組小鼠灌胃，陰性對照組給予等體積純凈水。每天1次，連續灌胃30天。

1.3.2實驗方法 采用MTT法檢測ConA 誘導的小鼠淋巴細胞增殖轉化功能，耳腫脹法檢測小鼠的遲發型變態反應、Jerne 改良玻片法檢測小鼠抗體生成細胞數、血凝法檢測小鼠血清溶血素水平、半體內法檢測小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力、內眥靜脈注射法檢測碳廓清能力[4]、乳酸脫氫酶測定法檢測NK 細胞活性。實驗主要參照GB15193-2003的相關試驗方法進行[5]。

1.4主要儀器設備和試劑

實驗主要儀器設備包括電子分析天平、離心機、潔凈工作臺、二氧化碳培養箱、恒溫水浴箱、顯微鏡、半自動生化儀、酶標儀等。

實驗主要試劑包括綿羊紅細胞（SRBC）、Hanks 培養液、RPMI1640 培養液、小牛血清、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白（ConA）、1％ 冰醋酸、1 mol/L HCL、異丙醇、MTT、DNFB、PBS 緩沖液（pH 7.2～7.4）、補體（豚鼠血清）、SA 緩沖液、瓊脂糖、YAC-1 細胞、乳酸鋰、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I、0.2 mol/L Tris-HCL 緩沖液、1％ NP40、印度墨汁、雞紅細胞、Gimsa 染液等。

1.5 數據統計

應用統計軟件SPSS 16.0對試驗數據進行單因素方差分析和組間比較。

2 結果

2.1 樣品對小鼠體重和臟器的影響

實驗期間受試動物未見中毒癥狀，無死亡。各劑量組小鼠的體重、增重、胸腺體重比和脾臟體重比與陰性對照組相比差別無統計學意義（P > 0.05），表明該樣品對小鼠的體重增長和免疫器官的臟體比值無明顯影響（表1）。